Ta 65: TA-65®MD АО «Мединторг» / AO Medintorg

Содержание

TA-65®MD АО «Мединторг» / AO Medintorg

TA-65® – это уникальная органическая молекула с установленной биологической активностью, полученная методом очистки и последующей концентрации одного из компонентов, обнаруженных в корне астрагала. В процессе производства TA-65® используется технология, повышающая биодоступность молекулы-активатора теломеразы. При приеме внутрь TA- 65® попадает в кровоток и достигает различных органов и систем организма. Согласно проведенным в США исследованиям, TA-65® вызывает наращивание длины коротких теломер и предотвращает связанные с этим повреждения ДНК, что позволяет клеткам организма поддерживать процессы клеточного деления на физиологическом уровне. Данное обстоятельство демонстрирует, что механизм действия TA-65® реализуется посредством активации теломеразы.
В 2009 году за открытие, объяснившее механизм защиты концевых участков хромосом с помощью теломер и роль фермента теломеразы в этом процессе, группе ученых была присуждена Нобелевская премия в области физиологии и медицины.

По имеющимся сегодня представлениям, процесс обратимости старения представляется комплексным и зависит от ряда факторов, одним из которых являются теломеры.

Теломеры – это концевые участки хромосом, отвечающие за поддержание целостности ДНК и представляющие собой повторяющуюся последовательность примыкающих друг к другу нуклеотидов. Теломеры играют важную роль в процессе клеточного старения. Каждая клетка человеческого организма содержит 92 теломера, выполняющих функцию биологических часов. При каждом делении клетки теломеры укорачиваются, достигая в определенный момент критического уровня, при котором клетка перестает нормально функционировать или погибает.

Теломераза – это фермент, который поддерживает длину теломер, предотвращая, таким образом, процессы биологического старения и гибели клеток. В большинстве клеток нашего организма ген, ответственный за производство фермента теломеразы, в обычных условиях не активен.

Результаты исследований
В ряде работ указывается на наличие связи между сокращением длины теломер и развитием целого ряда дегенеративных заболеваний, приводящих к ухудшению состояния здоровья и сокращению продолжительности жизни. В 2007 году, после 5 лет научных разработок и широкомасштабных исследований безопасности, TA- 65® появился на рынке США в качестве биологически активной добавки к пище. За это время среди лиц, принимавших TA- 65®, не было зарегистрировано ни одного сообщения о серьезных нежелательных явлениях. Как свидетельствуют результаты исследований, применение TA- 65® увеличивает длину теломер, достигших критического уровня, и способствует:

восстановлению активности иммунной системы
улучшению состояния кожи
укреплению костной ткани
повышению подвижности сперматозоидов

Результаты экспериментальных исследований указывают также на тот факт, что функциональная активность теломеразы предотвращает дегенеративные изменения в репродуктивной системе и тканях мозга.

Рекомендации по применению
Взрослым «TA- 65® МД 250 единиц» следует принимать от 1 до 4 капсул в день утром натощак (за 1 час до еды) или вечером перед сном (не ранее, чем через 2 часа после приема пищи). При необходимости суточную дозу можно разделить на два приема — утром и вечером. Подбор дозы осуществляется индивидуально в зависимости от возраста и состояния здоровья конкретного потребителя. За профессиональной консультацией рекомендуется обратиться к врачу.

Доза TA-65®
Возраст 40-50 лет — 1 капсула в сутки
Возраст 50-60 лет — 2 капсулы в сутки
Возраст 70 лет и старше, а также потребители более молодого возраста, имеющие критически короткие теломеры (на основании данных, подтвержденных результатами лабораторной диагностики) — 4 капсулы в сутки

Продолжительность приема ТА-65 — 3 месяца.

Прием рекомендуется повторять после двухнедельного перерыва.

Противопоказания
Индивидуальная непереносимость компонентов, беременность, кормление грудью, лицам моложе 25 лет.

Перед применением рекомендуется проконсультироваться с врачом.
Не является лекарством.

Подробнее о клеточном омоложении и теломерах читайте на ta-65.ru

автогаджеты, бытовая техника, электроника, репортажи с производст и международных выставок

Гироскутер Digma TA-65 стоит дешевле аналогичных устройств, представленных на российском рынке, что вызывает у покупателей недоумение. Мы так привыкли, что дешевое не может быть хорошим, значит есть подвох. Предлагаю детально изучить гироскутер и попытаться выяснить причины его невысокой стоимости.

Внешний вид и комплектация

Корпус гироскутера изготовлен из ABS-пластика и окрашен яркими принтами. Такой материал используют в автомобилестроении, он легкий и прочный. Весит устройство всего лишь 8,5 кг. Колеса отлиты из резины и украшены хромированными накладками. Педали резиновые, чтобы ноги не соскальзывали.

В комплект поставки входит удобная сумка для хранения и транспортировки гироскутера. С ней гораздо удобней брать устройство с собой в парк и возить в автомобиле.

Характеристики и функционал

Мощность гироскутера составляет 200 Вт, что характеризует его как устройство начального уровня. Максимальная скорость ограничена 12 км/ч, но теоретически его можно разогнать и до 15 км/ч. Проехать на одном заряде можно до 12 км, на полную подзарядку уходит чуть больше двух часов. Есть встроенная Bluetooth-колонка.

Опыт эксплуатации

Научиться ездить на гироскутере не тяжело, когда устройство хорошо держит баланс и не разгоняется слишком быстро. Данная модель как раз разработана для начинающих пользователей и хорошо подходит для детей. Яркая круговая подсветка повышает безопасность если кататься в тёмное время.

Отлитые из резины колеса хоть и мягкие, но все дорожные неровности чувствуются хорошо. Поэтому гироскутер подходит исключительно для ровных дорог. Устройство хоть и способно преодолевать уклоны в 15 градусов, на бездорожье на нём лучше не выезжать.

Выводы

Гироскутер Digma TA-65 стоит выбрать людям, которые ищут недорогое решение для своего ребенка. По ходовым характеристикам устройство не уступает моделям известных производителей. Среди преимуществ: яркий корпус из легкого и прочного ABS-пластика, светодиодная подсветка и чехол для транспортировки. Подойдет гироскутер не только детям, но и взрослым, самое главное не забывать, что грузоподъемность не превышает 100 кг.

Почему стоит выбрать гироскутер Digma TA-65

Недорогая модель, которая не уступает аналогам известных производителей.

Корпус изготовлен из прочного и легкого ABS-пластика.
Светодиодная подсветка делает гироскутер заметным в тёмное время.
Комплект поставки дополнен удобным чехлом для хранения и переноски гироскутера.

Поделиться ссылкой:

Клинические исследование здоровый: TA-65MD, Placebo — Реестр клинических исследований

Критерии включения:

1. Здоровые взрослые мужчины или женщины, в зависимости от истории болезни и текущего статуса.

2. Возраст 45-75 лет (включительно на момент Скрининга).

3. Добровольное согласие и методы заполнения подписанной ICF (формы информированного согласия).

4. ИМТ от 18 до 40 кг / м2 (включительно на момент скрининга).

5. Субъекты, способные понимать и соблюдать требования протокола, инструкции и ограничения, установленные протоколом.

—

Критерий исключения:

1. Анамнез или наличие клинически значимых сердечно-сосудистых, легочных, респираторных заболеваний, печеночные, почечные, гематологические, желудочно-кишечные, эндокринные, иммунологические, дерматологические, неврологическое или психическое заболевание, которое, по мнению исследователя, поставить под угрозу безопасность объекта или повлиять на достоверность результатов исследования.

2. История ВИЧ, гепатита B или гепатита C.

3. Женщины, которые беременны, планируют забеременеть во время исследования, или грудное вскармливание.

4. Недавнее или текущее заболевание, которое может существенно повлиять на фармакодинамику. ответить или поставить под угрозу безопасность субъекта или повлиять на валидность исследования приводит заключение Следователя. (например, условия, требующие принятия мочегонные препараты и / или кардиостимуляторы.)

5. Прием исследуемого продукта в течение 30 дней до визита для проверки.

6. История аллергической реакции на исследуемые продукты или ингредиент (ы) или на сопоставимые продукты по мнению исследователя.

7. История наркотической или алкогольной зависимости или злоупотребления в течение 1 года до первого дня продукта. администрирование до окончания обучения (EOS).

