Серия 246 — Сезон 1 — Клон — Мелодрамы — Сериалы

• Сезон: 1
• Номер серии: 246
• Продолжительность: 45 мин
• Год выпуска: 2002

Портье рассказывает Лобату, что его бывшая жена и дети до сих пор живут в этом доме. Лобату идет в ближайший бар и просит налить ему водки… Карол очень рада, что Лобату наконец-то встретится с семьей. Нанду признается отцу, что он сомневается в эффективности лечения, так как уже много раз он пытался бросить, но безрезультатно. У Нанду начинается истерика, и Эшкобар сразу же звонит Кларисси, чтобы та пришла с работы и успокоила сына.

Выпив водки, и купив цветы, Лобату снова решает войти в дом близких, но в последний момент срывается и опять идет в бар. Портье сообщает дочери Лобату, Монике, что какой-то странный мужчина ошивается около дома. Леонидас уверен, что столь прекрасную речь для Лобату написал Тавинью. Леонидас вручает Лео билет в Марокко. Лобату приходит в наркопритон, где сразу же покупает кокаин. Базилиу рассказывает Анинье, что Тиау плачет в соседнем баре из-за ссоры с Журой. Сесеу сообщает Лидиани и Телминье, что повторный анализ на ДНК оказался положительным, и судья признал Тавинью отцом Карлы… Лидиани заявляет Тавинью, что подает на развод, и запрещает ему появляться в доме. Маиза просит Лукаса не винить себя за Мел. Она рассказывает, как ей помогли сеансы групповой терапии, на которых она поняла, что долгие годы она жила жизнями других людях. Мел становится плохо; она просит Далву и Маизу унести сына, и запереть ее в комнате. Ивети приезжает домой с новыми подарками. Служанки собирают чемоданы Тавинью, Лидиани начинает крушить все в доме. Такси доставляет вещи в офис к Тавинью. Али и Зораиди возвращаются в Фес. Зораиди рассказывает Сумайе, что скоро в Фес приедет Саид, он намеревается выпороть Жади. Жади и Хадижа собираются в скором времени открыть свой магазин. Абдулл говорит Али, что Саид может снять позор со своей семьи только одним способом – выпороть Жади на площади. Жади говорит Хадиже, что если Саид найдет их, они больше никогда не увидятся… Уже в Фесе Саид говорит Рании, что Жади не удасться скрыться от него. Жура отправляет подарок от Тиау в помойное ведро. Мохаммед говорит Латиффе, что он никогда не примет бразильца в качестве жениха для дочери. Назира собирает вещи, чтобы вместе с Миру отправиться в Фес. Она рассказывает Латиффе о поцелуе с «принцем Миру» на пляже. Лауринда сообщает Миру, что его выбрали личным тренером для марокканского шейха. К Алисинье в клуб приходит Аурелиу. Жулиу советует Альбиери бороться за место председателя совета по этике. Эдна говорит Аните, что ее война против Альбиери еще не закончилась. Альбиери слышит, как генетик Симонетти посмеивается над учеными, считающими возможным клонирование человека. Альбиери сразу же назначает встречу Амалии, чтобы рассказать всю правду о создании клона. Алисинья назначает Аурелиу встречу у себя дома; она просит его немедленно уйти из клуба. Лобату становится плохо у дома его родных, его увозят на скорой. Моника вместе с братом едут следом. Уже в больнице, войдя в палату Лобату, Моника понимает, что перед ней ее отец…

Персонажи | Клон

Абдул Рашид

Abdul Rachid

1 0 0

Дядя Назиры, Саида и Мохамеда. Приверженец старых взглядов, постоянно спорит по этому поводу с Али.

Алессандро Сафина

Alessandro Safina

0 0 0

Певец, друг Иветти.

Реально существующий певец, который в сериале играет самого себя.

Алешандре Кордейро де Соуза (Шанди)

Alexandre Cordeiro de Souza (Xande)

0 1 0

Сын Доны Журы, борец абу-даби. После скандального проигрыша, ушел со спорта и стал охранником Мел Ферраз, в которую он влюбился. Имеет сына от нее. Поступил на ветеринарный факультет.

Али Эль Адиб

Ali El Adib

1 1 0

Дядя Жади и Латифы, которых он взял на воспитание, когда обе девочки осиротели. Владеет кожевенным предприятием. Добросердечный и толерантный мужчина, который любит своих племянниц как родных детей. Имеет четырех жен, от которых у него несколько детей, позднее берет пятой женой Зорайде. С юности дружит с доктором Аугусто Альбьери.

Алисия Мария Феррейра да Невес (Алисинья)

Alice Maria Ferreira das Neves (Alicinha)

0 0 0

Племянница Эдны, возлюбленная Эшкобара, бывшая жена Аурелио. Аферистка, которая гоняется за богатыми мужиками и разводит их на деньги. Показывает себя доброй и исполнительной, но на самом деле готова на любые подлости, ради достижения своей цели.

Амалия

Amalia

0 0 0

Журналист. Была возлюбленной Леонидаса Ферраза, некоторое время встречалась с Сесеу, а после — с доктором Альбьери.

Амин Рашид

Amin Rachid

0 0 0

Сын Мохамеда и Латиффы, брат Самиры.

Анинья

Aninha

0 0 0

Работница в баре Доны Журы. На пару с Базилио любит собирать сплетни.

Анита

Anita

0 0 0

Секретарь в клинике Альбьери и подруга Эдны.

Аугусто Альбьери

Augusto Albieri

0 0 0

Учёный-генетик, создавший в своей клинике Лео — клона Лукаса. Дружит с Леонидасом и Али. Крестный Лукаса и Диогу, а также Лео. Супруг Эдны.

Аурелио

Aurelio

0 0 0

Бывший муж Алисиньи, которого она обобрала до нитки.

Базилио

Basílio

0 0 0

Работник и главный сплетник в баре Доны Журы — знает все про всех.

Бета

Beta

0 0 0

Бывшая девушка Шанди, после которой он начал встречаться с Карлой. Ненавидит Карлу.

Далва

Dalva

0 0 0

Экономка в доме Ферразов. Любит Лукаса и Диогу как родных сыновей. Крайне набожная и легковерная, часто лезет не в свои дела и чересчур опекает Ферразов.

Деуза да Сильва

Deusa da Silva

0 0 0

Суррогатная мать Лео. Маникюрша. Отлично танцует. Всю жизнь мечтала иметь ребенка. В отношениях с Эдвалду, за которого позже вышла замуж.

Диогу Ферраз

Diogo Ferraz

0 0 0

Сын Леонидаса Ферраза, брат-близнец Лукаса. Предприимчивый, самоуверенный амбициозный парень с твердым характером — полная противоположность своего слабохарактерного и мечтательного брата. Разбился в авиакатастрофе в возрасте 20 лет.

Дуда

Duda

0 0 0

Друг Хадижи.

Жади Рашид

Jade Rachid

4 2 0

Жена Саида Рашида, мать Хадижи. Выросла в Бразилии, из-за чего очень тяжело адаптировалась к мусульманским обычаям. После смерти матери, опекунство над ней взял дядя — брат ее отца. С юности была влюблена в Лукаса Ферраза, из-за которого каждый раз совершает сумасшедшие поступки.

