Форум маммопластика казань: Маммопластика в Казани, отзывы на Zoon.ru

Содержание

Маммопластика в Казани, отзывы на Zoon.ru

Комментарий

Достаточно часто в моей практике приходится работать с жалобами на артериальную гипертензию, нарушения ритма сердца, стенокардию напряжения. Моё видение этой проблемы заключается в следующем. Необходимо и обязательно согласовывать лечение таких больных с ведущим кардиологом. Имея на руках подробное исследование состояния сердечно сосудистой системы пациента, данные исследования активности надпочечников и щитовидной железы опытный кардиолог назначает вам ряд препаратов, которые оказывают селектив … – показать

ное влияние на те системы организма, сбой в которых приводит к Артериальной Гипертензии, Ишемической болезни сердца, нарушения сердечной проводимости. Как правило грамотное сочетание активных препаратов значительно улучшает качество жизни пациента и имеет небольшие побочные эффекты, неизбежные при медикаментозной терапии. Однако, достаточно часто, несмотря на вроде бы грамотное назначение препаратов пациенты продолжают отмечать и повышение давления и ощущения сбоев в работе сердца, одышку и общую слабость.

Почему это происходит и как я могу помочь вашему организму?
Как я всегда говорил особенностью нашего тела является то, что все системы в нашем организме взаимосвязаны и проводить терапию лишь одной системы по меньшей мере наивно. Ещё в 1987 году на базе Казанского медуниверситета было проведено исследование, где была доказана взаимосвязь между ограничением или дисфункцией II грудного позвонка и уровнем пролапса митрального клапана. При восстановлении подвижности II грудного позвонка, а значит улучшении нейротрофики сердечной мышцы тонус сердечной мышцы значительно возрастал, что приводило к уменьшению пролабирования митрального клапана и усилению сердечного выброса. Краниосакральная терапия, придерживаясь концепции целостного подхода к лечению, воздействует на все системы организма помогая ему обрести тот оптимум, когда всё тело работает наилучшим образом. Что это значит? Восстанавливая подвижность позвоночных двигательных сегментов, мы освобождаем весь позвоночник от мышечных и костных зажимов, улучшаем микроциркуляцию и движение спинномозговой жидкости через сам позвоночный канал и через рукава спинномозговых нервов, что значительно улучшает нейротрофику внутренних органов.

Улучшается работа гепатобилиарной системы, работа почек, желудочно кишечного тракта. Восстановив подвижность позвоночника, мы способствуем уменьшению краевых костных разрастаний, возникающих как ответ на нестабильные двигательные сегменты, нарушения мышечного корсета тела. Работая с диафрагмами тела (тазовая, дыхательная, верхняя апертура, диафрагмы шейного отдела) мы расслабляем всё тело в целом. Увеличивается объём грудной клетки, усиливается лёгочная вентиляция, насыщение крови кислородом, что приводит к уменьшению ишемизации миокарда и головного мозга. Расслабляя дыхательную мускулатуру, мы снижаем общий уровень стрессовых реакций. Освобождение блуждающего нерва в шейногрудном и затылочном переходе приводит к снижению частоты сердечных сокращений при нарастании эффективности работы сердца.
Работа с черепом позволяет расслабить ретикулярную формацию, что значительно снижает уровень стрессовых реакций и, как следствие, делает нас более спокойными и адаптированными к внешним воздействиям.

В целом, после двух трех сеансов, мои пациенты отмечают исчезновение одышки при физической активности, прилив жизненных сил и общее улучшение качества жизни. Многие снижают дозы лекарственных средств, которые они вынуждены принимать при терапии заболеваний сердечно-сосудистой системы. Однако я настоятельно рекомендую согласовывать это снижение с курирующим пациента кардиологом.

Ромашова Светлана Сергеевна

array ( ‘REDIRECT_HTTPS’ => ‘on’, ‘REDIRECT_STATUS’ => ‘200’, ‘HTTPS’ => ‘on’, ‘HTTP_HOST’ => ‘unionclinic.ru’, ‘HTTP_X_FORWARDED_FOR’ => ‘85.249.26.218’, ‘HTTP_X_FORWARDED_PROTO’ => ‘https’, ‘HTTP_X_REQUEST_SCHEME’ => ‘https’, ‘HTTP_CONNECTION’ => ‘close’, ‘HTTP_USER_AGENT’ => ‘Mozilla/5.0 (X11; Linux x86_64; rv:33.0) Gecko/20100101 Firefox/33.0’, ‘HTTP_ACCEPT’ => ‘text/html,application/xhtml+xml,application/xml;q=0.9,*/*;q=0.8’, ‘HTTP_ACCEPT_LANGUAGE’ => ‘en-US,en;q=0.5’, ‘HTTP_ACCEPT_ENCODING’ => ‘identity’, ‘HTTP_ACCEPT_CHARSET’ => ‘windows-1251,utf-8;q=0.

7,*;q=0.7′, ‘CONTENT_TYPE’ => ‘application/x-www-form-urlencoded;charset=UTF-8’, ‘HTTP_CACHE_CONTROL’ => ‘no-cache’, ‘PATH’ => ‘/usr/local/sbin:/usr/local/bin:/usr/sbin:/usr/bin’, ‘SERVER_SIGNATURE’ => ‘

Apache/2.4.48 (Red Hat Enterprise Linux 8) PHP/5.2.17 Server at unionclinic.ru Port 80

‘, ‘SERVER_SOFTWARE’ => ‘Apache/2.4.48 (Red Hat Enterprise Linux 8) PHP/5.2.17’, ‘SERVER_NAME’ => ‘unionclinic.ru’, ‘SERVER_ADDR’ => ‘127.0.0.1’, ‘SERVER_PORT’ => ’80’, ‘REMOTE_ADDR’ => ‘85.249.26.218’, ‘DOCUMENT_ROOT’ => ‘/home/uclinic/unionclinic.ru/docs’, ‘REQUEST_SCHEME’ => ‘http’, ‘CONTEXT_PREFIX’ => », ‘CONTEXT_DOCUMENT_ROOT’ => ‘/home/uclinic/unionclinic.ru/docs’, ‘SERVER_ADMIN’ => ‘postmaster@unionclinic.ru’, ‘SCRIPT_FILENAME’ => ‘/home/uclinic/unionclinic.ru/docs/index.php’, ‘REMOTE_PORT’ => ‘51158’, ‘REDIRECT_URL’ => ‘/romashova’, ‘GATEWAY_INTERFACE’ => ‘CGI/1.1’, ‘SERVER_PROTOCOL’ => ‘HTTP/1.

0′, ‘REQUEST_METHOD’ => ‘GET’, ‘QUERY_STRING’ => ‘romashova’, ‘REQUEST_URI’ => ‘/romashova’, ‘SCRIPT_NAME’ => ‘/index.php’, ‘PHP_SELF’ => ‘/index.php’, ‘REQUEST_TIME’ => 1645130130, ‘argv’ => array ( ), ‘argc’ => 0, ‘isGeneral’ => 1, ‘razdel’ => ‘general’, )

Пластический хирург

ОБРАЗОВАНИЕ

ВМА имени С. М. Кирова, специальность «Лечебное дело»;
Интернатура ВМА имени С. М. Кирова, специальность «Хирургия»;
Ординатура на базе НИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе, специальность «Врач скорой медицинской помощи»;
СПб МАПО, специальность «Комбустиология»;
Ординатура, НИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе, специальность «Комбустиология и пластическая хирургия».

ПОВЫШЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ

Деловая программа по косметологии и эстетической медицине «Невские Берега», СПб, 2011 г.

;
Международное общество эстетических пластических хирургов (ISAPS), международный обучающий курс, СПб, 2011 г.
Международный образовательный симпозиум «Эстетическая хирургия и дерматокосметология в омоложении лица и периорбитальной области», Москва, 2011 г.;
Конгресс в СПБМАПО на кафедре Пластической и Эстетической хирургии по Ринопластике (докладчик – Моника Гэрике, д.м.н., член Швейцарской Ассоциации Пластических и Эстетических хирургов), СПб, 2011 г.
VII специализированный международный форум «Медицина Красоты», Екатеринбург, 2012 г.;
III Научно-практическая конференция по эстетической пластической хирургии и косметологии. Тема «Пластические операции при возрастных изменениях лица и тела», Москва, 2012 г.
II Международный форум ISAPS по пластической хирургии, СПб, 2013 г.;
Международный симпозиум по эстетической и реконструктивной хирургии, Израиль, 2013 г.;
Вторая Международная Школа Маммопластики, Казань, 2014 г.
;
Международная конференция ISAPS (Гоа), 2014 г;
2016 г. — участник VI Международного курса-тренинга для пластических и реконструктивных хирургов.

Перечень выполняемых оперативных вмешательств:

Блефаропластика

Омоложение лица

Липофиллинг лица и тела

Отопластика

Маммопластика (увеличивающая, мастопексия, редукционная)

Абдоминопластика

Липосакция

Интимная пластика (женская, мужская)

Ринопластика

Филамент-лифтинг

Ромашова Светлана Сергеевна

работает по следующим специальностям:

Токаев Адам Вахаевич Врач хирург

Образование:

1998 — 2004 гг. Азербайджанский государственный медицинский институт им.Н.Нариманова (г.Баку), факультет «Лечебное дело».

2004 — 2014 гг. – врач хирург онколог отделения онкохирургии КБ№1 г.Грозного.

2009 г — награжден знаком ордена высшей международной премии «Профессия — Жизнь» в номинации «За честь, доблесть, созидание, милосердие».

2009 — 2013 гг. главный онколог Департамента здравоохранения г.Грозный.

2011 г. – присвоена первая врачебная квалификационная категория.

2013 г. — награжден Почетной грамотой Министерства здравоохранения ЧР.

2015 г. – присвоена высшая врачебная квалификационная категория.