8. Сдача крови в течение 30 дней или плазмы в течение 7 дней до первого дня продукта. администрирование через EOS.

9. Непереносимость венепункции или невозможность проглотить капсулы.

—

TA650 N-ROCKY ENGINE VALVE

Для бюджетных организаций (государственных заказчиков):

Наша компания «Детали моторов» есть на “Портале Поставщиков” подробнее…

Наша компания участвует в тендерах и работает в соответствии с федеральными законами №44-ФЗ и № 223-ФЗ подробнее…

Контакты компании:

+7(925)505-38-70
+7(929)931-12-53

e-mail: [email protected]
e-mail: [email protected]

Фильтр

срок доставки
Доступное количество
Сбросить

Если Вас не устроила наша цена или Вы нашли дешевле, позвоните нам по телефону +7 (499) 165-59-10 и мы постараемся предложить Вам лучшую цену!

*ВНИМАНИЕ! Условия поставки, указанные на сайте, ориентировочные и не являются офертой (значение этого термина дано в статьях 429 и 435 ГК РФ). Конкретные условия поставки, во избежание разногласий, просим уточнять дополнительно у менеджеров компании.

Комбинированные балансировочные регулирующие клапаны — TA-Modulator

Балансировочный и регулирующий клапан, не зависящий от перепада давления, для пропорционального регулирования

Клапан с уникальной равнопроцентной регулирующей характеристикой. Он совместим с линейными пропорциональными или 3-точечными приводами. Встроенный регулятор перепада давления обеспечивает превосходное управление, устойчивость регулирования и автоматическое ограничение расчетного расхода. Измерение расхода и располагаемого давления дает возможность оптимизации и диагностики системы.

Ключевые особенности

Точное регулирование температуры

Обеспечивает уникальную форму EQM характеристики для пропорционального регулирования.

Точное регулирование

Равнопроцентная (EQM) характеристика с уникальной формой кривой позволяет получить в 6 раз больший рабочий ход штока, чем у клапанов с линейной характеристикой.

Быстрая гидравлическая балансировка

Автоматическое ограничение расхода при полностью открытом приводе защищает всю систему от перерасходов.

Простой поиск неисправностей

Измерение расхода и перепада давления помогает снизить энергопотребление насоса идает все необходимые данные для диагностики системы.

Технические характеристики

Область применения:

Системы тепло- и холодоснабжения.

Функции:

Регулирование EQM: DN 15-150 нормальный расход
Регулирование LIN: DN 100-150 высокий расход
Предварительная настройка (макс. расход)
Регулирование перепада давления
Измерение (ΔH, t, q)
Изоляция (для использования при обслуживании системы – смотрите «Класс герметичности»)

Диапазон размеров:

DN 15-150

Номинальное давление:

DN 15-50: PN 16
DN 65-150: PN 16, PN 25

Перепад давления (ΔpV):

Макс. перепад давления (ΔpV_макс):
DN 15-32: 600 кПа = 6 бар
DN 15-25: 400 кПа = 4 бар*
DN 40-50: 400 кПа = 4 бар
DN 65-150: 800 кПа = 8 бар
Мин. перепад давления (ΔpV_мин):
DN 15-20: 15 кПа = 0,15 бар
DN 25-32: 23 кПа = 0,23 бар
DN 40-150: 30 кПа = 0.30 бар
DN 100-125 HF: 55 кПа = 0.55 бар
DN 150 HF: 60 кПа = 0.60 бар
(Действительно для максимальной настройки, «полностью открыт». Другие настройки потребуют более низкого перепада давления; проверьте с помощью программного обеспечения «HySelect».)

ΔpV_max = максимальное допустимый перепад давления в клапане для выполнения всех заявленных характеристик.

ΔpV_min = минимально рекомендуемый перепад давления в клапане, для надлежащего контроля перепада давления.

*) С Δp вставкой PPS.

Диапазон расхода:

Расход (q_макс) может быть настроен в следующем диапазоне:

DN 15: 92 — 480 л/ч
DN 20: 200 — 975 л/ч
DN 25: 340 — 1750 л/ч
DN 32: 720 — 3600 л/ч
DN 40: 1000 — 6500 л/ч
DN 50: 2150 — 11200 л/ч
DN 65: 4150 — 24100 л/ч
DN 80: 5850 — 37300 л/ч
DN 100: 11700 — 51700 л/ч
DN 100 HF: 18000 — 75900 л/ч
DN 125: 15000 — 77300 л/ч
DN 125 HF: 23300 — 127000 л/ч
DN 150: 26100 — 126000 л/ч
DN 150 HF: 38800 — 190000 л/ч

q_max(q_макс) = л/ч для каждой предварительной настройки и при полностью поднятом штоке клапана.

Температура:

DN 15-32, DN 65-150:
Макс. рабочая температура: 120°C
Мин. рабочая температура: -20°C
DN 15-25 с Δp вставкой PPS, DN 40-50:
Макс. рабочая температура: 90°C
Мин. рабочая температура: -10°C

Среда:

Вода и нейтральные жидкости, водно-гликолевая смесь (0-57%).

(Для консультации по возможности использования клапанов в системах с другими средами обратитесь в офис IMI Hydronic Engineering)

Ход штока:

DN 15-20: 4 мм
DN 25-32: 6,5 мм
DN 40-50: 15 мм
DN 65-125: 20 мм
DN 150: 30 мм

Регулировочная способность:

DN 15-32: >75
DN 40-80: >125
DN 100-150: >150
DN 100-150 HF: >125

Класс герметичности:

Протечка через седло клапана ≤ 0,01% от максимального расхода (Макс. настройка) и правильном направлении потока. (Класс IV согласно EN 60534-4).

Характеристика:

Равнопроцентное модифицированное регулирование (EQM) с уникальной формой кривой лучше всего подходит для пропорционального управления.
DN 100-150 HF: Линейная.

Материал:

DN 15-32:
Корпус клапана: AMETAL^®Вставка клапана: AMETAL^® и PPS
Конус клапана: Латунь CW724R (CuZn21Si3P)
Шток: Нержавеющая сталь
Уплотнение штока: кольцо — EPDM
Вставка блока Δp: PPS и AMETAL^® или PPS
Мембрана: EPDM
Пружина: Нержавеющая сталь
Уплотнение О-образное: EPDM
DN 40-50:
Корпус клапана: AMETAL^®
Вставка клапана: AMETAL^®
Конус клапана: AMETAL^® и PTFE
Шток: Нержавеющая сталь
Уплотнение штока: кольцо — EPDM
Вставка блока Δp: PPS
Мембрана: EPDM
Пружина: Нержавеющая сталь
Уплотнение О-образное: EPDM
DN 65-150:
Корпус клапана: Ковкий чугун EN-GJS-400-15
Вставка клапана: Ковкий чугун EN-GJS-400-15 и латунь
Конус клапана: Нержавеющая сталь и кольцо — EPDM
Седло клапана: Нержавеющая сталь
Шток: Нержавеющая сталь
Уплотнение штока: EPDM
Вставка блока Δp: Ковкий чугун EN-GJS-400-15, нержавеющая сталь и латунь
Мембрана: Армированный EPDM
Пружина: Нержавеющая сталь
Уплотнение О-образное: EPDM

AMETAL^® — это разработанный компанией IMI Hydronic Engineering медный сплав, устойчивый к потере цинка.

Обработка поверхностей:

DN 15-50: Без покрытия
DN 65-150: Окраска методом электрофореза

Маркировка:

Черное идентификационное кольцо на измерительном штуцере: TA-Modulator и DN.
DN 15-32: TA, IMI, PN, DN и стрелка обозначающая направление потока. Серый диск для настройки.
DN 40-50: IMI TA, PN, DN, размер в дюймах, место происхождения и стрелка обозначающая направление потока. Оранжевый диск для настройки.
DN 65-150: IMI TA, DN, размер в дюймах, материал и стрелка обозначающая направление потока. Этикетка с технической спецификацией, местом происхождения и CE. Оранжевый диск для настройки.

Соединение:

DN 15-50: Наружная резьба выполнена в соответствии с ISO 228.
DN 65-150: Фланцы в соответствии с EN-1092-2, тип 21. Длина в соответствии с EN 558, серия 1.