Жорже Луис

Jorge Luis

0 0 0

Возлюбленный Иветти, журналист.

Жулиу

Julio

0 0 0

Сотрудник клиники доктора Альбьери, друг Эшкобара.

Журема Кордейра (Дона Жура)

Jurema Cordeiro (Dona Jura)

1 1 0

Хозяйка бара в Сан-Криштоване, мать Шанди. Боевая женщина, которую побаивается вся округа. Любит повторять фразу «Это вам не шутки!».

Зе Роберту

Ze Roberto

0 0 0

Бразилец, в которого влюбилась Самира. Ради нее принял Ислам.

Зейн

Zein

2 2 0

Египтянин, владелец клуба «Нефертити», второй (временный) муж Жади. Его прозвали «Проклятьем Фараонов» за красоту и необыкновенную харизму.

Зорайде

Zoraide

1 1 0

Помощница Али по хозяйству, крайне ответственна и верна ему во всех делах. Очень добрая женщина, которая всем сердцем любит Жади и Латиффу, стараясь помочь им даже во вред себе. По части интриг ей нет равных. Гадает на кофейной гуще. Позже Али женится на ней.

Ивети Симас Ферраз

Yvete Simas Ferraz

2 0 0

Возлюбленная Леонидаса Ферраза, который долго не мог простить ей интрижку с его старшим сыном — Диогу. После появления Лео, Леонидас простил ей измену и женился на ней. Мать его сыновей-близнецов. Темпераментная, вспыльчивая женщина, которая умеет постоять за себя и добиться своих целей, но не смотря на это имеет доброе сердце.

Карима

Karima

0 0 0

Одна из служанок в доме Али. Очень шумная, из-за чего Зорайде ее постоянно гоняет.

Карла Сантуш

Karla Santos

0 0 0

Неудавшаяся модель. Бывшая девушка Шанди, дочь доны Одети. Благодаря махинациям матери-аферистки, смогла забеременеть от Тавиньо.

Карол

Carol

0 0 0

Сотрудница компании Ферразов, возлюбленная Лобату.

Кларисси Гимараеш

Clarisse Guimaraes

0 0 0

Секретарь Леонидаса, бывшая жена Эшкобара, мать Нанду. Позже влюбляется в Роже.

Котиа

Cotia

0 0 0

Друг Деузы и Эдвалдо из танцзала.

Креуза

Kreuza

0 0 0

Домработница в доме Вальверде, подруга доны Одети, которой помогла в ее аферах.

Латиффа Рашид

Latiffa Rachid

3 2 0

Племянница Али, которую он взял на воспитание, после смерти брата и его жены. Сестра Жади, жена Мохамеда, мать Самиры и Амина.

Очень любит свою семью, боится, что муж возьмет вторую жену, чему активно препятствует.

Леонидас Ферраз (Львеночек)

Leonidas Ferraz (Leãozinho)

0 0 0

Вдовец. Промышленный магнат, отец Лукаса и Диогу. Позже — муж Иветти, которая родила ему двух сыновей-близнецов.

Лидьяне Вальверде

Lidiane Valverde

0 0 0

Подруга Маизы, жена Тавиньо, мать Телминьи и Сесеу. Крайне ревнивая женщина, которая фанатеет от своего мужа.

Лижейру

Ligeirinho

0 0 0

Жулик, который держит автомастерскую. Вечно проворачивают различные махинации со своим напарником Рапазау. Постоянно доводят Одети.

Лобату

Lobato

0 0 0

Друг и коллега Леонидаса, адвокат Лукаса, бывший наркоман.

Возлюбленный Карол, был женат и имеет двоих детей. Из-за наркозавистимости, жена ушла от него забрав их.

Лола

Lola

0 0 0

Тётя Деузы, сестра ее матери.

Лукас Ферраз

Lucas Ferraz

2 3 0

Сын Леонидаса Ферраза, имел брата-близнеца — Диогу. Именно его клетки послужили материалом для создания клона — Лео. С юности был влюблен в Жади, но из-за своей трусости ни раз упустил свой шанс быть с ней. Женился на Маизе — девушке своего брата, от которой у него родилась дочь.

Маиза Ферраз

Maysa Ferraz

0 2 0

Жена Лукаса, мать Мел. В юности была девушкой Диогу, но после его трагической смерти вышла замуж за его брата-близнеца, который всю жизнь любил другую женщину. Из-за неверности мужа очень страдала, из-за чего ее характер ужесточился.

Мелисса Ферраз (Мел)

Melissa Ferraz (Mel)

0 1 0

Дочь Лукаса и Маизы. Подруга Телминьи, Сесеу и Нанду. Наркоманка. Вышла замуж за Шанди, от которого родила сына.

Милена

Milena

0 0 0

Сотрудница клиники доктора Альбьери.

Миру

Miro

0 0 0

Друг Шанди, тренер в спортзале, возлюбленный Назиры.

Мишель

Michelle

0 0 0

Горничная в доме Ферразов.

Молина

Molina

0 0 0

Ученый, коллега Альбьери, выступавший против клонирования.

Мужские персонажи сериала «Клон» — как я переосмыслила их с возрастом — 2 часть | BadFem

Что ж, продолжаем…

Лукас Феррас

Мужские персонажи сериала «Клон» — как я переосмыслила их с возрастом — 2 часть

Что я думала в детстве: Бедный-несчастный Лукас, так любит Жади, то ему папка мешает, то злая змеюка Маиза

Что я думаю сейчас: АААААААА И вот ради этого надо было рисковать жизнью? Жади, где твое увОжение сОма? А в принципе, этот же вопрос к Маизе.

Ладно, в начале сериала Лукас был совсем еще юным, ненамного старше Жади. А мозгами в таком возрасте мало кто может похвастаться.

В принципе, в начале он вел себя даже умнее своего несдержанного братца. И, если честно, находясь в Марокко он мало что мог сделать со своей возлюбленной — все-таки чужая страна, другие законы. То что он пробрался в женской одежде на свадьбу Жади с Саидом — поступок был, конечно, красочный, но глупый. Как он собирался ее похищать при куче народа? Как бы он ее вывез, если Жади не имела в своем личном пользовании документы?

Надо было брать «быка за рога» в других моментах. Жади ждала его на пляже с чемоданом, Жади ждала его у Иветти…все тщетно. Не смог.

Кто-то скажет — мол, из-за отца. Но лично мне кажется, что Леонидас был не столько Жади недоволен, сколько всеми проблемами, что на него навалились ДО — несчастный случай с Диогу, предательство Иветти, Лукас что-то там на гитаре бренчит и не хочет нормально учиться и работать.

Потом, спустя более 20 лет — будет показательный случай, когда Мел, дочь Лукаса, хоть ненадолго, но ушла жить с Шанди. Лукас тогда сказал: «Она смелее меня». Мел, хоть и выросла в достаточно состоятельной семье, хоть и почти вся семья была настроена против Шанди (ну или как минимум относилась не с восторгом) — не побоялась. А он в свое время испугался.