2015 г. – принят на работу в ГБУ Республиканский онкологический диспансер на должность врача хирурга онколога.

2017 г. – назначен заведующим операционным блоком ГБУ РОД ЧР.

2017 г. — награжден Почетной грамотой Мэрии г.Грозный.

2018 г. – назначен заведующим отделением хирургии №1 (реконструктивно-пластической хирургии молочной железы, кожи, головы и шеи ГБУ РОД ЧР).

2018 г. – награжден Благодарственным письмом Главы Чеченской Республики.

2019 г. – награжден нагрудным знаком Отличник здравоохранения Российской Федерации.

За время работы Токаев А.В. проявил себя как высококвалифицированный специалист хирург-онколог. Постоянно совершенствует свои знания, участвует в международных конгрессах и конференциях, регулярно проходит стажировки в лучших онкологических центрах и институтах России, а также за рубежом. Был организатором конференций маммологического профиля в Грозном, с проведением мастер-классов ведущими онкомаммологами России.

Имеющиеся знания успешно применяет в своей практике, внедряя новейшие методики высокотехнологичных операций в Чеченской республике.

Благодаря хирургической деятельности Токаева А.В. понятие современной реконструктивно-пластической хирургии молочной железы стало доступным населению Чеченской республики, полностью нивелирована необходимость выезжать на хирургическое лечение заболеваний молочных желез за пределы республики, так как вся необходимая, современная помощь оказывается населению на месте, это отчетливо видно по динамике проводимых им операций в течении 2015 – 2019 гг (маммология):

2015 г. – 242 операции

2016 г. – 369 операции

2017 г. – 521 операция

2018 г. – 644 операции

2019 г. – 722 операции

Токаев А.В. в совершенстве владеет любыми объемами сложности, как органосохранных, так и реконструктивно-пластических операций, по восстановлению молочной железы, в том числе после ее удаления по поводу злокачественного новообразования. Работает со студентами, ординаторами, передаёт свой опыт молодым специалистам.

К исполнению должностных обязанностей Токаев А.В. относится добросовестно и ответственно. Характеризуется высокой степенью дисциплинированности. При решении сложных вопросов проявляет самостоятельность и оперативность, старательность в выполнении распоряжений руководства. Токаев А.В. обладает организаторскими способностями, пользуется авторитетом у коллег и сотрудников смежных отделений, проявляет требовательность к себе и подчиненным.

Умеет находить нестандартные подходы к решению задач, поставленных перед ним руководителем, творчески подходит к делу. Выступает на телевидении, публикуется в прессе, журналах.

Активно стажируется, и делится личным опытом, представляя доклады на международных конференциях, конгрессах, съездах, посвященных реконструктивно-пластической хирургии молочной железы в ведущих специализированных институтах и центрах России, а также за рубежом: Испания (Барселона), Япония (Осака), Турция (Стамбул), Италия (Рим), Южная Корея (Сеул).

Участие в тематических конференциях, конгрессах, стажировки за период 2015 – 2019 гг:

2015 год

V Международный обучающий курс по пластической хирургии. Санкт-Петербург, 5-7 июня 2015 г.

II Ежегодный конгресс Российского общества онкомаммологов. Инновации в диагностике и лечении рака молочной железы. Сочи, 3-5 сентября 2015 г.

Третья международная Школа маммопластики в Казани. Казань, 8-10 октября, 2015 г.

ХV интенсивный курс по реконструктивно-пластической и эстетической хирургии молочной железы. Казань, 28-30 октября 2015 г.

2016 год

Большая конференция RUSSCO — Рак молочной железы. Москва, 4-5февраля, 2016 г.

Barcelona Breast Meeting. Spain, Barcelona, 16-18 march, 2016.

Moscow Breast Meeting — I Конференция по проблемам реконструктивной и эстетической хирургии у больных раком молочной железы. Москва, 7-10 апреля, 2016 г.

II Петербургский онкологический форум – Белые ночи. Санкт-Петербург, 22-24 июня, 2016 г.

Osaka Medical Center for Cancer and Cardiovascular Deseases. Japan, 11-17 ноября, 2016г.

IV Международная Школа маммопластики в Казани. Казань, 25-26 ноября 2016 г.

Реконструктивно-пластические и органосохраняющие операции в онкологии. Москва, 26-28 ноября 2016 г.

V Национальный конгресс «Пластическая хирургия, эстетическая медицина и косметология». Москва, 1-3 декабря 2016 г.

Современный взгляд на комплексное лечение рака молочной железы. Москва, 2 декабря.

Курс по реконструктивно-пластической хирургии молочной железы МНИОИ им. П.А.Герцена. Москва, 6-7 декабря, 2016 г.

2017 год

Moscow Breast Meeting — II Конференция по проблемам реконструктивной и эстетической хирургии у больных раком молочной железы. Москва, 2-5 марта, 2017 г.

Anadolu Medical Center. Turkie, Istanbul, 20-25 мая, 2017 г.

Курс по эстетической и реконструктивной хирургии молочной железы и лица. Краснодар, 24-25 ноября 2017 г.

2018 год

Moscow Breast Meeting III Международная конференция по проблемам реконструктивной и эстетической хирургии молочной железы. Москва, 8-11 февраля 2018г.

Конгресс по пластической, реконструктивной и эстетической хирургии «От Каспия до предгорья Большого Кавказа». Махачкала, 5-8 апреля, 2018г.

Казанский маммологический форум – 2018. Казань, 11-12 мая 2018г.

V Международная Школа маммопластики. Казань, 13-15 мая 2018г

Breast Surgery Symposium 2018. Rome, Italy, 13 — 15 июня, 2018г.

ХХI Школа реконструктивной хирургии при раке молочной железы РОНЦ им.Н.Н.Блохина. Москва, 17-19 октября 2018г.

2019 год

Moscow Breast Meeting IV Международная конференция по проблемам реконструктивной и эстетической хирургии молочной железы. Москва, 7-9 февраля 2019г.

II Северокавказский межрегиональный маммологический форум «Школа маммологии». Махачкала, 23 апреля 2019 г.

7^th International Breast symposium (IBSD) Dusseldorf, Germany, 4-6 апреля 2019г.

Severance hospital medical training. South Korea, Seoul, 9-12 апреля, 2019г.

Пластический хирург Фирсов Андрей Валентинович

2004 г. — Окончил Московскую Медицинскую Академию им. И. М. Сеченова по специальности «Лечебное дело». Прошел интернатуру по специальности «Хирургия» на кафедре госпитальной хирургии ММА им. И. М. Сеченова на базе ГКБ №7.

2007 г. — С отличием закончил обучение в клинической ординатуре на кафедре восстановительной хирургии лица и шеи с микрохирургией по специальности «Челюстно-лицевая хирургия» на базе ФГУ «ЦНИИС и ЧЛХ Росмедтехнологий».

2013 г. — После введения специальности «Пластическая хирургия» получил сертификат специалиста по специальности «Пластическая хирургия» на базе ГБОУ ВПО Первого МГМУ им. И. М. Сеченова Росзздравсоцразвития.

2007-2011г г. — Прошел стажировки по пластической и эстетической хирургии в Германии, Италии, Бельгии.

Имеет действительные сертификаты специалиста по следующим дисциплинам: «Хирургия», Челюстно-лицевая хирургия», «Эстетическая и косметическая хирургия», «Лазерная хирургия», «Онкология», «Хирургическая стоматология».

Имеет ряд опубликованных работ по пластической и реконструктивной хирургии. Владеет современными хирургическими методиками проведения различных видов оперативных вмешательств.

Принимает активное участие в международных курсах, конгрессах и съездах по пластической и эстетической хирургии:

2020 г. — Конференция Moscow Breast Meeting «Реконструктивная и эстетическая хирургия молочной железы».

2019 г. — VIII Национальный конгресс «Пластическая хирургия, эстетическая медицина и косметология» 5 — 7 ноября 2019 г. Москва.

2019 г. — VII Live Surgery Course «Продвинутая эстетическая ринопластика и контурирование лица». 24-27 ноября 2019г.Санкт-Петербург.

2019 г. — «5-й Всемирный конгресс пластических хирургов» 19-21 сентября 2019г. Ливан, Бейрут.

2019 г. — «MOSCOW BREAST MITING» IV Конференция по проблемам реконструктивной и эстетической хирургии молочной железы. 7-9 февраля 2019г. Москва.

2018 г. – VII Национальный конгресс «Пластическая хирургия, эстетическая медицина и косметология» 6 — 8 декабря 2018 г. Москва.

2018 г. – Шестой интенсивный курс «Продвинутая эстетическая хирургия груди и тела» 11-14 ноября 2018г.Санкт-Петербург

2018 г. — «V Большая юбилейная международная школа маммопластики». 13-15 марта 2018г. Казань.

2018 г. — CADAVER SCHOOL «Функционально-эстетическая ринопластика при деформациях и дефектах носа» 17 марта 2018г. Москва.

2018 г. — Институт Пластической хирургии и Косметологии. Мастер-класс Блохина С.Н. «Подходы к редукционной маммопластике» 16 марта 2018г. Москва.

2018 г. — MOSCOW BREAST MEETING. III Конференция по проблемам реконструктивной
и эстетической хирургии у больных раком молочной железы. 8-11 февраля 2018 года, Москва.

2017 г. — VI Национальный конгресс «Пластическая хирургия, эстетическая медицина и косметология» 10 — 12 декабря 2018 г.Москва.

2017 г. — Докладчик интенсивного курса памяти С.В. Нудельмана «Mammoplasty Workshop&Live Surgery, Екатеринбург.

2017 г. — Практический обучающий курс «От Аугментационной маммопластики до комплексного омоложения лица», Санкт-Петербург.

2016 г. — Интенсивный курс «Advanced aesthetic face, breast and body contouring», Санкт-Петербург.