Соединение с приводом:

DN 15-32: M30x1.5, push
DN 40-50: M30x1.5, push/pull
DN 65-150: 2xM8, push/pull

Приводы:

DN 15-20:
TA-Slider 160, EMO TM, EMO 3.
DN 25-32:
TA-Slider 160, TA-MC50-C*.
DN 40-50:
TA-Slider 500, TA-Slider 750*.
DN 65-125:
TA-Slider 750, TA-MC100 FSE/FSR (с возвратной пружиной).
DN 100-125 HF:
TA-Slider 750 ΔpV ≤ 4 bar, TA-Slider 1250 ΔpV ≤ 8 bar, TA-MC100 FSE/FSR (с возвратной пружиной).
DN 150/DN 150 HF:
TA-MC160**, TA-MC253 SE* (с возвратной пружиной).

*) Адаптер необходимо заказывать отдельно, см. «Адаптеры для приводов».
**) Адаптер поставляется с клапаном.

Для получения более подробной информации о приводах, см. отдельные технические брошюры.

Ассортимент, тексты, фотографии, графики и диаграммы могут быть изменены компанией IMI Hydronic Engineering без предварительного уведомления и объяснения причин.

Дополнительную информацию о компании и продукции Вы можете найти на сайте www.imi-hydronic.com.

ИССЛЕДОВАНИЯ — TELOMEROL

ПОДТВЕРЖДЕНО

КЛИНИЧЕСКИМИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эпидемиологические исследования

1. Крупнейшее генетико-эпидемиологическое проспективное исследование – «Гены, окружающая среда и здоровье»

Исследование, проводимое Kaiser Permanente Division of Research под руководством доктора Катерины Шефер (Сatherine Shaefer) по инициативе Национального Института здоровья США-широкомасштабный проект, созданный для изучения генетической основы болезней, связанных со старением

Цель первого этапа исследования: изучение длины теломер, как генетического показателя возрастных нарушений и риска смерти у пожилых

Число обследованных: 110 000 человек

Средний возраст- 63 года

Исследования: Оценка состояния здоровья и измерение средней длины теломер в образцах слюны

Период наблюдения: 3 года

Выводы: У пациентов, с короткой длиной теломер, соответствующей нижним 10 процентам распределения, вероятность умереть в течение трех лет (с момента определения длины теломер) примерно на 23% выше, чем у остальных пациентов с более длинными теломерами

2. Длина теломер и риск развития рака и связанной с ним смертности

Цель: определить взаимосвязь между изначальной длиной теломер и развитием рака и смертности от рака

Продолжительность исследования: с 1995 по 2005 год.

Участники: 787 добровольцев, не имеющих рака в возрасте от 40 до 79 лет.

Дизайн: в начале исследования была измерена длина теломер лейкоцитов методом ПЦР, затем в течение 10 лет отслеживалась заболеваемость раком и смертность от него.

Результаты: За годы исследования рак был выявлен у 11,7% добровольцев.

Средняя длина теломер у пациентов с раком оказалась значительно меньше, чем у остальных участников исследования

Главные итоговые выводы:

Лица, имеющие самые короткие теломеры, в 3 раза больше рискуют заболеть раком и в 11 раз больше – умереть от него в 10-летний период по сравнению с теми, у кого длина теломер максимальна.

Лица со средней длиной теломер имеют риск рака вдвое выше, чем лица с наиболее длинными теломерами. Наличие коротких теломер чаще связано с наиболее злокачественными опухолями, такими как рак желудка, легких и яичников.

Публикации:
Willeit P et.all, Telomere Length and Risk of Incident Cancer and Cancer Mortality, JAMA. 2010; 304(1):69-75.

Исследования на клеточных культурах

1. Функциональная оценка фармакологических активаторов теломеразы в Т-клетках человека

Цель: оценить эффективность воздействия ТА-65® на активность теломеразы и пролиферативный потенциал человеческих CD4 и CD8 Т-клеток.

Дизайн исследования: CD4 и CD8 Т-лимфоциты здоровых пациентов подвергли воздействию TA-65®. Через 72 часа после первичной стимуляции измеряли активность теломеразы в образцах. В качестве второго стимулирования этот процесс повторили через 18 – 21 день.

• Во время первой и второй стимуляции TA-65® активность теломеразы во всех Т-лимфоцитах пациентов возрастала в 1,3 — 3,3 раза по сравнению с контролем.

• TA-65®, активирует теломеразу в CD4 и в CD8 Т-лимфоцитах через сигнальный путь MAPK.

Публикации:
MolgoraB, BatemanR., SweeneyG., FingerD., DimlerT., EffrosR.B., ValenzuelaH.F., Функциональная оценка фармакологических активаторов теломеразы в Т-клетках человека CellsJournal. 2013 January 14: ISSN 2073-4409

2. Повышение противовирусной функции человеческих CD8 + T-лимфоцитов как результат фармакологической активации теломеразы

Цель: изучить влияние молекулы ТАТ-2 (Аналог ТА-65) на мононуклеарные периферические клетки (МНПК) и CD8 Т-лимфоциты здоровых доноров,носителей ВИЧ-инфекции и больных СПИДом

Дизайн исследования: МНПК и CD8 Т-лимфоциты здоровых пациентов, носителей ВИЧ-инфекции и больных СПИДом подвергли воздействию молекулы ТАТ-2. Через 72 часа после первичной стимуляции измеряли активность теломеразы в образцах. В качестве второго стимулирования этот процесс повторили через 18 – 21 день.

1. TAT2 стимулированный эффект усиления теломеразы в МНПК здоровых доноров был относительно умеренным, в пределах от 1,5 до 2,5 раз. TAT2 усиливал активность теломеразы в МНПК хронически инфицированных ВИЧ -1 и больных СПИДом, более существенно от 2,5 до – 7 раз.

2. В течение нескольких минут после контакта с TAT-2 происходит активация МАРК / ERK пути, с последующим увеличением производства продуктов гена hTERT (с максимумом около 12 ч). Активация самой теломеразы, достигает максимума через 24 – 48 часов.

3. Короткое, в течение 7 дней, воздействие TAT2 на CD4 + и CD8 + Т-лимфоциты у ВИЧ-1 — инфицированных лиц привело к небольшому, но статистически значимому, увеличению числа удвоений популяции по сравнению с контрольными обработанными клетками.

4. В результате проведенной работы не было получено никаких доказательств, что использование TAT2 способствовало потере контроля роста и преобразования в культуре исследуемых клеток. Более того, TAT2 не приводит к какому-либо значительному увеличению конститутивной активности теломеразы в линии Jurkat Т клеток опухоли Supplemental.

Главные итоговые выводы

Активатор теломеразы, такой как TAT2 , может представлять собой новый класс терапевтических агентов, которые улучшают иммунную функцию на фундаментальном, клеточном уровне, замедляя старение, тем самым дополняя существующие препараты для лечения ВИЧ / СПИДа и различных связанных с возрастом заболеваний, сопровождающихся иммунодефицитом.

Steven Russell Fauce, Beth D Jamieson, Allison C Chin, Ronald T Mitsuyasu,Stan T Parish, Hwee L Ng, Christina M Ramirez Kitchen, Otto O Yang, Calvin B Harley, Rita B Effros/ Telomerase-based pharmacologic enhancement of antiviral function of human CD8+ T lymphocytes

The Journal of Immunology (Impact Factor: 5.52). 12/2008; 181(10):7400-6.

Исследования на животных

1. Активатор теломеразы TA-65® удлиняет короткие теломеры и увеличивает продолжительность периода здоровой жизни взрослых мышей без увеличения заболеваемости раком (2011г)

Цель исследования: подтвердить механизм действия, выявить долгосрочные эффекты и оценить безопасность ТА-65.

Модель исследования: Для подтверждения механизма действия, основанного на активации теломеразы, TA-65® давали в течение 4-х месяцев в дозе 10 мкм 2 группам специально выращенных мышей с дефектным и нормальным геном теломеразы. В начале исследования в обеих группах было подтверждено наличие слишком коротких теломер.