Я не думаю, что Леонидас бы сына проклял и никогда не общался, если Лукас бы в молодости принял решение жить с Жади. Сердце ведь не камень. Да и Иветти с Далвой давили бы с двух сторон, совершенно по-разному, но своего бы добились.

Но тогда сериал бы быстро закончился, правда?)

ЛобатуМужские персонажи сериала «Клон» — как я переосмыслила их с возрастом — 2 часть

Что я думала в детстве: мне его жалко

Что я думаю сейчас: мне его жалко, но что в нем, chort pobery, нашла Карол?

Жалость — это действительно основное чувство, которое он вызывает. Но если Жади я сочувствовала как-то по-доброму, но к Лобату у меня жалость сильно граничит с брезгливостью.

Понятно, что внешность — это не одежда в магазине, и люди не могут ее «взять и поменять» как, к примеру, носки. Если у Леонидаса есть еще какие-то остатки «благородной породы» — Лобату вообще какой-то мелкий, лысый, невзрачный. И да, естественно в него влюбляется статная Карол.

Ну это ж закон жанра, вы вообще представляете, чтобы в пузатенькую, с жидкими волосиками, большими очечками и зависимую по всем фронтам адвокатшу влюбился статный чернокожий юрист, годящийся ей в сыновья? Вот и я нет.

Он вроде как бы сыплет цитатами-остротами, корчит из себя интеллектуала. На самом деле у него тот еще багаж за душой — брошенная семья из-за пагубных зависимостей, темное прошлое. Если бы не его друг Леонидас — тот и не дожил бы до такого возраста. Его новой женщине тоже приходится разгребать его проблемы.

Лобату вроде бы ходит к психотерапевту, что-то там кается, говорит умные речи — в итоге все равно прячет фляжки с «огненной водой» в чемодане. Прекрасно знает, что ему нельзя пить вообще — идет в «злачные места». Грабли стучали по лбу несчетное количество раз, но ничему его не научили.

Зейн

Мужские персонажи сериала «Клон» — как я переосмыслила их с возрастом — 2 часть

Так, я знаю, что он многим нравится, сильно громить не буду)

Но вообще мне кажется — это очень сильно «прокачанный Саид«, который не боится быть честным с самим собой. Ему, как и Саиду, женщины интересны только пока он их «завоевывает». Дальше не интересно. Именно поэтому он столько «мусолился» с Жади. Наверное. в его жизни одна из очень немногих женщин, устоявших перед ним. Она вроде как и давал ему надежду, но он прекрасно отличал страсть и влечение от других чувств.

Что мне в нем нравится — это честность. Он никогда ничего не обещал своим женщинам. Он не скрывал то, что что такой Дон-Жуан (арабик вершн), он не пытался как-то оправдать свою репутацию. Все женщины, которые отвечали ему взаимностью — знали, кто он и вступали в ним связь по своей воле.

Он далек от религии. Наверное, единственное что нравится ему из культурного бекграунда — это традиции. Мол, красиво, пышно, зрелищно дораха-бохата. Именно поэтому он так легко соглашается на «подставную свадьбу» с Жади. Сам про себя говорит, что очень хочет почувствовать себя женихом. Именно с его подачи свадьбу празднуют как самую настоящую. Но адекватно понимает, что ни с одной не сможет связать жизнь надолго.

И Саида, мне кажется, он «подставил» потому что не ожидал, что 1) Жади ему одновременно пропесочит мозг на тему свободы 2) Совершенно в нем не будет заинтересована как в мужчине. Ну а что, там все мозги Лукасом-Чеснокосам забиты.

Начало, про Саида, Леонидаса и Шанди можно почитать тут

Про женских персонажей читайте тут:

Про Маизу, Латиффу, Лидьяне и Деузу

Про Назиру, Эдну и Бету

Про Мел, Жади и Карлу с Одетти

Лайки, комментарии и подписки категорически приветствуются

«Ошибка сценариста»: странные парочки в сериале «Клон», которые меня разочаровали | Кира Сокол

Многие пары в сериале «Клон» не вызывают ни интереса, ни переживаний, ни сочувствия. Потому что мне, как зрителю, не очень понятны мотивы героев и их стремление быть вместе. Порой складывается впечатление, что сценаристка сериала Глория Перез просто наспех выдумала эти пары! Взяла персонажей и сказала: «Ребята, как хотите, но теперь вы – влюбленная парочка».

Представляю вам подборку самых странных (на мой взгляд) пар в сериале «Клон», которые вызывают лишь разочарование. Зачем из этих героев состряпали влюбленных – совершенно не понятно.

Кэрол и Лобату. Красавица и чудовище

Очень странно было видеть этих двоих персонажей, играющих взаимную любовь. Кэрол – стильная, молодая девушка. Карьеристка, уверенная в себе, но в то же время мягкая и легкая на подъем. Зачем эту красотку надо было ставить в пару стареющему наркозависимому Лобату?

Нет, Лобату, конечно, мужчина интересный: он отличный собеседник, у него престижная работа в фирме Леонидаса, да и по характеру он – зайка. Однако зависимость делает его настоящим чудовищем.

Странно, что Кэрол вообще обратила внимание на такого мужчину. Даже если учитывать, что она долгое время не знала о его пагубных пристрастиях, все равно визуально и по темпераменту он ей явно не подходил.

Жура и Тьяо. Карьеристка и альфонс

С этими ребятами похожая ситуация. Она – сильная, независимая и жесткая женщина. Сама себе хозяйка. Никому спуску не даст. И вот в ее жизни появляется любитель рыбных пирожков Тьяо! Этот альфонс мгновенно завоевывает сердце Журы, при этом совершенно ничего особого не делая!

За Журу обидно. Такая дама достойна лучшего.

Лео и Карла: мечтаю о 40-летней Жади, а сам люблю молоденьких

С одной стороны, эта парочка (отношения у них просуществовали недолго) не вызывает никаких вопросов. Он – молодой и привлекательный. Она – юная красотка. Почему бы им и не быть вместе?

Однако Лео – парень-то необычный. У него в голове буквально с рождения «сидит» какая-то женщина в парандже и зовет его к себе. Лео начинает искать эту женщину из своих грез (Жади), однако почему-то обращает внимание на ее полную противоположность: вульгарную и совершенно приземленную пустышку Карлу. Чем она его зацепила – совершенно не ясно. Хорошо, что сценаристка не стала развивать историю их отношений.

Мустафа и Ноэмия. Когда мечты ударились о лодку реальности

Комичная парочка, придуманная, скорее, для развлечения зрителей. Мустафа – мусульманин, которому очень нравится жизнь в Бразилии и бразильянки. Ноэмия – финансово независимая и уверенная женщина, которая знает себе цену.

И вот по велению Глории Перез эти совершенно далекие друг другу персонажи зачем-то играют свадьбу, после которой их жизнь уже никогда не будет прежней: Мустафа будет всячески ограничивать свободу супруги, а та начнет протестовать против его заскоков.

По итогу оба несчастны.