2016 г. — IV (IX) съезд Российского Общества Пластических Реконструктивных и Эстетических Хирургов, Москва

2016 г. — Rome Breast Surgery Symposium

2016 г. — XV Юбилейный Международный Симпозиум по эстетической медицине — профессиональный клуб «Форум пластических хирургов», Москва

2015 г. — курс «Международной Медицинской Корпорации» — «Актуальные проблемы пластической хирургии».

2013 г. — обучающий Live Surgery курс «Продвинутая эстетическая хирургия груди».

2012 г. — участие в «Международном обучающем семинаре по ринопластике».

2012 г. — международный курс по пластической хирургии «Омолаживающие операции лица, контурная пластика тела».

2010 г. — обучение по теме «Эндоскопическая техника в пластической хирургии» под руководством Адама Рубинштейна.

2010 г. — обучение по теме «Лицевые импланты — эстетическая коррекция лица» под руководством Михаила Яремчука.

2008 г. — участие в международном симпозиуме по эстетической медицине.

2007 г. — участие в международной конференции «Новое в пластической хирургии и комбустиологии».

2007 г. — участие в форуме «Искусство пластической хирургии»

2006 г. — международный курс по пластической хирургии «Омолаживающие операции лица и шеи. Маммопластика».

2006 г. — участие в VI международном конгрессе эстетической медицины.

2006 г. — интенсивный курс по «Малоинвазивным методам Aptos».

2006 г. — участие в семинаре по обмену опытом «Современная ринопластика.

Иван Александрович Виноградов

Врач маммолог-онколог,

реконструктивно-пластический хирург

Стаж работы по специальности – с 2008 года.

• Действительный член Российского общества онкомаммологов (РООМ),
Международного хирургического общества ISS.

Образование

2006 г. – Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова, специальность «Лечебное дело».
2007 г. – Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова, кафедра госпитальной хирургии № 1, интернатура, специальность «Хирургия».
2009 г. – Санкт-Петербургский городской клинический онкологический диспансер, ординатура, специальность «Онкология».
2015 г. – Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова, кафедра пластической хирургии, сертификат по специальности «Пластическая хирургия».
2017 г. – Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова, сертификат по специальности «Хирургия».
2019 г. – Международная ассоциация последипломного образования, сертификат по специальности «Онкология».
2020 г. – Universitat Autonoma de Barcelona, магистерская программа по реконструктивной, эстетической и онкологической хирургии молочной железы (MRBS).

Опыт работы

2008–2012 гг. – Санкт-Петербургский городской клинический онкологический диспансер, врач онколог.
2012–2015 гг. – Санкт-Петербургский клинический научно-практический центр специализированных видов медицинской помощи (онкологический), маммологическое отделение, врач хирург.
2015–2019 гг. – Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова, хирургическое отделение, врач хирург.
2016–2019 гг. – Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова, онкологическое отделение, врач хирург.
С 2019 г. – многопрофильная клиника «РАМИ», врач маммолог-онколог, реконструктивно-пластический хирург.

Специализация

Занимается консервативным и хирургическим лечением маммологических заболеваний. Специализируется на онкологической, реконструктивной и эстетической хирургии молочных желез. Проводит также абдоминопластику, липосакцию, брахиопластику, бодилифтинг и липофилинг.

Направления

Проводит следующие виды маммологических операций:

резекция молочной железы, в том числе секторальная при доброкачественных образованиях;
энуклеация опухоли молочной железы;
удаление фиброаденом, кист и других образований;
редукционная маммопластика, в том числе по неэстетическим показаниям, например, при гигантомастии;
простая (без удаления лимфатических узлов) или радикальная мастэктомия;
удаление лимфатических узлов по онкологическим показаниям;
онкопластические операции – удаление опухолей молочных желез одномоментно с эстетической коррекцией, например, подтяжкой или редукцией груди;
реконструктивные и коррекционные пластические операции в сочетании с онкологическими операциями, либо после них, либо по эстетическим показаниям;
маммопластика – увеличение, подтяжка, липофилинг груди, коррекция сосков и ареол.

Повышение квалификации

2007 г. – цикл «Гнойная хирургия», Санкт-Петербургская медицинская академия постдипломного образования.
2007 г. – цикл «Диагностика в колопроктологии», Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина, Москва.
2013 г. – цикл «Применение интраоперационной лучевой терапии при операциях на молочной железе», Университетская клиника, Мангейм, Германия.
2013 г. – International Surgical Week (ISW), участие в секции BSI (Breast Surgery International), Хельсинки, Финляндия.
2015 г. – I Российский онкологический научно-образовательный форум с международным участием «Белые ночи-2015», соавтор тезисов на тему «Опыт применения дермагландулярной ротации в сочетании с треугольниками Burow (superior and inferior rotation flaps) при органсберегающих операциях на молочной железе», Санкт-Петербург.
2015 г. – XV Интенсивный курс «Реконструктивно-пластическая хирургия молочной железы», Казань.
2015 г. – интенсивный обучающий курс «Инъекционное омоложение лица» с анатомической частью под руководством профессора Jani van Loghem, MD (Нидерланды), Санкт-Петербург.
2015 г. – лекционно-практический курс «Сложные случаи эстетической хирургии молочной железы», Санкт-Петербург.
2015 г. – мастер-класс «Пластическая анатомия лица» под руководством профессора Michael Esson (Австралия), Санкт-Петербург.
2016 г. – II Российский онкологический научно-образовательный форум с международным участием «Белые ночи-2016», Санкт-Петербург.
2016 г. – VI Международный курс-тренинг для пластических и реконструктивных хирургов ICTPS International Course-Training for Plastic Surgeons, Санкт-Петербург.
2016 г. – мастер-класс «Онкопластические и реконструктивные вмешательства на молочной железе в онкологическом диспансере» (инструктор), Кострома.
2016 г. – IV Международная школа маммопластики, Казань.
2020 г. – цикл «Пластическая хирургия», учебный центр «Академия профессионального развития», Москва.

Дипломы и сертификаты

Побережная Алла Викторовна: Добро пожаловать

— Действительный член Международного общества эстетической и пластической хирургии (ISAPS)

— Действительный член Российского общества пластических реконструктивных и эстетических хирургов(ОПРЭХ).

Практическая деятельность:

С 2019 – пластический хирург клиники «A3BEAUTE» (сайт)

2011-2019 – пластический хирург клиники «РАМИ» (г. Санкт-Петербург)

2006-2011 — пластический хирург Центра пластической хирургии и лазерной косметологии «ОстМедКонсалт» (г. Санкт-Петербург)

2000–2003 гг. врач-хирург Новоржевской центральной районной больницы (с 2001 г. — зав. хирургическим отделением)

Конференции, симпозиумы, семинары:

2021 год

— Лектор: ПЕРВЫЙ ГИБРИДНЫЙ КУРС AASURGERY, Интенсивный курс «Современная липоскульптура», Россия, Санкт-Петербург

— IX сессия Школы Казбека Кудзаева. Владикавказ. Северная Осетия

— «V международный интенсивный обучающий курс по эстетической пластической хирургии» с участием Dr. Javier Beut MD (Испания), Санкт-Петербург, Россия

— IV научно-практическая конференция «Современная эстетическая и реконструктивная хирургия век. Периорбитопластика», Санкт-Петербург, Россия

— CADAVER-КУРС «Омолаживающие операции лица. Блефаропластика», Москва, Россия

2020 год

— Лектор: Современная Эстетическая Хирургия молочной железы и контуров тела. AASURGERY. Live Surgery & Injections Курс. Россия, Санкт-Петербург

— Лектор: Скульптурный семинар по анатомии нижней трети лица. SculptArt. Россия, Санкт-Петербург

— Лектор: On-line вебинар по абдоминопластике. Russian School. Россия

— Лектор: On-line вебинар по осложнениям в абдоминопластике. AASURGERY. Россия

— Лектор: On-line вебинар по осложнениям в маммопластике. AASURGERY. Россия

— Многочисленные On-line вебинары ISAPS и AASURGERY

— Лектор: Скульптурная анатомия лица и моделирование осложнений в рамках первого модуля Aesthetic Face Surgery of ISAPS F.A.S.T. Program 2020. Россия, Москва

— Лектор: II Черноморский конгресс по пластической хирургии и косметологии, Геленджик, Россия

— Лектор: III Балтийский конгресс по пластической хирургии и косметологии, г. Светлогорск, Россия

2019 год

— Лектор: IMCAS 2019. Париж, Франция

— Лектор: Продвинутая Эстетическая Хирургия век. AASURGERY. Advanced Aesthetic Blepharoplasty. Россия, Санкт-Петербург

— Лектор: Современная Эстетическая Хирургия груди и и контуров тела. AASURGERY. Modern Aesthetic Breast Surgery And Body Contouring. Россия, Санкт-Петербург

— Rhinoplasty Istanbul Workshop. Ринопластика. Турция, Стамбул

— 2d Modul: Aesthetic Breast Surgery of ISAPS F.A.S.T. Program. Россия, Москва

— 3d Modul: Aesthetic Body Surgery of ISAPS F.A.S.T. Program. Россия, Москва

— Продвинутая Эстетическая Ринопластика, Отопластика. AASURGERY. Live Surgery & Injections Курс. Россия, Санкт-Петербург

2018 год

— Лектор: Современная Эстетическая Хирургия молочной железы и контуров тела. AASURGERY. Четвертый Live Surgery & Injections Курс. Россия, Санкт-Петербург

— Лектор: VIII международный обучающий курс по пластической хирургии. ICTPS (International Course — Training for Plastic Surgeons) Россия, Санкт-Петербург

— III конференция по проблемам реконструктивной и эстетической хирургии у больных раком молочной железы. Moscow Brest Meeting

— Masterclass in Advanced Facial Rejuvenation by Cloude Le Luarn. Обучающий продвинутый курс по Хирургии лица. Франция, Париж

— V Международная школа маммопластики в Казани. Россия, Казань

— II Академия Иммунитета. Россия, Санкт-Петербург

— Скульптурный портрет. Интенсив. SculptArt. Россия, Санкт-Петербург

— Пластическая анатомия фигуры человека. SculptArt. Россия, Санкт-Петербург

2017 год

— Международный мастер-класс по маммопластике, Dr. Ruth Graf, (Mammoplasty Workshop & Live surgery) . Россия, Екатеринбург

— 2-ой Международный интенсивный обучающий курс по эстетической пластической хирургии, Prof. Dr. Oscar M. Ramirez, Россия, Санкт-Петербург. Эндоскопическое омоложение лица, эстетическая ринопластика, коррекция контуров тела

— Международная конференция по инновационным технологиям в ринопластике, (Modern Rhinoplasty: Effective Techniques and Innovations). Россия, Санкт-Петербург

— Международный курс «Инновационный методы лица», Dr. Bryan Mendelson (Австралия), Россия, Санкт-Петербург

— VII Международный курс-тренинг для пластических и реконструктивных хирургов, Россия, Санкт-Петербург

— Курс «Классики пластической хирургии. Dr.Sam T.Hamra и его методики. Пластика лица и шеи – ответы на все вопросы. Россия, Москва

— ЛЕКТОР : II международный симпозиум ICC ( International Cosmetic Congress 2017), Каир, Египет.