Предполагаемая гипотеза: если механизм действия TA-65® действительно активация теломеразы, то эффект лечения должен проявиться только в группе с действующим геном, в группе с дефектным геном лечебный эффект должен отсутствовать

1. Снижение процентного содержания коротких теломер в группе мышей с активным геном теломеразы и отсутствие такового эффекта в группе мышей с дефектным геном подтвердило эффективность действие ТА-65® на активацию теломеразы, а также показало, что TA-65® «предпочитает» активировать теломеразу, прежде всего, в клетках с наиболее короткими теломерами.

2. В группе мышей с активным геном теломеразы применение TA-65® не влияло на среднюю или максимальную продолжительность жизни, но значительно повышало продолжительность здоровой жизни, что выражалось в улучшении следующих биологических показателей процесса старения:

Данные о безопасности: Побочные эффекты не наблюдались. Применение TA-65® не вызывало нерегулируемый рост клеток. Это подтверждает, что TA-65® является безопасной биологической субстанцией, оказывающей временное и щадящее влияние на активацию теломеразы в здоровых клетках.

Публикации:
Бруно Бернардес де Хесус,¹Керстин Шнибергер,¹Элза Вера,^1,2Агеда Тейера,¹Калвин Б. Харли³ и Мария А. Бласко¹Активатор теломеразыTA-65®MD удлиняет короткие теломеры и увеличивает продолжительность периода здоровой жизни взрослых мышей без увеличения заболеваемости раком (2011г)

Исследования на людях

1. Естественный активатор теломеразы как часть программы поддержания здоровья (2007)

Цель исследования:

• Оценить клинические эффекты приема ТА-65®

Материалы и методы:

• 114 человек; возраст – 63 ± 12 лет; возрастной диапазон: 30 – 87 лет; 72% – мужчины, 54% участников ЦМВ-сероположительные

• Все участники принимали ТА-65®

• определяли длину теломер и другие биологические показатели процесса старения (анализ крови, состояние и работу иммунной системы, наличие цитомегаловируса, состояние почек, печени, работу эндокринной системы, уровень холестерина, метаболизм глюкозы, состояние сердечно-сосудистой системы, костей, кожи, зрения)

• длину теломер в периферических лимфоцитах и гранулоцитах определяли методом FlowFISH в лаборатории RepeatDiagnostics (Ванкувер, Канада)

• Оценку проводили до начала исследования, через 3, 6, 9 и 12 месяцев

Результаты и выводы:

За 12 мес приема ТА-65® у пациентов отмечалось:

· Статистически значимое снижение процента коротких теломер (р = 0,037).

· Снижение процента стареющих цитотоксических (CD8⁺/CD28^—) Т-клеток (на 1,5 %; 4,4 %; 8,6 % и 7,5% через 3, 6, 9 и 12 месяцев соответственно у лиц, инфицированных цитомегаловирусом).

· Улучшение показателей липидного и углеводного обмена: глюкозы натощак: -3,72 мг / дл (р = 0,02), инсулина -1,32 мМЕ / мл (р = 0,01), общего холестерина- 13.2 8 мг / дл (р = 0,002), липопротеинов низкой плотности (LDL-C) -11.8 мг / дл ( р = 0,002 ), гомоцистеина — 3,6 мкмоль / л (р = 0,001). Для систолического и диастолического артериального давления динамика составила -17,3 и -4,2 мм рт.ст. (р = 0,007 и 0,001, соответственно).

· Через 12 месяцев, минеральная плотность кости увеличилась на 2,0% (р = 0,003). Приём ТА-65® не был ассоциирован с развитием побочных эффектов

Участники исследования также сообщили о других положительных эффектах: улучшение зрения, половой функции, повышение уровня энергии и выносливости, гибкости, остроты мышления и нормализация веса. Кроме того, сообщали об уменьшении появления возрастных пигментных пятен и об улучшении общего состояния кожи, волос и ногтей, что требует дополнительного изучения

2. Первый опыт применения активатора теломеразы (ТА-65) у пациентов с тяжелой лейкопенией на фоне ВИЧ-инфекции

Калинченко С.Ю., Греков Е.А., Ворслов Л.О., Жуков А., Юсипова Т.А., Буренкова Т.В.

Актуальность проблемы: Теломераза является рибонуклеопротеином, который катализирует присоединение теломерных повторов к концам теломеры. Теломеры — это длинные участки повторяющихся последовательностей нуклеотидов, которые покрывают концы хромосом и стабилизируют хромосому. Ряд заболеваний связан с быстрой потерей теломер, проявляющейся преждевременным старением клеток. Потенциальный терапевтический эффект от увеличения активности теломеразы включает, например, лечение ВИЧ-инфекции, которая характеризуется быстрым укорочением длины теломер и ранним старением цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+ клетки) и снижением Т-хелперов.

Цели: Изучить влияние активатора теломеразы на популяцию Т-хелперов у пациентов с ВИЧ-инфекцией и динамику вирусной нагрузки

Методы: 3-м пациентам с ВИЧ-инфекцией был назначен активатор теломеразы ТА-65. 1-й пациент – женщина 50 лет с впервые выявленной ВИЧ-инфекцией, лимфопенией, генерализованной лимфаденопатией, без ВААРТ, ТА-65® назначен в дозе 1 капсула в сутки (250 ед), получает в течение 5 месяцев. 2-й пациент – мужчина 34 года, ВИЧ+ в течение 10 лет, тяжелой лимфопенией, лихорадкой неясного генеза, без ВААРТ, ТА-65® получал в течение месяца, самостоятельная отмена. 3-й пациент – мужчина 31 год, ВИЧ+ в течение 2-х лет, без ВААРТ, ТА-65® получает в суточной дозе 2 капсулы в сутки (500 ед) в течение месяца

Пациент 1: на фоне приема препарата отчетливая динамика увеличения количества лейкоцитов, уменьшения лимфаденопатии.

Пациент 2: на фоне приема отмечается динамика увеличения количества лейкоцитов, после отмены – резкая отрицательная динамика

Пациент 3: Выраженная положительная динамика Т-хелперов, уменьшение вирусной нагрузки, ускорение репаративных процессов после хирургического урологического вмешательства

Заключение: активатор теломеразы ТА-65MD в монотерапии является эффективным, безопасным и перспективным препаратом для увеличения количества Т-хелперов у ВИЧ-инфицированных пациентов, не нуждающихся в АРВТ. Данное направление требует дальнейшего изучения.

Исследования, продолжающиеся в настоящее время

1. Antonio Celada, Antiaging Group University of Barcelona Spain. Проспективное, рандомизированное, двойное слепое, плацебо контролируемое исследование сравнения длины теломер, иммунологических и других биомаркеров старения у взрослых ЦМВ+, принимающих ТА-65® в высокой, низкой дозе или плацебо

В исследовании продолжительностью 12 месяцев принимает участие 125 человек.

2. Группа исследователей University of Connecticut. Пилотное клиническое исследование эффективности ТА-65® при метаболическом синдроме (оценка влияния на инсулинорезистентность, оксидативный стресс и воспаление)

В исследовании продолжительностью 6 месяцев принимает участие 45 человек.

3. Chippewa Valley Eye Clinic, Wisconsin. Пилотное исследование оценки эффективности ТА-65® на ранних стадиях ВМД

В исследовании продолжительностью 18 месяцев принимает участие 44 человека.

границ | Сексуально диморфные поведенческие и генетические исходы, связанные с введением TA65 (активатора теломеразы) после повторяющейся травматической травмы головного мозга: пилотное исследование

Введение

Черепно-мозговая травма (ЧМТ) является серьезной проблемой общественного здравоохранения и одной из наиболее частых причин смерти и инвалидности в детском и подростковом возрасте (1). Легкая ЧМТ (mTBI) или сотрясение мозга недавно была освещена в СМИ и составляет 80% всех TBI (2).Подростковая возрастная группа особенно подвержена высокому риску mTBI, причем подростки мужского пола страдают от mTBI чаще, чем женщины (3). Из всех МТБИ подростков на спорт приходится> 60% зарегистрированных травм (4). Вызывает тревогу то, что подростки подвергаются особенно высокому риску хронического посттравматического дефицита (5), а долгосрочные последствия повторяющихся mTBI (RmTBI) в этот критический период развития мозга в значительной степени неизвестны. Однако недавняя литература для взрослых связывает RmTBI с длительными нейрокогнитивными и поведенческими изменениями, худшими прогнозами и долгосрочными неврологическими последствиями, а также ухудшением исполнительной функции, оценками депрессии и когнитивными изменениями, которые были связаны с количеством полученных травм (6, 7) .