Зейн и Бета. Альфа-самец и бета-самка

Выбор Зейна меня тоже разочаровал. Этот мужчина по натуре – охотник. Ему нравилось завоевывать сердце Жади и его ничего не останавливало в этой игре. Любил ли он ее по-настоящему или им руководил инстинкт завоевателя – не знаю. Однако в пару ему бы не помешала похожая на Жади женщина – загадочная, сильная, целеустремленная. Но сценаристка подкинула ему Бету – бывшую подружку Миру.

Бета, конечно, дама очень привлекательная и неглупая, однако я рассчитывала на то, что такой мужчина как Зейн останется в финале с какой-нибудь очередной сердцеедкой, которая будет сводить его с ума.

А как вы относитесь к этим парам?

Клон (сериал, 1 сезон) — актеры и съемочная группа — КиноПоиск

Режиссеры 1. 2. 3. 4. 5. Актеры 1. 2. 3. … Yvete Simas de Oliveira Ferraz 4. 5. 6. 7. … Latiffa El Adib Rachid 8. 9. 10. … Maysa Assunção Ferraz 11. 12. … Alexandre «Xande» Cordeiro 13. 14. 15. 16. … Melissa «Mel» Assunção Ferraz 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. … Jurema «Dona Jura» Cordeiro 30. 31. 32. 33. 34. 35. 36. 37. 38. 39. 40. 41. 42. 43. 44. 45. 46. 47. 48. 49. 50. … Samira El Adib Rachid 51. 52. … Frequentador da boate 53. 54. 55. 56. 57. 58. 59. 60. 61. 62. 63. 64. 65. 66. 67. … Pitoco, в титрах не указан 68. … играет самого себя, в титрах не указан 69. 70. 71. … Dona Mocinha da Silva 72. … Regina da Costa (Regininha) 73. 74. 75. 76. 77. 78. 79. 80. 81. 82. 83. 84. 85. 86. 87. 88. 89. 90. 91. 92. 93. 94. 95. 96. 97. 98. … играет самого себя 99. … играет саму себя 100. 101. 102. … играет саму себя 103. … Dançarina de dança do ventre 104. 105. 106. 107. 108. 109. 110. 111. … играет самого себя 112. 113. 114. . .. играет самого себя 115. … играет самого себя 116. … играет самого себя 117. 118. 119. … играет самого себя 120. … играет самого себя 121. 122. 123. 124. … Assaltante da Mansão Leônidas 125. 126. … Vizinha de Latiffa e Mohamed Продюсеры 1. … продюсер: Марокко (1 эпизод, 2001) 2. … исполнительный продюсер 3. … исполнительный продюсер 4. … продюсер: Марокко (1 эпизод, 2001) 5. … исполнительный продюсер 6. … исполнительный продюсер 7. … исполнительный продюсер 8. … исполнительный продюсер, в титрах не указан (1 эпизод, 2001) 9. … исполнительный продюсер, в титрах не указан (1 эпизод, 2001) Режиссер дубляжа 1. … режиссер озвучания Сценарист 1. Оператор 1. Композиторы 1. 2. Художники 1. 2. 3. … по костюмам 4. . .. по костюмам Монтажеры 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Досье на персонажей «Клона»

 

Лукас (Murilo Benicio) — вначале истории — это замкнутый, впечатлительный и романтичный юноша, мечтающий стать музыкантом. Он приезжает в Марокко из Бразилии вместе с отцом и братом-близнецом. В необычной для него стране он находит свою любовь — девушку, по имени Жади. Но их разлучает злое стечение обстоятельств. Лукас пытается воссоединиться со своей возлюбленной, но когда неожиданно погибает его брат, он поддается течению жизни, постепенно обнаруживая в себе все большую схожесть своего характера с характером брата.