— Лектор: Первая конференция ISAPS в России, Москва

— Лектор: Обучающий курс по эстетической хирургии молочных желез. AASURGERY. Россия, Санкт-Петербург

2016 год

— 12^th Annual Aesthetic Surgery Symposium , USA, Chicago

— Международный курс «Инновационные методы омоложения лица», Dr. Bryan Mendelson (Австралия), Россия, Санкт-Петербург

— 4-ый Национальный конгресс «Пластическая хирургия, эстетическая медицина и косметология», Россия, Москва

— II Advanced Visiting Professor Program ISAPS with Professor Dr. Oscar M. Ramirez, Kiev, Ukraine

— Продвинутая Эстетическая Хирургия лица, груди и тела. AASURGERY. Четвертый Live Surgery & Injections Курс. Россия, Санкт-Петербург

— Эстетическая хирургия молочных желез. AASURGERY. Россия, Санкт-Петербург

— ЛЕКТОР : I международный симпозиум ICC ( International Cosmetic Congress 2016), Каир, Египет.

2015 год

— Российско-Французская конференция «Окулопластика и эстетическая блефаропластика», Россия, Санкт-Петербург

— 5-й международный обучающий курс по пластической хирургии, Россия, Санкт-Петербург (International Course — Training for Plastic Surgeon)

— Продвинутая Эстетическая Ринопластика, Отопластика. AASURGERY. Третий Live Surgery & Injections Курс. Россия, Санкт-Петербург

2014 год

— Международный симпозиум, посвященный вопросам эстетической хирургии лица и тела, США, Нью-Йорк (Cutting Edge Aesthetic Surgery Symposium 2014 ,USA, New York)

— V международный обучающий курс по пластической хирургии. ICTPS (International Course-Training for Plastic Surgeons) Россия, Санкт-Петербург

2013 год

— 47-й Международный симпозиум по пластической хирургии, США, Майами, Флорида (47th Annual Baker Gordon Educational Symposium)

— 2-й международный диссекционный курс по реконструктивной хирургии груди, США, Дарем, Северная Каролина (Durham Breast Perforator Course)

— Международный обучающий курс ISAPS по пластической хирургии, Россия, Санкт-Петербург

— Международный продвинутый курс по пластической хирургии «Продвинутая хирургия груди», Россия, Санкт-Петербург

— 3-й международный обучающий курс по пластической хирургии, Россия, Санкт-Петербург (International Course-Training for Plastic Surgeon)

— Международный симпозиум по пластической хирургии, США, Чикаго (QMP Aesthetic Surgery Symposium 2013, USA, Chicago)

— Международный симпозиум, посвященный вопросам эстетической хирургии лица, США, Нью-Йорк (Cutting Edge Aesthetic Surgery Symposium 2013 USA, New York)

2012 год
— Международный симпозиум по ринопластике, США, Нью-Йорк (The Cutting Edge Aesthetic Surgery Symposium)
— Международные курсы по эстетической пластической хирургии и минимально-инвазивным методикам, Россия, Санкт-Петербург (International course on Aesthetic Plastic Surgery and Minimally Invasive Methods of Rejuvenation)

2011 год
— 6-я европейская конференция по реконструктивной хирургии и онкологии молочных желез, Италия, Милан (Oncoplastic and reconstructive surgery of the breast: Sixth european conference)
— Международные курсы ISAPS, Россия, Санкт-Петербург (ISAPS — Saint-Petersburg course )
— Международный образовательный симпозиум «Эстетическая хирургия и дерматокосметология в омоложении лица и периорбитальной области», Россия, Москва (Alain Fogli (Франция), Dirk Richter (Германия), Michael Yaremchuk (США), Tom Biggs (США)).

2010 год
— Международный симпозиум по окулопластике (пластической хирургии век и окологлазничной области), Германия, Мюнхен.
— Курс Адама Рубинштайна ( США) «Эндоскопическая техника в пластической хирургии», Россия, Москва.
— Курс «Эндоскопические методы омоложения лица и шеи. Использование лицевых имплантов»
— I международная Школа пластической хирургии и косметологии, форум «Пластическая хирургия»

2009 год
— 3-й профессиональный форум «Искусство пластической хирургии».
— 13-й международный курс по пластической и реконструктивной хирургии с участием проф. A. M. Feller(Германия)и д.м. Dirk Richter (Германия) по темам маммопластика, комплексное лечение ожирения, абдоминопластика, бодилифтинг, подтяжка бедер, брахиопластика.2010 курс Михаила Яремчука (Michael Yaremchuk , США) «Лицевые импланты — эстетическая коррекция лица»
— сертификационный курс «Основы контурной пластики»
— Международный симпозиум (Германия, г. Мюнхен. Аспекты хирургической коррекции возрастных изменений век и периорбитальной области (Oculuplastic surgery).

2008 год
— участник 5-го международного курса по пластической хирургии «Омолаживающие операции лица. Контурная пластика тела: редукционная маммопластика, абдоминопластика, липосакция, липофилинг».
— участник первой международной конференции «Пластическая, реконструктивная, эстетическая хирургия молочной железы».
— интенсивный курс лекций проф. Bryant Toth(США, Калифорния), проф. Боровиков А.М.(г. Москва) по темам: Маммопластика, корректирующие операции с применение имплантов. Фэйс-лифтинг.

2007 год
— участник семинара «Эстетика аугментационной маммопластики».
— сертификационный курс «Теория и практика применения препарата Диспорт в эстетической медицине».
— участник Международной конференции «Новое в пластической хирургии и комбустиологии»..
— участник мастер-класса профессора L. Ribeiro(Бразилия) и профессора БлохинаС.Н.(Россия)
— специализация по челюстно-лицевой хирургии.

2006 год
— участник семинара «Современная ринопластика» профессора Пшениснова К.П.
— 4-й международный курс по пластической хирургии «Омолаживающие операции на лице и шее.Эндопротезирование молочных желез. Одномоментная мастопексия и эндопротезирование. Капсулярные контрактуры».

2005 год
— цикл «Реконструктивная микрохирургия в травматологии и ортопедии»
— участник первого курса эндоскопической пластической хирургии лица с международным участием.
— интенсивные курсы по пластической и реконструктивной хирургии.

2004 год
— цикл усовершенствования «Лечение заболеваний и последствий травмы кисти». — цикл усовершенствования «Детская кисть и стопа: клиника, диагностика, лечение и пластическая хирургия».- интенсивные курсы по пластической и реконструктивной хирургии.

Образование:

2011 г. Сертификационный курс по эстетической, реконструктивной и пластической хирургии СПбМАПО.
2010 г. Сертификационный курс по общей хирургии СПбМАПО.
2008 г. Сертификационный курс по челюстно-лицевой хирургии СПбМАПО.
2003 — 2005 гг. Ординатура на кафедре пластической и эстетической хирургии СПбМАПО
2001 г. Специализация по онкологии.
2000 г. Специализация по проктологии.
1999 — 2000 гг. Интернатура по общей хирургии в Псковской областной больнице
1993 — 1999 гг. СПбГПМА

Побольше антибиотиков и постельного режима – мифы о хирургии, которые пора забыть

Фото: пресс-служба «Клиника Нуриевых»

В современной мировой хирургии распространена методика быстрого восстановления после операции Fast Track (быстрый путь). Методика основана на многолетних статистических исследованиях. Ее сторонники развенчивают многие мифы, существующие о подготовке к операции и реабилитации. В Казани эту методику внедрили в отделении хирургии Клиники Нуриевых. Почему обязательно нужно ходить после операции и не обязательно принимать антибиотики, читайте в нашем материале.

Миф 1. Перед операцией нужно долго голодать

«На операцию нужно идти с пустым кишечником. Поэтому, чем дольше голодать – тем лучше» – миф, который укоренился в клинической практике. Часто пациенты в ожидании операции вынуждены голодать по 2 или 3 дня. Непосредственно перед операцией для очистки кишечника дают фортранс и делают клизму.

Полная очистка необходима при операциях, которые затрагивают прямую кишку. Для большинства гинекологических и урологических операций долгое воздержание от пищи излишне и даже вредно. Доказано, что длительное голодание ведет к истощению организма и снижению его регенеративных способностей, которые так нужны после операции. Как следствие, увеличивается срок реабилитации. Клизма – бесполезна и только увеличивает психологический дискомфорт, когда пациент, и без того, взволнован.

Перед операцией достаточно воздержаться от приема пищи 6 часов. Если она назначена на вторую половину дня, можно позавтракать. В ряде случаев за 2 часа до операции разрешено выпить стакан воды, чтобы избежать обезвоживания.