Использование длины теломер (TL) в качестве маркера результатов после RmTBI недавно изучалось в литературе (8). Хехар и его коллеги обнаружили, что более короткий TL был связан с историей mTBI, а также был связан с худшими показателями при измерении набора поведенческих тестов, когнитивных функций, памяти, тревожных и депрессивных симптомов (9). Райт и его коллеги также обнаружили характерное укорочение TL, связанное с RmTBI, и эти вызванные RmTBI изменения TL коррелировали с диффузионно-взвешенными изменениями МРТ (8).Эти два исследования предполагают, что TL может быть подходящим биомаркером исходов mTBI на моделях грызунов.

Теломеры — это эволюционно консервативные последовательности ДНК (состоящие из повторов длиной 6 п.н., TTAGGG), которые действуют как кэпирующие структуры для линейных хромосом (10). Теломеры выполняют четыре основные функции: различение и защита концов хромосом, служащая местом стыковки для белков репарации ДНК, и они предоставляют клетке важную информацию, касающуюся истории ее пролиферации (10). Хотя деление клеток является основным механизмом укорочения теломер, окислительный стресс и воспаление также являются значительными источниками потери теломер (10–12).Принято считать, что после каждого деления клетки теломеры укорачиваются примерно на 50–150 п.н. (13). Как у людей, так и у грызунов истощение теломер является хорошо ассоциированным маркером старения, хотя между отдельными людьми существуют значительные различия (14). Также было показано, что ряд генетических факторов и факторов окружающей среды изменяют TL, такие как упражнения, диета, стресс и воспаление (15, 16). Совсем недавно данные также продемонстрировали, что ряд хронических заболеваний, а также наличие RmTBI в анамнезе могут значительно снизить TL (8, 9).Хотя TL часто обсуждают в контексте укорочения, увеличение TL также имеет биологическое значение, поскольку многие раковые клетки демонстрируют удлинение теломер, что приводит к иммортализации клеток (17). Следовательно, оптимальный TL — это тонкий баланс между процессами, которые способствуют укорочению (т.е. конечной репликации) и процессами, которые способствуют удлинению (например, теломераза) (18).

Теломераза представляет собой рибонуклеопротеидный комплекс, ответственный за удлинение теломер путем добавления повторов из 6 пар оснований к концам хромосом (19).Теломеразный комплекс представляет собой большую строго регулируемую молекулу (~ 1 кДа) со многими ассоциированными белками (20). Двумя наиболее важными генами, кодирующими теломеразный комплекс, являются обратная транскриптаза теломеразы ( TERT ) и связанный с теломеразой белок-1 ( Tep1 ) (19). TERT кодирует каталитическую субъединицу теломеразы, которая действует как фермент, ограничивающий скорость теломеразной активности (21). Без TERT теломеры укорачиваются, а клетки претерпевают клеточное старение или апоптоз (22).Добавление TERT к нормально функционирующим клеткам увеличивает активность теломеразы и, следовательно, увеличивает TL (23), в то время как люди с мутациями в гене TERT имеют более короткие теломеры и пониженную активность теломеразы (24). Второй из этих генов, Tep1 , связан как с теломеразной РНК, так и с TERT . Tep1 важен для катализирования присоединения новых теломер (21). Одна из основных функций Tep1 — связывание TERT и потенциальная модуляция ферментативной активности (25, 26).

Активатор теломеразы-65 (ТА-65) (также известный как циклоастрагенол) — это мощный низкомолекулярный активатор теломеразы, очищенный из корня китайских трав, который продемонстрировал способность удлинять теломеры (27). Хотя это и не подтверждено, TA65 неофициально и спорно рекламировался как антивозрастной и способный продлить жизнь. TA65 можно вводить перорально, поскольку он подвергается интенсивному метаболизму в печени после того, как эффективно всасывается через эпителий кишечника (27).У мышей TA65 смог спасти короткие теломеры у взрослых, пожилых женщин и эмбриональных фибробластов мышей с гаплонедостаточными (14). Кроме того, в исследованиях на людях низкие дозы TA-65 были способны увеличивать длину теломер у пожилых пациентов с цитомегаловирусом (CMV ⁺) (28). Более того, многочисленные доклинические исследования показали, что реактивация теломеразы у мышей с дефицитом теломеразы улучшает когнитивные функции, модулирует молекулярные исходы и даже снижает нейродегенерацию (14, 29, 30).

Учитывая, что предыдущие исследования продемонстрировали, что более короткие теломеры связаны с историей mTBI и худшими поведенческими исходами, и что активация теломеразы улучшает когнитивные функции, вполне возможно, что удлинение теломер может уменьшить поведенческие нарушения и некоторые из неблагоприятных последствий, связанных с RmTBI. . Более того, поскольку предыдущие исследования также продемонстрировали половые различия в индуцированном RmTBI укорочении TL и изменениях экспрессии мРНК TERT (31–33), мы предполагаем, что поведенческие и молекулярные результаты будут зависеть от пола.Следовательно, цель этого исследования состояла в том, чтобы определить, может ли введение TA-65 восстановить поведенческий и генетический дефицит, связанный с RmTBI. Мы вводили TA-65 или вещество плацебо самцам и самкам крыс-подростков до и после RmTBI. Мы оценили длину теломер в ткани уха и головного мозга [префронтальной коры (PFC) и гиппокампа (HPC)] после лечения и травм, а также относительную экспрессию TERT и Tep1 с помощью кПЦР. Мы предположили, что RmTBI укорачивает TL, но введение TA-65 может обратить вспять вызванное RmTBI укорочение теломер и поведенческие дефициты.Хотя предварительно, мы демонстрируем, что активация теломеразы, индуцированная TA65, может быть ценной стратегией для ускорения выздоровления после RmTBI, предлагая некоторую пользу самкам; уменьшение скольжения задних ног и депрессивного поведения при выполнении задачи принудительного плавания при одновременном увеличении экспрессии TL и мРНК генов, связанных с теломеразой.

Методы

Тридцать четыре самца и самки крыс Sprague-Dawley случайным образом были отнесены к одному из четырех условий: RmTBI + TA65 ( n = 10), RmTBI + плацебо ( n = 8), Sham + TA65 ( n = 10) и Sham + Placebo ( n = 6).Всех крыс разводили на 6 самок, отнимали от груди на 21-й постнатальный день (P21) и помещали в группы по три или четыре человека. Всех крыс содержали в помещении для животноводства при 21 ° C с циклом 12:12 свет: темнота (свет включается в 07:00, выключается в 19:00). Животные имели доступ к пище и воде ad libitum .

TA65 Администрация

TA65 (TA Sciences Inc, Лексингтон, США) вводили ежедневно из P25-55 в крафт-арахисовом масле в дозе 25 мг / кг. Животные-плацебо получали такое же ежедневное количество крафт-арахисового масла, но без лекарственного средства.Эта дозировка была выбрана, поскольку предыдущая литература in vivo продемонстрировала сильную активацию теломеразы при пероральном введении (14).

RmTBI

Крысы в группах TA65 и плацебо были случайным образом распределены для получения либо трех mTBI с устройством бокового удара (LI), как описано в Mychasiuk et al. (31), или три фиктивных травмы на P33, P36 и P40. Животных анестезировали изофлураном до тех пор, пока защемление пальца не прекращалось. Затем животных помещали в положение лежа на доску из тефлона ^®.Небольшой груз (50 г) был запущен пневматически со средней скоростью 9,03 м / с, или ~ 83,10 G, в голову крысы. Груз ударил по небольшой магнитной алюминиевой пластине, которая действовала как шлем. Алюминиевая пластина защищает животное от повреждения черепа, а сила веса, воздействующего на пластину, толкает крысу в горизонтальное вращение на 180 °. Сразу после травмы крыс лечили лидокаином и помещали на грелки в положении лежа на спине. Крыс в фиктивном состоянии анестезировали и лечили лидокаином, но они не получали травм.Время вправо, время для перехода из положения лежа на спине в положение лежа, использовалось как мера потери сознания (31).