Жади (Giovanna Antonelli) — мусульманская девушка, выросшая в Бразилии. Вначале истории она приезжает в Марокко в дом своих родственников. Здесь она встречается с мусульманской культурой лицом к лицу. Здесь она встречается с Лукасом и впервые по-настоящему влюбляется, но судьба не дает им быть вместе. А по строгим обычаям мусульманской религии ее выдают замуж за малознакомого человека. Обладая яркой внешностью, хитростью и расчетливостью она готова бороться за обретение своего счастья любыми методами.
Диогу (Murilo Benicio) — брат-близнец Лукаса. Противоположность своего брата. Он очень уверен в себе. У него в жизни есть четкие цели, к которым он не перестает стремиться. Умеет ценить свои силы. Нравиться женщинам. Практичный, деловой, перспективный в бизнесе — он похож на своего отца и хочет продолжить его дело. Нелепый несчастный случай, в котором он погиб, многое ломает в жизни его брата.
Леонидас (Reginaldo Faria) — владелец огромной фирмы, занимающейся импортом и экспортом товара. Сильный, самоуверенный, честолюбивый человек, который достиг вершин карьеры, но с трудом устраивает свою личную жизнь. В жизни вдовца, жена которого умерла при родах, было много женщин, но когда ему показалось, что он встретил свою любовь, то все пошло вверх дном.
Иветти (Vera Fischer) — красивая, веселая, немного вульгарная женщина. Человек настроения, не умеющий и не желающий управлять своими чувствами и эмоциями. Она бывшая модель, продавщица, секретарша… Не один мужчина не хочет с ней серьезных отношений, но она обладает почти юношеской наивностью и продолжает верить в настоящую любовь, которая когда-нибудь к ней придет. Леонидаса она любит до безумия, но безудержный нрав заставляет ее искуситься незнакомым ей мальчиком, накануне решения ее судьбы.
Августо Албиери (Juca de Olivera) — крестный отец Лукаса и Диогу. Друг Леонидаса и давний приятель Али. Всемирно известный ученый-биолог, которого очень интересует вопрос клонирования. Он одержим его идеями. В разговорах он осуждает саму возможность клонирования, а на деле очень хочет сам осуществить опасный эксперимент. После смерти, любимого им крестника, Диогу решается на отчаянный эксперимент, поставив на карту свою репутацию. Он берет клетки Лукаса и проводит с ними свой эксперимент
Али (Stenio Garcia) — патриарх мусульманской семьи. Дядя Жади. Образованный человек, который обучался в Оксфорде, но и настоящий хранитель мусульманских устоев. Он хороший друг профессора Албиери, но их разговоры всегда кончаются ссорами. Албиери осуждает его за слишком строгое следование религиозным канонам мусульманства, а Али за идеи о клонировании человека, которые он считает истинным святотатством.
Маиза (Daniela Escobar) – эгоистичная женщина, не умеющая позаботится ни о себе ни о своих ближних. Была невестой Диогу, но после его смерти переключилась на Лукаса. Он вовсе не хотел серьезных отношений с невестой брата, но абсолютно неожиданно оказывается в плену обстоятельств. И после того как Жади выходит замуж он женится на Майзе. В их браке нет любви, но их связывает дочь — Мел. Окончательно брак Майзы рушится, когда Лукас вновь встречается с Жади, а уже взрослая Мел начинает увлекаться наркотиками.
Саид (Dalton Vigh) — умный, воспитанный и богатый человек. Он действительно влюбляется в Жади и становится ее мужем. Для нее — это наказание. Но Саид готов ради жены на все, вплоть до убийства человека, который лишил ее чести. Жади же живет из-за этого в постоянном страхе и больше всего она боится, что ее муж действительно убьет Лукаса. Вначале она пытается от него бежать и молит бога о том, чтобы Саид дал ей развод. Но с появлением дочери Жади смиряется со своим положением и даже начинает любить мужа по-своему.
Деуза (Adriana Lessa) — Веселая, жизнерадостная женщина, которая выносила клона Лукаса — Леандру. Она негритянка. Ее удивляет белый цвет кожи Леу, но она не смущается, думая, что Леандру появился на свет в результате искусственного оплодотворения. Она любила своего жениха — Эдвалду, но когда узнала, что он бесплоден, решилась на искусственное оплодотворение. Ее друг не одобрил такого поступка и оставил одну с ребенком. Под предлогом помощи доктор Албиери забирает пациентку с ребенком к себе, а постепенно и вовсе отнимает результат эксперимента у матери. Деуза сбегает вместе с ребенком, чтобы Албиери окончательно не забрал его
Эдна (Nivea Maria) — секретарша доктора Албиери, которая становится его женой, но понимает, что муж ее не любит. Она начинает подозревать его во всех смертных грехах. В том числе она думает, что малыш Леандру к которому ее муж проявляет не поддельный интерес — его родной сын. Но впоследствии она раскрывает еще более страшный секрет, сравнивая детские фотографии Лукаса и Леандру. Она одержима мыслями о мести мужу за не любовь и обман.
Зорайде (Jandira Martini) — одна из жен Али. Добрая и понимающая женщина, любящая Жади. Она помогает встречам Жади и Лукаса, скрывая все от мужа.
Латиффа (Leticia Sabatella) — двоюродная сестра Жади. Она жила в Бразилии до 12 лет, а после вернулась в Марокко с семьей. Прекрасно адаптировалась к местным обычаям. Милая, веселая и романтичная девушка. Она искренне любит своего мужа Мохамеда, боясь, что он может найти себе другую жену. Она пытается бороться за незыблемость своего семейного счастья любыми доступными способами.
Мохамед (Antonio Calloni) — муж Латиффы, брат Саида. Добрый и веселый человек, умеющий располагать к себе людей. Типичный арабский торговец. Он любит свою жену и не обещает ей не заводить вторую, но интриги сестры заставляют его задуматься над возможностью завести вторую семью.
Назира (Eliane Giardini) — сестра Саида и Мохамеда. Ее тяготит собственное положение опекунши при братьях. Не имеющая возможность устраивать свою личную жизнь она вслезает в жизнь братьев, пытаясь всячески уличить их жен в проступках.
Эдвалду (Roberto Bonfrim) — не слишком любит свою невесту Деузу. Не хочет, чтоб она знала, что он бесплоден. Связывает свою жизнь с Одетте, нехотя воспитывать Леандру. 
Далва (Neusa Borges) — нянька Лукаса и Диогу, любящая их как своих сыновей. веселая и заботливая женщина. Она ничего не понимает в науке и в клонировании, ненавидя доктора Албиери с его идеями. Считает его воплощением дьявола.
Анитаiam Rios) — ассистентка Албиери. Она одержима научными достижениями и его не волнуют этические их стороны. Любовница Эскобара.
Лео (Murilo Benicio) — молодой клон Лукаса. Энергичный, веселый, уверенный в себе. Несмотря на молодость у него уже есть свой бизнес. Он не знает о настоящей истории своего появления на свет. Он не похож на своего прототипа характером, но внешне — это точная копия Лукаса. Встретившись с Жади он влюбляется в нее, а она не понимая ничего пытается выбрать между вновь возникшей любовью к Лукасу, который сильно изменился с их поледеней встречи и любовью молодого мальчика, так похожего на него.
Мел (Debora Falabella) — дочь Майзы и Лукаса. Симпатичная юная девушка, у которой не ладятся отношения ни с матерю, ни с отцом в которых она искала поддержки в свой переходный период. За необходимой ей помощью она обращается к наркотикам. Борьба с наркозависимостью, в которой ей может помочь только любовь — вот, что ожидает ее.
Шанди (Marcello Novaes) — спортсмен, занимающийся борьбой. С ним встречается Клара, но она бросает его, в поисках более выгодной партии. Он перестает заниматься спортом из-за его неприбыльности. Лукас нанимает его, чтоб он стал телохранителем Мел. Отношения с девушкой быстро перерастают в любовные. Когда об этом узнают родители Мел, они ужасаются. Тем самым они толкают дочь к наркотикам. Шанди любит Мел и не отказывается от нее даже в сложной ситуации.
Рания (Nivea Stelmann) — вторая жена Саида. Веселая и жизнерадостная девушка, вполне довольная своим положением. Человек с простым характером, умеющий к себе расположить. Через нее показаны отношения между женами в мусульманской семье.
Хадижа (Carla Diaz) — дочка Жади и Саида. Милая и веселая малышка, которая является смыслом жизни для своей матери.
Зейн (Luciano Szafir) — поэт, образованный и донжуан, любящий соблазнять замужних женщин. Под его чарами не устоит и Жади.
Тавинью (Victor Fasano) — сотрудник и большой друг Лукаса. Он любит веселье и женщин. Женат на Лидиани.
Телминья (Tais Fersoza) — дочь Тавиньу и Лидиани. Подруга Мел и трудный подросток.
Сесеу (Sergio Marone) — брат Телминье. Большой друг Нанду, который помогает ему бороться с наркотической зависимостью.
Нанду (Thiago Fargoso) — сын Клариси и Эскобара. Молодой парень, который учится, чтобы стать адвокатом. Умный, веселый, перспективный парень, который попал в плохую кампанию и стал наркоманом.
Лидиане (Beth Goulart) — жена Тавиньу, лучшая подруга Майзы. Очень ревнива.
Клариси (Cissa Guimaraes) — мать Нанду, жена Эскобара. Сильная, умная, современная женщина. Она любит своего сына и пытается спасти его от наркотической зависимости всеми методами.
Эскобар (Marcos Frota) — ученик доктора Албиери, противник клонирования человека. Муж Клариси. Ему тяжело пережить проблемы, связанные с сыном. Он бросает семью и увлекается Алисиньей.
Каролина (Thelma de Freitas) — племянница Далвы. Работает на предприятии Леонидаса. Большая подруга Клариси. Она влюбляется в ее сына Нанду, неожиданно для себя. Клариси против этих чувств. Но подруги объединяются в борьбе за Нанду с наркотиками.
Амин (Thiago Oliveira) — сын Мохамеда и Латиффы. Веселый мальчик, который постоянно ссорится со своей старшей сестрой Самирой. 