Миф 2. Сложные операции требуют долгого восстановления и оставляют заметные рубцы

«Лапароскопия только для легких случаев. После сложной операции все равно придется долго восстанавливаться и останутся заметные следы» – в ряде случаев это утверждение верно, но даже серьезные операции можно сделать без разрезов и шрамов. Лапароскопией называют операцию, которая проводится через небольшие проколы. Хирург не разрезает полость живота, а работает инструментами, глядя на монитор.

В Клинике Нуриевых так проводят гинекологические операции по удалению миомы матки или даже самой матки. Техника лапароскопических операций за последние годы ушла далеко вперед. Хирурги умеют останавливать кровотечения и зашивать ранки лапароскопическими инструментами даже лучше, чем при классических операциях.

Последствия такого подхода заметны сразу после операции. Не нужно лежать прикованным к постели несколько дней, нет заметной боли при ходьбе и не нужно носить бандаж. Восстановление приходит быстрее, а возвращаться к полноценной жизни можно в тот же день. Следы от 2 или 3 проколов уже скоро становятся совершенно незаметными.

Фото: пресс-служба «Клиника Нуриевых»

Миф 3. Чем дольше лежать, тем лучше

«После операции лучше подольше пробыть на постельном режиме. Организму нужен покой» – звучит убедительно, но это тоже миф. Тяжелых физических нагрузок следует избегать, но это не означает, что запрещена любая активность.

Длительное пребывание в неподвижном состоянии ухудшает сердечно-легочную деятельность, приводит к застою крови в венах нижних конечностей, повышая риск тромбоза. А вот ранний подъем улучшает сердечно-легочную деятельность и хорошо стимулирует кишечник.

Вставать и ходить можно уже через 3-4 часа после операции. Чтобы было легче подняться с постели, в Клинике Нуриевых применяют современные препараты для анестезии, которые не оказывают побочного действия на центральную нервную систему. Пока пациент находится под наркозом его берегут от холода и прогревают, это тоже помогает быстрее восстановиться.

Миф 4. Прошел операцию – пей антибиотики

«После операции нужно пройти курс антибиотиков, чтобы не было заражения» – еще один очень распространенный миф. На самом деле статистика говорит, что обязательный прием антибиотиков не снижает риск инфекционных осложнений. Наоборот, если антибиотик вдруг действительно понадобится, его прием «для профилактики» только ослабит эффект.

Поэтому в Клинике Нуриевых не выписывают антибиотики всем пациентам отделения хирургии в обязательном порядке. Достаточно один раз ввести антибиотик за 15-20 минут перед операцией. У нашего организма много ресурсов для восстановления. Задача хирурга – помочь организму, а не перегружать его.

Партнерский материал

Канадское общество пластических хирургов Société Canadienne des Chirurgiens Plasticiens

МЕТОД:

Проспективное исследование с двумя когортами (ERAS/TRAS). Пациенты ERAS были набраны во время предоперационной консультации, зарегистрированы в качестве дневного хирургического вмешательства и получили стандартизированное периоперационное обучение и мультимодальную анальгезию. Пациенты с TRAS получали текущий стандарт лечения (госпитализация, наркотики). Пациентам ERAS звонили по телефону на первый или второй день после операции и заполняли анкету, утвержденную для оценки качества жизни после амбулаторной операции (также заполняли пациенты TRAS в стационаре).Результаты были подвергнуты статистическому анализу (Т-критерий/Хи-квадрат).

РЕЗУЛЬТАТЫ:

Когорты ERAS и TRAS включали 30 и 11 пациентов соответственно. Средняя продолжительность пребывания в стационаре была значительно короче в группе ERAS (0,1 дня, 1,6 дня, p<0,001), при этом 91% выписались в тот же день. Значимых различий по возрасту (52,3 года, 45,8 года, р=0,16) или доле случаев прямой имплантации (67%, 64%, р>0,05) или билатеральной хирургии (83%, 91%, р>) не выявлено. 0,05) между группами ERAS и TRAS соответственно. Пациенты с ERAS значительно реже испытывали тошноту (7.6, 4,7, p = 0,005) и сильная боль (8,1, 5,5, p = 0,01), большее удовольствие от еды (8,1, 3,5, p < 0,001) и чувство большего отдохнувшего (6,2, 3,7, p = 0,004), чем коллеги по TRAS. . Группы ощущали сопоставимую поддержку (9,7, 9,5, р=0,44) и контрольную (7,3, 6,0, р=0,16). Достоверных различий по осложнениям, требующим оперативного вмешательства в течение 30 дней (флегмона ± серома [16,7%, 18%; p>0,05], гематома [3,3%, 9%, p>0,05]) между группами не выявлено. В группе ERAS эти осложнения произошли через пять дней (повторная госпитализация также была бы необходима, если бы TRAS). Все пациенты ERAS заявили, что они снова выберут этот путь.

ВЫВОДЫ:

Усовершенствованный протокол восстановления, разработанный в Калгари для мастэктомии + реконструкции с помощью имплантатов, позволил безопасно вылечить 30 пациентов с высокой степенью удовлетворенности пациентов и выпиской в тот же день.

Цель обучения:

Оценить полезность расширенного протокола восстановления для значительного улучшения качества восстановления пациента после мастэктомии + реконструкции имплантатами.

Раков | Бесплатный полнотекстовый | Паннексин-1 связан с усиленным эпителиально-мезенхимальным переходом в тканях больных раком молочной железы и в клеточных линиях рака молочной железы

1.Введение

Рак молочной железы остается основной причиной смертности женщин во всем мире [1]. Рак молочной железы представляет собой гетерогенное заболевание, демонстрирующее высокую молекулярную изменчивость. Профилирование экспрессии генов всего генома, основанное на сравнении микрочипов, классифицировало рак молочной железы на подтипы в соответствии с их молекулярными сигнатурами [2,3].

Эти сигнатуры микрочипов приводят к стратификации пациентов с раком молочной железы на основе их уровня экспрессии рецептора эстрогена альфа (ERα), рецептора прогестерона (PR) или рецептора 2 эпидермального фактора роста человека; ERBB2 (HER2) [2,3].Молекулярное профилирование классифицировало рак молочной железы на следующие «внутренние подтипы рака молочной железы»: нормальный, люминальный A (ER ⁺ PR ^+/− HER2 ⁻), люминальный B (ER ⁺ PR ^{+/ −} HER2 ⁺ и/или Ki67 ⁺), HER2-обогащенный (PR ⁺ и сверхэкспрессия HER2 из-за геномной амплификации ERBB2) с примерно половиной HER2-обогащенных опухолей, экспрессирующих ERα, и базальные -подобные (ER ^— PR ^— HER2 ^— и экспрессирующие базальные цитокератины, тройной негатив, TNBC) [2,3,4,5].Ожидается, что дальнейшее молекулярное профилирование позволит разделить известные внутренние подтипы рака молочной железы на новые подклассы, например, недавно выявленный базальноподобный рак молочной железы с низким уровнем клаудина [4,6].

Самое главное, внутренние подтипы рака также демонстрируют клиническую гетерогенность, а также различаются по заболеваемости, выживаемости пациентов и реакции на лечение [6]. процесс, свидетельствующий о прогрессировании рака.Различные виды рака преимущественно метастазируют в определенные органы [7,8,9]. При раке молочной железы метастазы в основном направляются в легкие, кости и головной мозг [10,11]. Метастазирование включает внутренние (генетические) и внешние (негенетические) факторы [12,13] и является причиной более 90% смертности и заболеваемости раком [14]. Межклеточная связь и связь между клеткой и ее внеклеточной средой играют решающую роль в поддержании гомеостаза [15,16] и участвуют в прогрессировании рака и распространении раковых клеток [12].В этом контексте метастазирование в значительной степени связано с нарушением связи между клетками и их внеклеточным микроокружением [12]. Паннексины (PANX) представляют собой трансмембранные белки позвоночных [17], которые опосредуют связь между клетками и внеклеточной средой [18,19, 20,21].

PANXs имеют сходную топологию с белками, образующими щелевые соединения, connexins [22,23], однако их способность образовывать межклеточные соединения остается спорной [23,24]. У человека описаны 3 PANX, а именно PANX1, PANX2 и PANX3.PANX1 является наиболее хорошо охарактеризованным паннексином, причастным к ряду заболеваний человека [17,18,25,26]. Мало что известно о его роли в онкогенезе или его механистическом участии в прогрессировании рака молочной железы [27,28,29]. Ферлоу и др. идентифицировали PANX1 ^1–89, укороченную форму PANX1 с С-концевым доменом, в качестве белка с высокой экспрессией в метастатических клетках рака молочной железы и в качестве прометастатического маркера, способствующего выживанию раковых клеток в сосудистой системе [30]. Более того, Стюарт и др.изучали роль PANX1 во время нормального развития молочной железы и in silico в тканях рака молочной железы человека. Они описали повышенную экспрессию PANX1 в альвеолярном развитии после перехода молочной железы к беременности и ранней лактации у мышей.

Они также сообщили об увеличении экспрессии PANX1 по мере прогрессирования рака молочной железы у пациентов. Примечательно, что сверхэкспрессия PANX1 коррелировала с плохими клиническими исходами с точки зрения общей выживаемости и выживаемости без прогрессирования заболевания [31]. Напротив, другие сообщили, что PANX1 может быть супрессором опухоли.Например, сообщалось, что PANX1 играет роль супрессора опухолей в клетках глиомы С6 [29], в плоскоклеточном и базально-клеточном раке кожи [32] и в рабдомиосаркоме [33]. Это противоречие в отношении роли PANX1 во время прогрессирования рака может быть связано с различиями в типе или стадии рака [31]. а также метастазирование за счет усиления потери контактного торможения, стимуляции подвижности клеток и повышения инвазивности клеток [35,36,37].Эпителиально-мезенхимальный переход характеризуется потерей эпителиальных фенотипов и приобретением мезенхимальных характеристик [35,36,37,38,39], включая нарушение межклеточных соединений, реорганизацию актинового цитоскелета и усиление экспрессии мезенхимальных генов и снижение экспрессии эпителиальных генов [40].