Поведенческое тестирование

После RmTBI или мнимой травмы все крысы прошли батарею поведенческих тестов для оценки постконтузивной симптоматики. Эта поведенческая парадигма широко использовалась в нашей лаборатории, поскольку она этологически репрезентативна для типичной траектории постконтузивной симптоматики, с которой сталкиваются подростки (6, 31, 33–35).

Ходьба по лучу

Через 24 часа после 1-го и 3-го травм крысы прошли тест на ходьбу луча для измерения координации движений (36). Крыс помещали на конец сужающейся 165-сантиметровой балки, подвешенной на высоте 1 м над землей, а их домашнюю клетку помещали на дальний конец балки. Балка была снабжена уступом 2 см для защиты ног крысы от скольжения и предотвращения падения. Крыс подвергали пяти испытаниям (первое не оценивалось как тренировочное испытание). Крыс оценивали по их среднему времени пересечения балки и полному скольжению ступней задних ног, которые касались выступа безопасности.

Открытое поле

Через два дня после 3-й травмы, на 2-й день после травмы, крыс (PID2) тестировали на определение двигательного и исследовательского поведения в открытом поле в хорошо освещенной комнате (люкс = 580) (37). Крыс помещали в центр круглой арены 143 см на 10 мин. Накладная камера Ethos Vision отслеживала общее пройденное расстояние и время, проведенное в центре арены, с помощью программного обеспечения Noldus EthoVision XT10.

Лабиринт с приподнятым верхом (EPM)

На PID3 животных тестировали на тревожное поведение с помощью EPM в хорошо освещенной комнате.EPM был изготовлен из черного оргстекла, возвышался на 55 см над землей и содержал два скрещенных открытых плеча и два закрытых плеча (Lux open Arms = 690, Lux закрытые рычаги = 360). Крыс помещали в центр лабиринта и снимали на видео в течение 5 мин. Сотрудник-исследователь, не знающий экспериментальной парадигмы, подсчитал время, проведенное в закрытых и открытых руках.

Новое несоответствие контекста (NCM)

NCM проводился на P1D6-9. Мы использовали модифицированную версию NCM, как указано в Spanswick and Sutherland (38).Крысы прошли три тренировки на PI6, PI7 и PI8. В дни обучения крыс помещали в два контекста на 5 мин. Контекст A, прозрачный пластиковый прямоугольный контейнер (70 × 40 × 33 см), содержащий два одинаковых предмета (пивные бутылки). Контекст B, непрозрачный круглый контейнер (высота 36 см и диаметр 47 см), содержащий другую пару предметов (подсвечники). День зондирования пришелся на PI9. В течение этого дня крыс помещали в контекст A на 5 минут, контекст B на 5 минут, домашнюю клетку на 5 минут, а затем в новый контекст на 5 минут.Новая контекстная среда представляла собой модифицированный контекст B с одним объектом из контекста A и одним объектом из контекста B. Время исследования регистрировалось путем измерения времени, проведенного с каждым объектом. Доля исследования измерялась путем деления общего времени, потраченного на изучение нового объекта, на время исследования нового и знакомого объекта.

Принудительное плавание

Парадигма принудительного плавания была реализована на PID14 как мера депрессивно-подобного поведения (39). Мы используем модифицированную версию задачи принудительного плавания [аналогично (40)].Крыс помещали в круглую трубку 30 × 60 см, наполненную водой комнатной температуры (~ 25 ° C), на 7 мин. Уровень воды был достаточно высоким, так что хвост крысы не мог добраться до дна резервуара. После завершения теста крыс сушили и возвращали в их домашние клетки. Воду меняли в баке между садками. Все испытания записывались на видео, и 7-минутный сеанс оценивался по времени, проведенному в неподвижном состоянии, научным сотрудником, не знающим условий эксперимента.

Анализ мРНК

Крыс умерщвляли при PID15 (P55) после завершения всех поведенческих тестов.Крыс анестезировали изофлураном и быстро декапитировали. Используя атлас Zilles (41), ткань из PFC и HPC была извлечена, немедленно заморожена на сухом льду и сохранена при -80 ° C до анализа. РНК и ДНК экстрагировали из ткани мозга согласно протоколам производителя с использованием Allprep RNA / DNA Mini Kit (Qiagen, Германия). Чистоту и концентрацию проверяли с помощью NanoDrop ™ 2000 (ThermoFisher Scientific, США). Очищенную РНК (2 мкг) обратно транскрибировали в кДНК с использованием набора oligo (dT) 20 Superscript III First-Strand Synthesis Supermix Kit (Invitrogen, США).

Два гена были выбраны для анализа на предмет их важности для функционирования теломеразы.

Теломераза ( TERT) и связанный с теломеразой белок ( Tep1 ). Для qRT-PCR в каждую лунку планшета загружали 10 нг образца кДНК, 0,5 мкМ прямого праймера, 0,5 мкМ обратного праймера и 1X SYBR Green FastMix. Праймеры для qRT-PCR были разработаны с использованием Primer3 (http://bioinfo.ut.ee/primer3) и приобретены у Integrated DNA Technologies (Coralville, США).Повторяющиеся образцы были проанализированы в 96-луночных планшетах для каждого гена. qRT-PCR выполняли с помощью системы детектирования CFX Connect Real-Time PCR (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Относительную экспрессию генов нормализовали по двум генам домашнего хозяйства, Ywhaz и CycA , используя 2 ^ΔΔCt [как описано Pfaffl (42)].

Анализ длины теломер

Ушные насечки делали в двух временных точках, P33 (до mTBI # 1) и P55 (эвтаназия). Ткань также была взята из PFC и HPC на P55.Все ткани хранили при -80 ° C до анализа. Геномную ДНК экстрагировали из ткани с использованием набора Sigma RedExtract N-Amp Tissue PCR Kit в соответствии со спецификациями производителя. Количество и качество ДНК измеряли с помощью NanoDrop ™ 2000 (ThermoFisher Scientific, США). Для проведения анализа геномную ДНК разводили до концентрации 10 нг / мкл. Для каждой реакции требовалось 1 мкл разведенной геномной ДНК в 20 мкл 1X SYBR Green FastMix с Rox для qRT-PCR. Праймеры для 36B4 и Tel были разработаны с использованием Primer3 и заказаны в компании Integrated DNA technologies.

Праймеры

использовали в концентрации 20 мкМ для прямого и обратного праймера как для 36B4, так и для тел. На каждом планшете запускали по два контроля без шаблона. Каждый образец анализировали в двух экземплярах на 96-луночном планшете с использованием системы обнаружения ПЦР в реальном времени CFX Connect (Bio-Rad, Геркулес, Калифорния, США). Длину теломер определяли путем сравнения отношения теломер к единице копий (Tel / 36B4). Отношение Tel / 36B4 определяли с помощью уравнения линейной регрессии из (43): y = 1,910,5 × + 4,157, где y = длина теломер и x = −2 ^ΔCt.Изменение длины теломер определяли путем сравнения длины теломер при умерщвлении от TBI.

Статистический анализ

Все статистические анализы проводились с использованием SPSS 25.0 для MAC. Трехфакторный дисперсионный анализ ANOVA с полом (мужчина: женщина), травмой (RmTBI: притворство) и лечением (TA65: плацебо) в качестве факторов анализировали для всех поведенческих и молекулярных результатов. Post-hoc парные сравнения (LSD) были выполнены, где это применимо, для дальнейшего изучения значимых эффектов взаимодействия. p ‘ s <0,05 считались статистически значимыми, и все графики отображают средние значения ± стандартная ошибка. Все данные будут предоставлены по запросу соответствующему автору.

Результаты

Характеристики животных

Трехфакторный дисперсионный анализ для увеличения веса между первым mTBI (P30) и концом эксперимента (P55) продемонстрировал отсутствие значительных различий, связанных с травмой ( p = 0,85) или лечением ( p = 0. .97). Однако наблюдалась значительная разница в прибавке в весе между мужчинами и женщинами ( p <0,01). Трехфакторный дисперсионный анализ веса мозга при эвтаназии также не обнаружил значимых основных эффектов лечения или травм ( p, ‘s> 0,05), но также выявил значительный половой эффект, при котором мужской мозг был тяжелее женского ( p <0,01).