Одетте (Mara Manzan) — жена Эдвалду. Глотательница огня. Вульгарная, недалекая женщина, любящая бесполезные интриги и сплетни.
Карла (Juliana Paes) — дочь Одетте и падчерица Эдвалду. Ищет легкие пути к успеху в жизни. Любит футболистов и танцоров, но главное для нее — деньги. она влюбляется в Шанди, но уходит от него в поисках богатого мужчины.
Алисинья(Cristiana Oliveira) — Племянница Эдны. Амбициозная, холодная и расчетливая. Прикидывается ангелом, но на самом деле крутит из людей веревки. Она не постоит не перед чем, чтобы добиться намеченной цели. Первой ее добычей становится Эскобар, потом она влюбляет в себя Миру и использует, его в своих корыстных целях, но постепенно понимает, что она действительно влюбилась.
Миру (Raul Gazola) — друг Шанди. Он влюбляется в Алисинью, а она начинает вить из него веревки. Но очень скоро они меняются местами. Алисинья влюбляется в него, а он понимает свою власть над ней.
Лауринда (Totia Meirelles) — лучшая подруга Ивети. поддерживает ее в сложных ситуациях.
Донна Мосинья(Ruth de Souza) — мать Деузы. Думает, что Албиери — отец Леандру. Хочет забрать внука к себе.
Журема (Solange Couto) — владелица бара, где часто бывают герои теленовеллы.
Самира (Sthefany Brito) — дочь Латиффы и Мохамеда. Старшая сестра Амима. Она ревнует родителей к брату и провоцирует ссоры с ней. Через нее в сериале показан конфликт переходного возраста мусульманских девочек и их типичные проблемы.
Лобату (Osmar Prado) — сотрудник фирмы Леонидаса, а так же его доверенное лицо. Человек, который потерял свой бизнес и семью из-за пристрастия к алкоголю и наркотикам. Влюблен в Карлу.

Актеры и актрисы сериала «Клон» — тогда и сейчас: карьера и фото спустя годы

Одним из самых известных восточных телесериалов в России является «Клон». Сериал показывает особенности жизни мусульман и затрагивает проблемы наркотической зависимости. Главной «фишкой» проекта является тема клонирования человека. Как выглядели тогда, и чем живут сейчас актеры «Клона» — в материале нашей редакции.

Джованна Антонелли (Жади)

Джованна Антонелли — тогда и сейчас

Бразильская актриса, фотомодель и телеведущая Джованна Антонелли исполнила в сериале «Клон» одну из главных ролей – Жади. Это была не первая крупная роль актрисы, она уже снималась в сериалах «Тропиканка» и «Семейные узы», а первый успех ей принесла роль в фильме «Босанова».

Джованна Антонелли сейчас является очень успешной и популярной актрисой. Девушка регулярно появляется в новых фильмах – каждый год выходит несколько картин с её участием. Преимущественно это бразильские фильмы и сериалы.

Далтон Виг (Саид)

Далтон Виг — тогда и сейчас

Далтон Виг исполнил в сериале «Клон» роль Саида, мужа Жади, который был много лет в неё влюблен и пытался завоевать сердце девушки. Актёра пригласили в сериал на главную роль, и он сразу же понравился режиссёру. Далтон Виг начинал свою карьеру простым рекламным клерком, но всегда мечтал стать знаменитым. Сразу после окончания университета он пошёл на актёрские курсы и спустя год попал на театральную сцену.

Сейчас актёр «Клона» продолжает активно принимать участие в съёмках, его регулярно приглашают в бразильские фильмы и сериалы. Также Далтон Виг попробовал себя в роли продюсера.

Мурилу Бенисио (Лукас, Диого, Лео)

Мурилу Бенисиу — тогда и сейчас

Известный бразильский актёр Мурилу Бенисио исполнил в сериале сразу 3 роли: братьев-близнецов Лукаса и Диого, а также клона Диого – Лео. Актёр настолько хорошо справился со своими ролями, что вместе с Джованной Антонелли получил премию «Contigo» в качестве лучшей романтической пары. 

Мурилу Бенисиу считается одним из лучших актёров Бразилии и регулярно снимается в различных фильмах и сериалах. Ежегодно выходит пять-шесть картин с его участием. Помимо этого, актёр успевает играть в театральных постановках.

Вера Фишер (Ивети)

Вера Фишер — тогда и сейчас

Актриса очень хотела связать свою карьеру с кино, поэтому соглашалась на любые роли, даже самые небольшие и странные. Её усилия увенчались успехом – Вера Фишер заключила многолетний контракт с крупнейшей бразильской телестудией «Глобо». В рамках договора она сыграла роль Ивети в сериале «Клон», который сделал её ещё более известной.

Вера Фишер продолжает сниматься в бразильских телесериалах и фильмах. Она является одной из самых высокооплачиваемых актрис Бразилии.

Летисия Сабателла (Латиффа)

Летисия Сабателла — тогда и сейчас

Летисия Сабателла исполнила в телесериале «Клон» роль двоюродной сестры Жади – Латиффы. Девушка долго готовилась к этой роли – изучала несколько видов танца живота, ставила себе правильный акцент и читала Коран. Её усилия прошли не зря – эта роль принесла ей признание критиков и зрителей.

На данный момент девушка оставила актёрскую карьеру и полностью посвятила себя семье. Летисия Сабателла пробовала свои силы в качестве певицы, но не сумела добиться каких-либо успехов.

Даниэла Эскобар (Маиза)

Даниэла Эскобар — тогда и сейчас

Актриса «Клона» начала свою карьеру в 19 лет, когда поступила на театральные курсы в Рио-де-Жанейро. Первую популярность ей принесла роль жены Лукаса – Маизы в телесериале «Клон». Зрители и критики считают, что это её лучшая роль, но самой Даниэле больше нравится её работа в сериале «Бразильская акварель». 

После развода актриса отказалась от всех предложений работы, потому что решила провести время с сыном. Она переехала в Лос-Анджелес, где находится по сей день.

Марселлу Новаес (Шанди)

Марселлу Новаес — тогда и сейчас

Марселлу Новаес стал известным в Бразилии благодаря своей работе в многочисленных телесериалах. Его первой работой была роль в бразильском сериале «Vale Tudo». Спустя годы он подписал контракт с телестудией «Глобо», благодаря которому он получил роль хорошего, но бедного парня Шанди, который влюбился в богатую девушку – наркоманку Мэл.

Сейчас актёр «Клона» продолжает сниматься в телесериалах и фильмах. Помимо этого, он является участником музыкальной группы «Os Impossiveis» вместе с актёром Марселу Серраду.

Дебора Фалабелла (Мэл)

Дебора Фалабелла — тогда и сейчас

Актриса начала свою актёрскую работу на TV Globo в молодёжном бразильском телесериале «Malhacao». Далее последовал ряд крупных ролей в сериалах «Ангел, упавший с небес», «Клон», «Хозяйка Судьбы», «Два лица» и «Проспект Бразилии». Сериалы транслировались не только в Бразилии, но и во многих странах мира, поэтому девушка быстро стала известной. 

Дебора Фалабелла и сейчас сотрудничает с компанией «Глобо» – она снимается в телесериалах и фильмах. В 2017 году вышел фильм «O Filho Eterno» с Деборой в главной роли.

Жулиана Паес (Карла)

Жулиана Паес — тогда и сейчас

Жулиана Паес – бразильская актриса, модель и телеведущая. Девушка начала свою карьеру в сериале «Знаменитость», где она сыграла роль Жаклин Жой. Эта роль принесла актрисе популярность у себя на Родине. В сериале «Клон» Жулиана исполнила роль красавицы Карлы, которая живёт в бедном районе и мечтает выйти замуж за состоятельного мужчину. 