Усиленный профиль ЭМП и повышенная экспрессия мезенхимальных маркеров, таких как N-кадгерин и виментин, коррелируют с повышенной клеточной инвазивностью [36].Вовлечение ЭМП в рак молочной железы было показано in vitro, в нормальных и злокачественных эпителиальных клетках молочной железы, а также in vivo у мышей [41]. Генерация и поддержание стволовых клеток рака молочной железы требуют передачи сигналов EMT [42]. Во время прогрессирования рака индукция EMT задействует сложную сеть сигнальных молекул, включающую пути TGF-β, Wnt, Notch, NFκB и ERK/MAPK [43]. В клетках, подвергающихся ЕМТ, ядерная локализация β-катенина активирует гены-мишени, включая гены ЕМТ [41,44]. Белковый комплекс β-catenin/TCF/LEF напрямую активирует гены, связанные с EMT, такие как факторы транскрипции EMT Snail1 и Zeb1 [41,44,45].Snail1 и Zeb1 действуют как репрессоры транскрипции E-кадгерина, что приводит к снижению экспрессии E-кадгерина во время ЕМТ [46,47]. набор данных, доступный в базе данных The Cancer Genome Atlas (TCGA), и коррелирующий экспрессию PANX1 с общей выживаемостью (OS).

Кроме того, был проведен анализ обогащения набора генов (GSEA), чтобы найти пути, обогащенные раком молочной железы, на основе экспрессии PANX1. Для подтверждения данных in silico использовались клеточные линии рака молочной железы MDA-MB-231 и MCF-7.Было проведено фармакологическое ингибирование пробенецидом [48] или нокаутом гена CRISPR/Cas9 каналов PANX1, и их влияние на регуляцию ЭМП было оценено в обеих клеточных линиях.

В этом отчете представлены доказательства того, что повышенная экспрессия PANX1 при различных подтипах рака молочной железы усиливает фенотип ЕМТ in silico и in vitro и связана с более неблагоприятным прогнозом рака молочной железы.

3. Обсуждение

Коннексины опосредуют прямую межклеточную коммуникацию [50,51,52] и поддерживают гомеостаз клеток и тканей [53,54].Потеря коннексинов является отличительной чертой прогрессирования рака, включая рак молочной железы [55,56,57]. Паннексины, семейство гликопротеинов позвоночных [17], имеют общие функциональные и структурные особенности с коннексинами, а также опосредуют связь между клеткой и ее микроокружением [20,25].

PANX1, наиболее хорошо охарактеризованный член семейства паннексинов, играет важную роль в развитии и дифференцировке тканей [17, 58, 59, 60, 61] и участвует в ряде заболеваний человека [25]. Сообщалось об экспрессии PANX1 во время развития молочной железы мыши и в молочной железе взрослых мышей [31]; однако его роль в развитии рака молочной железы все еще развивается [62].Наши результаты выявили роль PANX1 в метастазировании рака молочной железы посредством регуляции EMT. Мы предоставляем доказательства того, что активация PANX1 коррелирует с плохим прогнозом у пациентов с раком молочной железы и что она по-разному выражена в различных «внутренних» подтипах рака молочной железы человека. Это наблюдение подтверждается в предыдущем отчете Stewart et al. которые сопоставили PANX1 с отрицательными клиническими исходами, что привело к плохой общей выживаемости и выживаемости без отдаленных метастазов у пациентов с раком молочной железы с использованием массивов in silico [31].Кроме того, Ферлоу и соавт.

показали, что PANX1 обогащен в очагах метастатического рака молочной железы без какого-либо выяснения основного механизма [30]. Здесь мы предоставили данные о путях и биологических процессах, которые обогащаются при повышенной экспрессии PANX1. Гены пути EMT были среди высокообогащенных путей генной онтологии (GO) после GSEA. Чтобы подтвердить наши результаты in silico, мы использовали две линии клеток рака молочной железы человека, MCF-7 и MDA-MB-231, это широко используемые модели клеточных линий. для изучения метастазов [63].Мы оценили влияние канала PANX1 на прогрессирование рака молочной железы посредством фармакологического ингибирования PANX1 в этих клетках. Пробенецид (PBN), препарат, который использовался для лечения подагры, является мощным ингибитором PANX1 [48, 64, 65] и входит в число нескольких соединений, о которых сообщалось, что они эффективно блокируют активность канала PANX1 [66]. Обработка клеток MCF-7 и MDA-MB-231 с помощью PBN не только снижала активность и экспрессию PANX1, но также значительно уменьшала пролиферацию этих клеток, вызывая остановку клеточного цикла при переходе G0/G1.

Эффективно PBN уменьшал количество циклических клеток, проходящих репликацию ДНК и митоз. Ранее аналогичные эффекты на жизнеспособность клеток и экспрессию PANX1 были обнаружены в клетках MDA-MB-231 [67] и в клетках гиппокампа старых крыс [68] соответственно. В клетках гиппокампа наблюдалось заметное снижение уровня белка PANX1 после обработки PBN, аналогично результатам, полученным в этом исследовании. Остановка клеточного цикла, вызванная PBN, может объяснить его недавнее использование в качестве эффективной адъювантной терапии для сенсибилизации клеток рака молочной железы и повышения эффективности химиотерапии бисфосфонатами [67].Наши данные показывают, что ингибирование активности канала PANX1 с использованием PBN или удаление гена PANX1 в клетках рака молочной железы действительно снижало уровни мРНК нескольких генов EMT, тем самым подтверждая данные GSEA in silico. Важно отметить, что ингибирование каналов PANX1 или делеция PANX1 активировали E-кадгерин (эпителиальный маркер) и подавляли N-кадгерин (мезенхимальный маркер).

Активация PANX1 поддерживает фенотип EMT, в то время как его ингибирование или подавление способствует переходу от мезенхимы к эпителию.ЕМТ [34] имеет решающее значение в метастатическом процессе [36] и связан с миграцией и инвазией опухолевых клеток в окружающую строму и диссеминацией во вторичные органы [35,37]. EMT частично опосредуется молекулой клеточной адгезии E-cadherin [38,39]. E-кадгерин имеет решающее значение для поддержания фенотипа эпителиальных клеток, и его снижение коррелирует с повышенной инвазивностью клеток рака молочной железы [69]. Кроме того, экспрессия неэпителиальной и мезенхимально-ассоциированной молекулы N-кадгерина способствует повышению инвазивности и подвижности клеток рака молочной железы [69,70].Набор плейотропно действующих факторов транскрипции, включая Snail, Slug и другие регуляторы, управляет EMT. Наше исследование выявило снижение уровней мРНК Snail и Slug в образцах TCGA и при подавлении PANX1 в клетках MCF-7 и MDA-MB-231. Эти транскрипционные факторы регулируют ЭМП при различных типах злокачественных опухолей и их инвазивность.

Это было подтверждено исследованиями, которые показали, что транскрипционные факторы EMT, такие как Snail, могут вызывать метастазирование при эктопической сверхэкспрессии [70,71,72].Мы также сообщили о значительном снижении экспрессии TGF-1β в клетках MCF-7. TGF-1β, известный своим антипролиферативным действием и уклонением раковых клеток от иммунитета [73,74], активирует ЭМП [75,76]. Кроме того, PANX1 играет роль в гипоксии опухоли [77]. Подавление PANX1 приводило к снижению уровней мРНК фактора транскрипции гипоксии и маркера HIF-1α в клетках рака молочной железы. Гипоксия стабилизирует несколько факторов транскрипции, которые способствуют прогрессированию ЭМП и метастазированию раковых клеток [78,79]. В совокупности мы показываем, что удаление гена PANX1 или ингибирование его активности восстанавливает ЭМП.Этот результат подтверждает данные GSEA, которые продемонстрировали, что активация PANX1 коррелирует с усиленным состоянием EMT. Аналогичные результаты были недавно получены в клетках рака яичка, где подавление PANX1 или его ингибирование снижало уровни белка виментина и повышало уровни белка E-кадгерина с помощью сигнально-регулируемой киназы (ERK) [80].

GSEA показал, что активация PANX1 коррелирует с экспрессией нескольких молекул клеточной адгезии, включая β-катенин. Злокачественные и инвазивные опухоли молочной железы связаны с мутациями и гиперэкспрессией β-катенина.Во время ЕМТ ядерная локализация β-катенина активирует гены-мишени, группу которых составляют гены ЕМТ [41,44]. Транскрипционный комплекс β-catenin/TCF/LEF напрямую активирует гены, связанные с EMT, такие как факторы транскрипции EMT Snail1 и Zeb1 [41,44,45]. Snail1 и Zeb1 действуют как репрессоры транскрипции E-cadherin, что приводит к подавлению экспрессии E-cadherin во время EMT [46,47]. Из этих установленных маркеров EMT наше исследование показало, что факторы транскрипции Snail и Slug сильно коррелируют с экспрессией PANX1.PANX1, возможно, может действовать косвенно, регулируя гены, такие как β-catenin, которые затем регулируют EMT. С др. стороны, правдоподобна прямая роль PANX1 как регулятора транскрипции EMT в ядре. Эта прямая роль PANX1 не кажется надуманной, поскольку о такой роли сообщалось для Connexin 43 [81], белка, который имеет структурное и функциональное сходство с PANX1.