Меры поведения

Статистические результаты трехфакторного дисперсионного анализа для нашей батареи поведенческих тестов представлены в таблице 1 (графически на рисунке 1).Подводя итоги, мы определили один из основных эффектов секса в задаче принудительного плавания (рис. 1H), в результате чего самцы дольше оставались неподвижными по сравнению с самками. В соответствии с предыдущими исследованиями в нашей лаборатории, мы определили основной эффект травмы по 7/8 критериям. RmTBI был связан с увеличением потери сознания, увеличением двигательного дефицита, снижением двигательных способностей, снижением исследовательского поведения, измеряемым по времени, проведенным в центре открытого поля, усилением тревожного поведения и усилением депрессивного поведения.Нам не удалось выявить каких-либо основных эффектов лечения, хотя наблюдались две тенденции к значимости общего пройденного расстояния в открытом поле и неподвижного времени в задаче принудительного плавания. Тем не менее, было множество значительных взаимодействий, многие из которых были связаны с условиями лечения, которые обсуждаются ниже.

Таблица 1 . Статистический анализ поведенческих тестов трехфакторного дисперсионного анализа с основными эффектами пола, наркотиков, RmTBI у крыс-подростков.

Рисунок 1 .Графическое представление поведенческого тестирования отображается со средними значениями ± SEM. Сплошные цветные столбцы указывают на лечение плацебо, а белые столбцы указывают на лечение TA65. (#) Указывает на основной эффект для RmTBI, (*) указывает на основной эффект для секса, (α) указывает на взаимодействие пол * лечение, (β) указывает на взаимодействие полов * RmTBI, (ϕ) указывает на пол * лечение * RmTBI взаимодействие. (A) Время направо. (B) Среднее количество смещений стопы после ЧМТ №1, при этом у мужчин, получивших RmTBI, было больше смещений стопы, чем у женщин, получивших RmTBI. (C) Среднее количество скольжений стопы после TBI № 3, при этом у мужчин, получивших TA65, было больше скольжений стопы, чем у мужчин, получавших плацебо. Кроме того, у мужчин RmTBI, получивших TA65, было больше смещений ступней, чем у женщин RmTBI, получивших TA65. (D) Среднее расстояние, пройденное в чистом поле. (E) Общее время, проведенное в центре открытого поля, при этом самцы, получившие TA65, меньше времени проводили в центре по сравнению с самцами, получавшими плацебо. (F) Время нахождения в закрытых рукавах ЭПМ. (G) Процент времени, потраченного на исследование нового объекта в NCM. Пунктирная линия указывает на случайное выполнение задачи. (H) Время, проведенное неподвижным в принудительном плавании, при этом фиктивные самцы, получавшие TA65, проводили меньше времени в неподвижности, чем фиктивные самцы, получавшие плацебо, а самки RmTBI, получавшие плацебо, имели больше времени неподвижно, чем самки RmTBI, получавшие TA65.

Post-hoc Анализ поведенческих мер

В первом задании на ходьбу луча, после первого mTBI, было выявлено значительное взаимодействие пола посредством травмы, где анализ post-hoc показал, что у мужчин с mTBI было больше скольжений ступней, чем у женщин ( p <0.01) (Рисунок 1B). Во второй задаче обхода луча, через 1 день после 3-й травмы, наблюдалось значительное трехстороннее взаимодействие. В этом случае апостериорный анализ продемонстрировал, что, хотя лечение TA65 уменьшало количество движений стопы у женщин, перенесших RmTBI, лечение TA65 фактически усугубляло двигательный дефицит у мужчин, которые получали RmTBI ( p <0,01) (рис. 1C). Что касается времени, проведенного в центре открытого поля, то имел место значительный секс по отношению к лечению, в результате чего мужчины, которые получали лечение TA65, фактически демонстрировали повышенную тревогу, измеряемую меньшим временем, проведенным в центре арены ( p <0 .01) (Рисунок 1E). Наконец, в парадигме принудительного плавания также было выявлено трехстороннее взаимодействие. Post-hoc анализ продемонстрировал, что для самок с RmTBI обработка TA65 уменьшала вызванное TBI депрессивно-подобное поведение ( p <0,05), тогда как для самцов обработка TA65 уменьшала депрессивно-подобное поведение ложных животных ( p <0,01). ) (Рисунок 1H). Таким образом, кажется, что лечение TA65 усугубило поведенческие симптомы у самцов грызунов (ступни и время в центре открытого поля), в то же время предлагая некоторую пользу самкам с RmTBI (ступни и депрессивное поведение при выполнении задания принудительного плавания).

Молекулярные меры

Статистические результаты трехфакторного дисперсионного анализа для молекулярного анализа представлены в таблице 2 (графически на рисунке 2). Как и ожидалось, не было никаких групповых различий в длине теломер в исходное время сбора образца, что указывает на то, что группы не отличались до лечения (рис. 2А). Хотя нам не удалось воспроизвести предыдущие исследования, демонстрирующие, что RmTBI снижает TL в выемке уха и TL PFC (рисунки 2B, D, соответственно), мы продемонстрировали, что RmTBI приводит к снижению TL в HPC (рисунок 2G).Однако невозможность идентифицировать значительную потерю TL могла быть связана с тем, что лечение TA65 увеличивало TL в ушной раковине у женщин (Рисунок 1B) и TL PFC у мужчин ( p <0,05) (Рисунок 1D). В качестве дополнительного подтверждения этого, при исследовании изменения TL выемки уха (длина теломер при принесении в жертву - длина теломер на исходном уровне), был обнаружен основной эффект лечения, указывающий на то, что TA65 действительно ослаблял нормальное сокращение длины теломер с течением времени ( p <0,05) (рис. 2С).

Таблица 2 .Статистические результаты трехфакторного дисперсионного анализа для длины теломер, полученные из выемок уха, PFC и HPC, а также экспрессии мРНК в PFC и HPC.

Рисунок 2 . Графическое представление молекулярных показателей в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего. (#) Обозначает основной эффект для RmTBI, (*) обозначает основной эффект для секса. (+) указывает на основной эффект лечения, (α) указывает на взаимодействие пол * лечение, (ε) указывает на взаимодействие лечения * RmTBI, (ϕ) указывает на трехстороннее взаимодействие. (A) Средняя длина выемки уха до лечения и травм. (B) Средняя TL уха Notch при умерщвлении, при этом самки, обработанные TA65, имели более длинные теломеры. (C) Изменение TL ушной выемки, в результате чего обработка удлиненными теломерами TA65. (D) TL в PFC показал, что у мужчин TL был длиннее, а у мужчин, получавших TA65, TL был дольше, чем у мужчин, получавших плацебо. (E) Относительная экспрессия TERT в PFC указывает на взаимодействие лечения пол *, хотя анализ post-hoc не выявил значительной разницы. (F) Относительная экспрессия Tep1 в PFC, при этом анализ post-hoc показал, что самки, получавшие TA65 и поддерживающие RmTBI, испытали более высокую экспрессию Tep1 ( p <0,05). (G) TL в HPC с post-hoc анализом , демонстрирующим, что фиктивные животные, получавшие TA65, имели более длинный TL, чем фиктивные животные, получавшие плацебо ( p <0,05). (H) Относительная экспрессия TERT в HPC с анализом post-hoc , показывающим, что у женщин-плацебо, получавших RmTBI, наблюдалась более низкая экспрессия TERT ( p <0.05). (I) Относительная экспрессия Tep1 в HPC у самцов, получавших TA65, имеющих более низкую экспрессию Tep1 ( p <0,01).

Поскольку TA65, как полагают, активирует теломеразу, мы также исследовали экспрессию PFC и HPC двух генов, которые кодируют критические белки для теломеразы, TERT и Tep1 . Как в PFC, так и в HPC, анализ post-hoc значительного лечения по половому взаимодействию показал, что лечение TA65 уменьшало экспрессию мРНК TERT у мужчин, у которых наблюдались RmTBI, но увеличивало экспрессию TERT у женщин, которые испытывали RmTBI (рисунки 2E, H).Для экспрессии Tep1 были выявлены значительные половые эффекты как в PFC, так и в HPC, однако результаты были противоположными ( p ‘s <0,05). В PFC самцы показали более высокую экспрессию мРНК Tep1 , чем самки (Рисунок 2F), однако в HPC самки показали более высокие уровни, чем самцы (Рисунок 2I). В PFC также наблюдалось значительное трехстороннее взаимодействие для экспрессии мРНК Tep1 , при этом анализ post-hoc показал, что обработка TA65 снижала уровни Tep1 у мужчин, которые испытали RmTBI, при увеличении экспрессии Tep1 в самки с RmTBI ( p <0.05) (Рисунок 2F). Наконец, в HPC, post-hoc анализ значимого лечения по половому взаимодействию продемонстрировал, что у мужчин, получавших TA65, была более низкая экспрессия мРНК Tep1 по сравнению с мужчинами, получавшими плацебо ( p <0,01) (рис. 2I. ). Подобно результатам поведенческих измерений, оказывается, что лечение TA65 давало большую пользу самкам животных по сравнению с самцами.