Жулиана имеет титул самой сексуальной женщины по версии журнала Estoe Gente, принимает участие в фотосессиях, работает телеведущей. Она продолжает сниматься в телесериалах.

Лусиано Шафир (Зейн)

Лусиано Шафир — тогда и сейчас

Актёр появлялся в нескольких сериях телесериала «Клон», но успел запомниться зрителям. Он исполнил роль харизматичного владельца клуба, второго мужа Жади, Зейна. Лусиано Шафир начинал свою карьеру в качестве модели и успел поработать со многими крупными модными домами.

Сейчас Лусиано посвятил себя своему второму увлечению – фотографии. Он много путешествует, но успевает проводить время со своей любимой дочерью – Сашей.

границ | Молекулярное клонирование и функциональная характеристика новой изофлавон-3′-O-метилтрансферазы из Pueraria lobata

Введение

Pueraria lobata ( P. lobata ) — бобовое растение с важной фармакологической активностью. Лечебные эффекты P. lobata в основном объясняются присутствием в его корнях биоактивного ингредиента пуэрарина. Поскольку C -глюкозилированный изофлавон, пуэрарин проявляет разнообразные лечебные свойства, особенно проявляет фармакологическую активность при сердечно-сосудистых и цереброваскулярных заболеваниях (Wong и другие., 2011; Чжоу и др., 2014). Несмотря на важную биологическую активность, низкая жирорастворимость и всасывание пуэрарина в желудочно-кишечном тракте являются серьезными недостатками для его применения в клинике. О 3′-метоксипуэрарине когда-либо сообщалось из P. lobata (Rong et al., 1998; Dubey et al., 2008). По сравнению с самим пуэрарином его производное 3′-метоксипуэрарин обладает более высокой липосолюбильностью и антиоксидантной активностью, а также лучшей внутриклеточной компартментацией (Heim et al., 2002; Yang et al., 2004; Чжан и др., 2008; Jin et al., 2012). Недавние исследования показали очевидный защитный эффект 3′-метоксипуэрарина на церебральное ишемически-реперфузионное повреждение с некоторыми преимуществами по сравнению с пуерарином (Chen, 2007; Zhang et al., 2008; Han et al., 2009). Принимая во внимание лучшую эффективность 3′-метоксипуэрарина, он заслуживает идентификации O -метилтрансферазы (OMT) в пути биосинтеза вплоть до этого соединения. Метилирование по 3′-OH изофлавоноидов, вероятно, осуществляется S -аденозил- L -метионин (SAM) -зависимым ОМТ, переносящим метильную группу от метильного донора SAM к гидроксильной группе акцептора. молекула.У растений OMT участвуют в метилировании вторичных метаболитов растений, таких как фенилпропаноиды, флавоноиды и алкалоиды (Ibrahim et al., 1998; Bureau et al., 2007). O -метилирование этих вторичных метаболитов может снизить химическую реактивность их фенольных гидроксильных групп и повысить их липофильность или антимикробную активность (Zhu et al., 1994; Ibrahim et al., 1998; Bureau et al., 2007). С точки зрения физиологии растений, этот процесс модификации играет ключевую роль в биосинтезе лигнина, азотфиксации и устойчивости к болезням (Maxwell et al., 1993; Wu et al., 1997; Boerjan et al., 2003).

Несколько клонов кДНК, кодирующих изофлавоноидные ОМТ, недавно были выделены и охарактеризованы. К ним относятся изофлавон 7-ОМТ из Medicago sativa (He et al., 1998), M. truncatula (Deavours et al., 2006) и Glycyrrhiza echinata (Akashi et al., 2003) и 2 , 7,4′-тригидроксиизофлаванон 4′-ОМТ из M. truncatula (Deavours et al., 2006), G. echinata и Lotus japonicus (Akashi et al., 2003). Однако на сегодняшний день изофлавоноидные 3′-OMT (I3’OMT) не были выделены из каких-либо видов растений, и метилирование, участвующее в биосинтезе 3′-метоксипуэрарина, неясно. Два возможных пути к 3′-метоксипуэрарину представлены на рисунке 1.

РИСУНОК 1. Предложены два возможных пути (A, B) к 3′-метоксипуэрарину в Pueraria lobata . I3’OMT, изофлавоид 3′- O -метилтрансфераза; GT, гликозилтрансфераза.

С целью выделения генов изофлавоновых 3′-OMT в этом исследовании были тщательно проанализированы данные РНК-секвенирования, полученные из листьев и корней P. lobata , что привело к идентификации двух кандидатов OMT (обозначенных как PlOMT3 и PlOMT4). Оба OMT были экспрессированы как рекомбинантные белки, и их ферментативные функции были протестированы. Было обнаружено, что один из OMT, PlOMT4, метилирует 3′-гидрокси-даидзеин с образованием 3′-метоксидаидзеина. Идентификация PlOMT4 проясняет процесс метилирования изофлавона 3′- O в P.lobata и обеспечивает основу для метаболической инженерии биосинтеза метилированных изофлавоноидов у других растений и микробов-хозяев.

Материалы и методы

Растительные материалы и химия

Растительный материал P. lobata был собран из ботанического сада Ухань Китайской академии наук. Химический стандарт 3 ‘, 4′, 7-тригидроксиизофлавон (3′-гидрокси-даидзеин) был от Toronto Research Chemicals (Торонто, ОН, Канада), а стандарты прунетин, биоханин A, каликозин, 3’-метокси-даидзеин, хризоэриол , и изоформононетин были приобретены у BioBioPha Co., Ltd (Куньмин, Китай). Все остальные химические вещества были закуплены у Shanghai Source Leaf Biological Technology Company (Шанхай, Китай). Ацетонитрил и метанол для ВЭЖХ (Fisher Scientific) использовали для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Эндонуклеазы рестрикции были приобретены у Takara Company (Такара, Далянь, Китай).

Клонирование полноразмерных кДНК кандидатов в ОМТ

Транскриптом, полученный из листьев и корней P.lobata был построен нашей группой ранее (Wang et al., 2015). BLAST-поиск в нескольких общедоступных базах данных был проведен, чтобы собрать все предполагаемые последовательности OMT. В общей сложности 108 унигенов были аннотированы как OMT, из которых только 42 унигена были представлены с длиной более одного килограмма пар оснований. Из этих 42 предполагаемых OMT два кандидата были идентифицированы как гомологи флавоид-3′-OMT путем сравнения BLASTx с неизбыточной базой данных NCBI. Для этого исследования были выбраны два кандидата, обозначенные как PlOMT3 и PlOMT4.

Полноразмерные кДНК PlOMT3 и PlOMT4 амплифицировали из корней P. lobata с помощью стандартных ОТ-ПЦР, а амплифицированные продукты клонировали в вектор pMD18-T (Takara) для подтверждения секвенирования. Праймеры для ПЦР перечислены в дополнительной таблице S1.