Однако этот механизм требует дальнейшего изучения. Интересно, что снижение экспрессии ключевых маркеров ЕМТ при ингибировании PANX1 или генетической делеции также коррелировало со снижением активности матриксных металлопротеиназ (ММП) в клетках MCF-7 и MDA-MB-231 и снижением потенциала инвазии клеток MDA-MB-231. .ММР играют жизненно важную роль в микроокружении рака и являются маркерами плохого прогноза у пациентов с раком молочной железы [82]. Снижение активности ММР и инвазивность являются общими характеристиками менее метастатических форм рака [82]. В целом, можно предположить, что путь действия PANX1 объясняет, почему избыточная экспрессия PANX1 коррелирует с плохим прогнозом у пациентов с раком молочной железы. В этом пути усиленная регуляция PANX1 усиливает фенотип EMT клеток рака молочной железы, усиленный фенотип EMT усиливает метастатический потенциал и инвазивность клеток рака молочной железы, например, за счет повышения уровней или активности MMP и других метастатических генов.

Этот сценарий подтверждается данными недавних исследований клеток рака яичка, где ингибирование PANX1 подавляет гены EMT, активирует E-кадгерин, подавляет MMP-9 и снижает инвазию клеток [80]. Фриман и др. показали, что снижение уровня белка PANX1 в клетках меланомы с использованием shRNA или блокирование канала PANX1 с помощью PBN или карбеноксолона снижает рост, миграцию и инвазивность клеток, вероятно, через путь Wnt/β-катенин [83].

Вместе наши результаты определяют роль PANX1 в прогрессировании рака молочной железы и то, что PANX1 опосредует эту роль, способствующую развитию опухоли, путем модификации пути EMT.

4. Материалы и методы

4.1. Культура клеток

Эпителиальная клеточная линия аденокарциномы протоков молочной железы человека MCF-7 (ER+ PR+ HER2 ^–) [84] и трижды негативная эпителиальная аденокарцинома клеточной линии MDA-MB-231, характеризующаяся высокими метастатическими и инвазивными свойствами [84,85 ], выращивали на среде RPMI-1640 (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США), дополненной 10% фетальной телячьей сывороткой (FBS, Sigma) пенициллином/стрептомицином (P/S, 100 ЕД калиевого пенициллина и 100 мкг стрептомицина сульфата на 1 мл среды, Sigma).

Пробенецид (PBN, Santa Cruz Biotechnology, Даллас, Техас, США), также известный как п-(дипропилсульфамоил)бензойная кислота, является ингибитором канала PANX1 [48]. PBN растворяли в ДМСО, и клетки, обработанные ДМСО, использовали в качестве контроля носителя.

4.2. CRISPR/Cas9-опосредованное нацеливание на PANX1 человека

Чтобы нокаутировать ген PANX1 из клеток MDA-MB-231, с использованием программного обеспечения CRISPOR (www.crispor. tefor.net) и встроили в плазмиду pX330-puro-Rosa26-h4F3B, (плазмида Addgene # 73131; любезный подарок Dr.Агнел Сфейр [86]). Клетки MDA-MB-231 при 70–80% слиянии трансфицировали вектором, содержащим гРНК PANX1, с использованием липофектамина 2000 (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США). Клонирование в предельных разведениях проводили путем трипсинизации клеток и их посева при плотности 0,8 клеток на лунку 96-луночного планшета. После 10 дней селекции в среде, содержащей 1 мкг/мл пуромицина, растущие колонии изолировали и переносили в культуральные чашки большего размера для дальнейшего размножения.

Отобранные и расширенные колонии далее выращивали и собирали для анализа РНК и белка.Нокаут экспрессии PANX1 был подтвержден с помощью qRT-PCR, вестерн-блоттинга и иммунофлуоресценции. Клетки MDA-MB-231 с нокаутом PANX1 обозначаются как MDA-PANX1 ^–. Имитация трансфекции клеток MDA-MB-231 была получена путем трансфекции пустой плазмиды pX330-puro-Rosa26-h4F3B без какой-либо нацеливающей гРНК в клетки MDA-MB-231 с последующей селекцией в пуромицине, как описано выше, и эти клетки использовали в качестве контроль к ячейкам MDA-PANX1 ^—.

4.3. Анализ экспрессии генов In Silico

4.3.1. Наборы транскриптомных данных Данные

BRCA RNAseq были получены из базы данных The Cancer Genome Atlas (TCGA) [87]. Значения экспрессии гена были представлены в виде картированных чтений Fragment Per Kilobase Million (FPKM). Перед анализом значения FPKM были преобразованы в шкалу log2 после добавления единицы (log2(x+1). Клинические аннотации были получены в среде R с использованием пакета cgdsr cbioportal [88,89].

Набор данных содержал 1071 BRCA и 113 нормальных молочных желез. образцы тканей Среди нормальных тканей в общей сложности 109 образцов имели парные ткани BRCA, в то время как 4 остались непарными и, таким образом, были исключены.Статус ERα, PR и HER2 определяли с помощью иммуногистохимии в первоначальной публикации TCGA [87]. Нормализованные данные микрочипа из Международного консорциума по молекулярной таксономии рака молочной железы (METABRIC) [90] и соответствующие клинические аннотации были загружены с cbioportal с помощью пакета cgdsr.

4.3.2. Анализ обогащения набора генов (GSEA)

GSEA был выполнен для выявления биологических процессов Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) и онтологии генов (GO), которые положительно коррелируют с экспрессией PANX1.Наборы генов биологических процессов KEGG и GO были загружены из базы данных молекулярных сигнатур (MSigDB) (http://www.broadinstitute.org/gsea/). Анализ был выполнен в настольном программном обеспечении GSEA, разработанном Broad Institute [91,92].

Гены были ранжированы на основе их корреляции Пирсона с уровнем экспрессии PANX1. Анализ обогащения проводили с использованием 1000 перестановок фенотипов и наборов генов с номинальным значением P

. 4.3.3. Протеомный анализ

Изобарические метки для относительной и абсолютной количественной оценки (iTRAQ) Данные протеомики 105 образцов TCGA BRCA были собраны с портала данных Консорциума клинического протеомного анализа опухолей (CPTAC) [93].Проанализированные образцы охватывали 4 подтипа BRCA: люминальный A, люминальный B, базальноподобный и HER2-обогащенный. Экспрессию белка рассчитывали как отношение log2 к пулу внутренних эталонов, включающему смесь из 40 образцов с одинаковым представлением 4 подтипов молочной железы. Среди 105 доступных образцов только 72 образца содержали данные об экспрессии белка PANX1.

4.4. Анализ выживаемости

Общая выживаемость (ОВ) определялась как продолжительность с момента постановки диагноза (в месяцах) до смерти. Пациенты с наборами данных TCGA или METABRIC были разделены на группы с высокой, промежуточной или низкой оценкой экспрессии PANX1 на основе 25-го и 75-го процентилей экспрессии PANX1.Группы с высокой, промежуточной и низкой экспрессией PANX1 были нанесены на график с использованием кривых выживаемости Каплана-Мейера. Графики Каплана-Мейера использовались для сравнения ОС групп с высокой/промежуточной экспрессией и с низкой экспрессией PANX1.

4.5. Пациенты и образцы

Образцы рака молочной железы были получены из отделений патологии в Медицинском центре Американского университета Бейрута и Медицинском центре Университета больницы Хаммуд после получения одобрения комитета по этике (номер ссылки IRB: PALM.ФБ. 01). Всего 37 пациентов соответствующего возраста (старше 50 лет) без анамнеза лечения были разделены на 3 группы. Группа I ТНРМЖ (11 образцов тройного негативного рака молочной железы [ТНРМЖ]), группа II HER2 ⁺ (11 образцов рецептора эстрогена [ER] ⁻ /рецептор прогестерона [PR] ^– /рецептор эпидермального фактора роста 2 [HER2] ⁺ рак молочной железы), и группа III HER2 ^– (15 экз.

ER ⁺ PR ⁺ HER2 ^– рак молочной железы).Все группы оценивались по гистологическому подтипу, степени, центральному фиброзу и некрозу опухоли. Типичный фиксированный формалином и залитый парафином (FFPE) тканевой блок из каждого случая был получен для молекулярного анализа. Отрицательный контроль был получен из ткани молочной железы пациенток, перенесших редукционную маммопластику [94]. Протокол этого исследования был одобрен Американским университетом Бейрута с разрешения отделений патологии Медицинского центра Американского университета Бейрута и Университетского медицинского центра больницы Хаммуд (IRB PALM.ФБ. 01). Все пациенты дали письменное информированное согласие на хирургические процедуры и дали разрешение на использование резецированных образцов тканей.

4.6. Анализ жизнеспособности клеток

Клетки MCF-7 и MDA-MB-231 высевали в 24-луночные планшеты для культивирования клеток с плотностью 1,5 × 10 ⁴ клеток на лунку. При слиянии 30–40% клетки обрабатывали различными концентрациями PBN (0,1, 0,3, 0,5 и 1 мМ). Клетки собирали путем трипсинизации через 24, 48 и 72 ч после обработки, затем центрифугировали при 200×g в течение 5 мин.Полученные осадки клеток восстанавливали в культуральной среде и проводили анализ исключения красителя трипанового синего (Sigma). Клетки подсчитывали с помощью гемоцитометра.

4.7. Анализ клеточного цикла

Клетки MCF-7 и MDA-MB-231 высевали в 6-луночные планшеты с плотностью 8 × 10 ⁴ клеток на лунку и инкубировали в течение 24 ч перед обработкой 0,5 мМ или 1 мМ PBN. . Клетки собирали через 24, 48 и 72 ч после обработки, дважды промывали фосфатно-солевым буфером (PBS), центрифугировали при 200×g в течение 5 мин при 4 °C, повторно суспендировали в 1 мл старого PBS и фиксировали в 4 мл холодного абсолютного этанола.Перед проточным цитометрическим анализом клетки осаждали и обрабатывали 100 мкл 200 мкг/мл ДНКазы-свободной РНКазы А в течение часа при комнатной температуре, а затем инкубировали с 20 мкг/мл йодида пропидия ([PI]; Sigma) в течение 15 м в темноте. Анализ клеточного цикла проводили с использованием проточного цитометра Guava Easy Cyte 8™ с программным обеспечением Guava InCyte™ (EMD Millipore, Дармштадт, Германия).