Обсуждение

Целью настоящего исследования было определить, может ли введение TA65 увеличить активность теломеразы и TL, тем самым улучшая функциональное восстановление после RmTBI.Мы обнаружили, что лечение TA65 усугубило некоторые поведенческие симптомы у грызунов-самцов (нарушение баланса и координации движений, усиление тревожного поведения), но при этом принесло небольшую пользу самкам с RmTBI (улучшение моторной координации и снижение депрессивно-подобного поведения). Что касается TL, мы обнаружили, что лечение TA65 увеличивало TL уха у женщин и TL PFC у мужчин, а также ослабляло нормальное сокращение длины теломер с течением времени. Наконец, у женщин с RmTBI, но не у мужчин, TA65 увеличивал экспрессию генов, кодирующих комплекс теломеразы.Таким образом, введение TA65 привело к увеличению экспрессии мРНК TERT и Tep1 у самок крыс, испытавших RmTBI, и эти крысы также продемонстрировали некоторые функциональные преимущества, как измерено с помощью нашей поведенческой парадигмы.

Даже в здоровом мозге и глия, и нейроны подвержены значительному укорочению теломер. Глиальные клетки, потому что они митотические, а нейроны (хотя и постмитотические) возбудимы и, следовательно, демонстрируют более высокую скорость метаболизма и повышенное содержание железа / меди, что впоследствии приводит к более высокому уровню окислительного стресса (44, 45).В нормальных условиях клетки имеют механизмы, предназначенные для адекватного управления окислительным стрессом и реактивными окислительными формами (АФК). Однако после ЧМТ клетки могут быть перегружены и неспособны компенсировать дополнительное клеточное повреждение. «Вторичное повреждение», которое возникает после первоначального биомеханического повреждения, представляет собой отсроченный и продолжительный период повреждающих процессов, включая эксайтотоксичность, окислительный стресс, апоптоз и дисфункцию митохондрий (46). Эти вторичные процессы повреждения часто приводят к накоплению АФК, что связано со значительным повреждением ДНК (47, 48).В соответствии с этим в HPC этого исследования и в многочисленных предыдущих исследованиях мы продемонстрировали, что mTBI и RmTBI снижают TL (8, 9), что, вероятно, связано с повышенным окислительным стрессом и повреждением ДНК. Поскольку ДНК была извлечена из всех тканей HPC и PFC, мы не можем сделать вывод, связаны ли изменения TL с нейрональными или глиальными популяциями, но, учитывая, что активация микроглии значительно подавляет экспрессию генов, связанных с теломеразой (49), сортировка клеток будет важный следующий шаг к пониманию механизмов укорочения теломер в ответ на TBI.

Хотя активация теломеразы и манипуляции с TL связаны с очевидными преимуществами, такими как уменьшение повреждения ДНК и увеличение вероятности адекватной репарации ДНК, изменения TL также связаны с изменениями экспрессии генов. Обратимое молчание генов около теломер, характеризуемое как эффект положения теломер (TPE), включает конформационные изменения в хроматине, что приводит к подавлению генов в зависимости от длины теломер и их расстояния от теломер (50), и может быть причиной для подавления или активации генов, важных для нейропластичности и восстановления.Например, гены, такие как sonic hedgehog ( SHH ) (51), который участвует в нейропластичности, нейротрофин 3 ( NT-3 ), который играет роль в выживании нейронов (52), крупноподобный фактор 6 ( KLF6 ). ), участвующие в возобновлении роста аксонов после повреждения (53), и глутатионпероксидаза 4 ( GPX4 ), антиоксидантный ген (54), расположены на концах хромосом и могут быть восприимчивы к TL-зависимому замалчиванию. Хотя это выходит за рамки этого исследования, в будущем можно будет изучить, являются ли определенные хромосомы более восприимчивыми к вызванному TBI истощению теломер, поскольку это может дать ценную информацию о подавлении TPE генов, критических для восстановления и репарации.

Наконец, хотя мы часто определяем половые различия в контексте RmTBI (55–58), поразительное расхождение в эффективности лечения TA65 для мужчин и женщин в этом исследовании вызывает удивление. TA65 не только не принес никакой пользы мужчинам, но и усугубил многие результаты. Это могло быть следствием взаимодействия половых гормонов и окислительного стресса. Известно, что эстроген является мощным антиоксидантом, регулирующим экспрессию многих антиоксидантных генов и снижающим выработку АФК (59), в то время как тестостерон повышает восприимчивость к окислительному стрессу и не обладает известными антиоксидантными свойствами (60).Кроме того, было показано, что эстроген напрямую активирует промотор теломеразы (61). Возможно, TA65 действовал на этот нативный механизм активации теломеразы, усугубляя эффекты эстрогена на удлинение теломер у женщин. Воздействие ТА-65 на мужчин, которые обычно не проявляют опосредованный эстрогеном механизм, могло быть слишком незначительным или, возможно, не превышало порогового значения для ввода промотора, необходимого для достижения заслуживающей внимания активации теломеразы. В будущих исследованиях следует выяснить, может ли более высокая доза TA65 принести пользу и мужчинам, и действительно ли эти половые различия вызваны эстрогеном.

В заключение, хотя и предварительное, это исследование предоставляет доказательства того, что активация теломеразы может быть ценной стратегией для ускорения выздоровления после RmTBI. Это согласуется с растущими доказательствами того, что терапевтическое воздействие на повреждение ДНК является жизнеспособным механизмом для улучшения неврологического дефицита (45). Однако в этом исследовании есть многочисленные ограничения, которые требуют дальнейшего изучения. Во-первых, глубокие половые различия требуют изучения; ТА65 вреден для мужчин при любых условиях, или существует парадигма оптимальной дозировки или времени, которая окажется эффективной.Во-вторых, это исследование обеспечивало TA65 на протяжении всего эксперимента, и было бы полезно изучить его эффективность при введении только до или после травмирующих событий. И, наконец, животные в рамках этого исследования были умерщвлены в молодом возрасте (P55). В будущих исследованиях следует изучить долгосрочные результаты, чтобы гарантировать, что введение активатора теломеразы не увеличивает восприимчивость к / или риск развития рака и связанных с раком заболеваний.

Заявление о доступности данных

Наборы данных, созданные для этого исследования, доступны по запросу соответствующему автору.

Заявление об этике

Исследование на животных было рассмотрено и одобрено Канадским советом по уходу за животными и получило одобрение Совета по этике совместных учреждений Университета Калгари.

Авторские взносы

EE принимал участие в сборе данных, анализе и написании рукописи. HM принимал участие в сборе данных и написании рукописи. RM отвечал за экспериментальный дизайн, сбор данных, анализ и написание рукописи.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Исследовательский институт детской больницы Альберты, Канадский институт медицинских исследований (PJT-153051) и Совет естественных и технических исследований (1304881) за их финансовый вклад.

Список литературы

1. Фаул М., Сюй Л., Уолд М., Коронадо В. Травматическая травма головного мозга в США: посещения отделений неотложной помощи, госпитализации и смерти 2002-2006 гг. . Атланта, Джорджия: Центры по контролю и профилактике заболеваний (2010). DOI: 10.15620 / cdc.5571

CrossRef Полный текст | Google Scholar

2. Деван М.С., Маммаредди, штат Нью-Джерси, Веллонс III, Бонфилд К.М. Эпидемиология глобальной детской черепно-мозговой травмы: качественный обзор. World Neurosurg. (2016) 91: 497–509.e491. DOI: 10.1016 / j.wneu.2016.03.045