4.8. Анализ экспрессии генов с помощью количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (qRT-PCR)

Уровни экспрессии генов PANX1 определяли в архивных тканях рака молочной железы.Уровни мРНК PANX1 наряду с маркерами EMT также определяли в клетках MCF-7, MDA-MB-231 и MDA-PANX1 ^– с помощью qRT-PCR. Праймеры для ПЦР в реальном времени перечислены в таблице 1. Вкратце, экстракцию тотальной РНК из клеток проводили с использованием мини-набора RNeasy ^® Plus (QIAGEN, Hilden, Германия), а экстракцию РНК из тканей мыши или человека проводили с использованием TRIzol ^{. ®} Reagent (Invitrogen), следуя протоколам производителя и описанным ранее [95]. Один мкг общей РНК подвергали обратной транскрипции в одноцепочечную комплементарную ДНК (кДНК) с использованием набора для синтеза первой цепи кДНК Revert Aid (Thermo, Waltham, MA, USA).

qRT-PCR проводили с использованием iQ SYBR Green Supermix (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) в системе обнаружения ПЦР в реальном времени CFX96™ (Bio-Rad). Этапы ПЦР-амплификации были следующими: 95 °C в течение 10 с, температура отжига целевого гена в течение 30 с, а затем 72 °C в течение 30 с. Для каждого гена было получено значение порогового цикла флуоресценции. Метод ΔΔCq использовали для расчета относительной кратности изменения экспрессии гена после нормализации по гену «домашнего хозяйства» GAPDH.

4.9. Анализ экспрессии белков с помощью вестерн-блоттинга

Белки из культивируемых клеток экстрагировали с использованием лизирующего буфера (126 мМ Трис/HCl, 20% глицерина (об/об), 40 мг/мл додецилсульфата натрия [ДСН]), содержащего ингибиторы протеазы и фосфатазы. (Рош, Пенцберг, Германия).Концентрации белка определяли с использованием набора DC Protein Assay II (Bio-Rad). Общий белковый лизат (100 мкг) разделяли с помощью SDS-PAGE и затем переносили на мембраны PVDF (Bio-Rad).

Мембраны PVDF блокировали 5% обезжиренным молоком в течение 1 часа перед инкубацией с первичными антителами в концентрации 1 мкг/мл: анти-PANX1 (№ по каталогу 710184, Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) и анти-GAPDH (№ по каталогу). G8795, Сигма). Затем мембраны промывали в PBS и инкубировали с соответствующим вторичным антителом IgG, конъюгированным с пероксидазой хрена (Santa Cruz Biotechnology).Белковые полосы визуализировали с помощью хемилюминесценции, а их интенсивность определяли количественно с помощью денситометрии и нормализовали по GAPDH с использованием программного обеспечения Image J (https://imagej.nih.gov/ij/).

4.10. Анализы инвазии и пролиферации

Анализ клеток в реальном времени (RTCA) использовали для изучения инвазии и пролиферации клеток MDA-MB-231 и MDA-PANX1 ^–. Клетки высевали на планшет для клеточной инвазии (CIM-планшет 16) с микроэлектронными датчиками на нижней стороне микропористой полиэтилентерефталатной мембраны размером 8 мкм [18, 96, 97, 98] верхней камеры типа Бойдена, а настоящие временную оценку импеданса клеток проводили с использованием прибора xCELLigence RTCA [A2] DP (Roche).

Для анализа инвазии использовали 30 мкл Matrigel ^TM со сниженным содержанием фактора роста (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, США), разведенного в бессывороточной среде в соотношении 1:20, для покрытия верхней поверхности мембраны. с последующей инкубацией при 37 °C в 5% CO ₂ в течение 4 ч во влажном инкубаторе, а затем промывали PBS. В нижнюю камеру каждой лунки добавляли 160 мкл RPMI-1640, содержащего 10% FBS, и 30 мкл в верхнюю камеру. Планшет инкубировали в течение 1 часа при 37°C перед посевом клеток.Клетки высевали в верхнюю камеру с плотностью 2 × 10 ⁴ клеток на 100 мкл бессывороточной среды. Клеткам MDA-MB-231 давали прикрепиться перед применением обработки PBN (1 мМ). Для анализа клеточной пролиферации клетки высевали в E-планшет, как описано выше, с плотностью 1 × 10 ⁴ клеток с дополнительными 150 мкл среды, содержащей 10% FBS. Как инвазию, так и пролиферацию контролировали путем регистрации импеданса клеток через каждые 15 м в течение как минимум 18 ч.

4.11. Желатиновая зимография

Кондиционированные среды для клеточных культур собирали через 48 ч после инкубации MCF-7, обработанных PBN MCF-7, MDA-MB-231, обработанных PBN MDA-MB-231 и MDA-PANX1 ^– в сыворотке крови. свободных средах, а ферментативную активность металлопротеиназ (ММП)-2 и ММП-9 оценивали с помощью желатиновой зимографии.Концентрированные белковые супернатанты (70 мкг) анализировали на геле SDS-PAGE, содержащем желатин в качестве субстрата. Затем гели окрашивали Кумасси ^ТМ бриллиантовым синим R-250 (Bio-Rad) в течение одного часа при комнатной температуре и обесцвечивали раствором метанола, уксусной кислоты и воды. Интенсивность окрашивания полос определяли денситометрией с использованием программного обеспечения Image J.

4.12. Анализ поглощения красителя

Клетки MDA-MB-231 и MDA-PANX1 ^– высевали на чашки со стеклянным дном (конфокальные чашки, MatTek Corporation, Ашленд, Массачусетс, США) при плотности посева 1.

2 × 10 ⁴ клеток на чашку. При слиянии 60–70% клетки дважды промывали 200 мкл внеклеточного раствора с низким содержанием двухвалентных ионов (145 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 13 мМ глюкозы, 0,2 мМ CaCl ₂ , 10 мМ Hepes, pH 7,3). Затем клетки MDA-MB-231 обрабатывали 1 мМ PBN в течение 15 м при 37 °C, а затем наносили внеклеточный раствор с низким содержанием двухвалентных ионов, содержащий 25 мкМ бромида этидия ([EtBr]; MP Biomedicals, Германия) [99]. Измерение поглощения EtBr клетками выполняли путем регистрации флуоресценции EtBr путем визуализации в реальном времени в течение 15 м при 37 ° C с использованием лазерного сканирующего конфокального микроскопа (LSM710, Carl Zeiss, Оберкохен, Германия).Анализ также проводили в нормальном двухвалентном растворе (145 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 2 мМ CaCl ₂, 1 мМ MgCl ₂, 13 мМ глюкозы, 10 мМ HEPES, pH 7,3) и при комнатной температуре с добавление 1 мМ АТФ для стимуляции открытия канала PANX1, как описано ранее [49].

Результаты этого анализа показаны на рисунке S2.

4.13. Локализация белка с помощью иммунофлуоресценции Клетки

MDA-MB-231 и MDA-PANX1 ^– выращивали на покровных стеклах, фиксировали 4% параформальдегидом (PFA) в течение 15 м и пермеабилизировали 0.3% Triton™ X-100 на 10 м. Клетки промывали 3 раза PBS и блокировали 1% бычьим сывороточным альбумином (BSA) в течение 1 часа при комнатной температуре во влажной камере. Клетки инкубировали в течение ночи при 4 °C с 2 мкг/мл антитела PANX1 (кат. № 710184, Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США), антитела к Е-кадгерину (кат. № sc-8426, Санта-Крус), антитела к N-кадгерину (кат. кат. № 33–3900, Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) или антитело к β-катенину (кат. № 9582S, Cell Signaling, Дэнверс, Массачусетс, США) в 0,1% блокирующем растворе БСА. После этой инкубации промывали PBS и инкубировали с 1 мкг/мл вторичных антител, конъюгированных с IgG-Texas Red (номер по каталогу: 2015320, Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) или вторичных антител, конъюгированных с FITC (кат. № F2765, ThermoFisher- Molecular Probes, Юджин, штат Орегон, США) в течение 1 часа в темноте при комнатной температуре в соответствии с протоколом производителя.Ядра контрастно окрашивали 1 мкг/мл 4′, 6-диамидино-2-фенилиндола ([DAPI]; ThermoFisher-Molecular Probes) в течение 10 мкм, затем 3 раза промывали PBS, затем покровные стекла помещали на предметные стекла с использованием реагента Prolong Antifade. (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) и наблюдали под флуоресцентным микроскопом LSM710. Для количественной оценки общей флуоресценции использовали среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) 5 различных полей на каждой микрофотографии 3 независимых экспериментов. Затем средний MFI отображался в виде гистограмм.

4.14. Статистический анализ

. Для анализа выживаемости использовали критерий логарифмического ранга для оценки значимости и отношения рисков (HR). Одномерные регрессии Кокса были выполнены с использованием дихотомической оценки PANX1 в качестве переменной.

Значимость прогноза оценивалась с использованием значения р Вальда. Анализы проводились в среде R с использованием пакетов выживания и survminer (https://CRAN.R-project.org/package = survival; https://CRAN.R-project.org/package = survminer). графики корреляции были сгенерированы в R с использованием ggpubr (https://CRAN.R-project.org/package=ggpubr). Для анализа корреляции генов в R использовался метод Пирсона, реализованный в пакете corrplot (https://github.com/taiyun/corrplot). Поправку на множественные сравнения проводили по методу Бенджамини и Хохберга [100]. Программное обеспечение

Microsoft Excel и GraphPad Prism также использовалось для проведения статистического анализа. Результаты выражены как отдельные данные или как среднее ± стандартное отклонение. Для сравнения различных групп использовали t-критерий Стьюдента. Статистическую значимость определяли с помощью непарного критерия Стьюдента.

Различия между группами оценивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA). Было определено