Филогенетический анализ

Выведенные аминокислотные последовательности кандидатов OMT из P. lobata были сопоставлены с другими растительными (изо) флавоноидными метилтрансферазами с известными функциями с использованием CLUSTAL X Version 2.0 (Ларкин и др., 2007). Затем филогенетическое дерево было построено методом объединения соседей программы MEGA 6.0 (Tamura et al., 2013). Значение начальной загрузки было 1000. Информация о OMT, используемых в филогенетическом анализе, обобщена в дополнительной таблице S2.

Функциональный анализ кандидатов в ОМТ в дрожжах

Кодирующие области PlOMT3 и PlOMT4 амплифицировали с помощью специфичных для генов праймеров (дополнительная таблица S1) и клонировали в вектор экспрессии дрожжей pESC-HIS (Stratagene, La Jolla, CA, USA) с получением конструкций pESC-HIS. -PlOMT3 и pESC-HIS-PlOMT4 соответственно.Обе конструкции, а также пустой вектор pESC-HIS в качестве контроля были перенесены в дрожжевой штамм WAT11 (Pompon et al., 1996) с использованием метода ацетата лития (Gietz and Woods, 2002). Полученные штаммы дрожжей выращивали в жидкой среде His dropout (Clontech, Palo, CA, USA), содержащей 2% (мас. / Об.) Глюкозы, при 30 ° C. Через 24 часа дрожжевые клетки промывали стерильной водой и индуцировали жидкой средой с выпадением His, содержащей 2% (мас. / Об.) Галактозы с добавлением субстратов 3′-гидрокси-даидзеина или 3′-гидроксипуэрарина в конечной концентрации 100 мкМ.После индукции дрожжевые культуры экстрагировали равным объемом этилацетата. Этилацетатные экстракты сушили при комнатной температуре и остаток повторно растворяли в 1 мл метанола для анализа ВЭЖХ.

In vitro Ферментные анализы

Кодирующая область PlOMT4 была клонирована в вектор экспрессии pET28a Escherichia coli (Novagen, Дармштадт, Германия) с его N-концом, слитым с 6-кратной меткой HIS. Праймеры, использованные для клонирования, перечислены в дополнительной таблице S1.Экспрессию рекомбинантного PlOMT4 индуцировали 0,5 мМ изопропил- D -тиогалактопиранозид (IPTG) при 16 ° C в течение 14 часов. Рекомбинантные белки очищали с использованием смолы Ni-NTA HisPur ^TM (Thermo) в соответствии с предоставленным протоколом. Очищенные белки анализировали с помощью SDS-PAGE, и количественное определение белка определяли с помощью анализов Брэдфорда.

Для проверки активности фермента ферментные анализы проводили в 200 мкл реакционной смеси, состоящей из 2 мкг очищенного рекомбинантного PlOMT4, 50 мМ Tris-HCl (pH 8.0), 2 мМ S -аденозилметионина, 2 мМ дитиотреитола (DTT) и 100 мкМ акцепторных субстратов. Реакции проводили при 37 ° C в течение 20 мин, останавливали добавлением 200 мкл метанола, и 15 мкл реакционной смеси непосредственно использовали для анализа ВЭЖХ.

Экспрессия гена

и анализ метаболитов в

P. lobata

Porites lobata материалов (корни, листья и стебли) были собраны в открытом поле, измельчены в жидком азоте и сохранены при -80 ° C для измерения концентрации 3′-метоксидаидзеина и содержания транскриптов PlOMT4. .Для обработки метилжасмонатом (MeJA) конечную концентрацию MeJA 100 мкМ добавляли в жидкую среду 1/2 MS, где предварительно уравновешивали 1-месячные проростки P. lobata . В жидкую среду 1/2 MS добавляли такой же объем 0,001% этанола, что и в имитацию контроля. Корни собирали после 6-часовой обработки для анализа экспрессии гена и после 10-дневной обработки для измерения концентрации 3′-метоксидаидзеина. Чтобы контролировать экспрессию генов в различных органах, суммарные РНК из корней, стеблей и листьев P.lobata были изолированы и обработаны ДНКазой I (Thermo) для удаления загрязнений геномной ДНК. КДНК первой цепи синтезировали с помощью обратной транскриптазы SuperScript III (Invitrogen). Количественную ОТ-ПЦР (qRT-PCR) выполняли на системе обнаружения ABI 7500 Fast Real-Time PCR Detection System с использованием смеси FastStart Universal SYBR Green Master (Rox; Roche, Mannheim, Germany). Условия ПЦР были установлены следующим образом: 10 мин начальной денатурации при 95 ° C, затем 40 циклов при 95 ° C в течение 15 с и затем 60 ° C в течение 1 мин.Все ПЦР в реальном времени проводили в трех независимых повторах. Праймеры, используемые для qRT-PCR, перечислены в дополнительной таблице S1. Для измерения концентрации 3′-метоксидаидзеина в различных органах 20 мг растительного сырья трижды экстрагировали 1 мл этанола. Этанольные экстракты сушили на воздухе при комнатной температуре и повторно растворяли в 1 мл метанола для анализа ВЭЖХ и ЖХ-МС.

Анализ ВЭЖХ и ЖХ – МС / МС

Для анализов ВЭЖХ образцы были обнаружены с помощью прибора LC-20AT (Shimadzu, Киото, Япония) с использованием колонки с обращенной фазой inertsil ODS-SP (250 мм × 4.6 мм, 5 мкм) при 30 ° C. В качестве подвижной фазы использовали воду Milli-Q, содержащую 0,4% фосфорной кислоты (растворитель A) и метанол для ВЭЖХ (растворитель B). Образцы реакций с кверцетином, кемпферолом и лютеолином разделяли с использованием 65% B в течение 45 мин при скорости потока 0,8 мл / мин. Для других анализов в качестве подвижной фазы использовали 0,1% (об. / Об.) Муравьиную кислоту (A) и ацетонитрил (B), и образцы разделяли следующим образом: 0–30 мин, 25–90% B; 30–35 мин, 90–25% B; 35–40 мин, 25% B и расход 0.8 мл мин. ^-1 . Длина волны обнаружения была установлена ​​на 260 нм для изофлавонов, 280 нм для ликвиритигенина, 350 нм для апигенина и лютеолина и 370 нм для кверцетина, кемпферола и изоликвиритигенина. Калибровочную стандартную кривую строили для различных концентраций (5–100 мкг мл ^-1 ) каждого химического стандарта. ЖХ-МС / МС анализ проводили с использованием системы Accela LC с масс-спектрометром TSQ Quantum Access Max (Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) и источником ионизации электрораспылением.Метод анализа был таким же, как и анализы ВЭЖХ, описанные выше. Данные МС регистрировали в режиме положительных ионов с диапазонами m / z 50–500. Остальные параметры задавались в соответствии с описанными ранее (Li et al., 2014).

Результаты

Выделение и анализ последовательности предполагаемых кандидатов кДНК OMT

Полученные из транскриптома P. lobata , полноразмерные кДНК PlOMT3 и PlOMT4 были амплифицированы с помощью стандартных ОТ-ПЦР, и их последовательности были подтверждены секвенированием и депонированы в GenBank с номерами доступа KP057886 и KP057887 соответственно.Выведенные аминокислотные последовательности двух кандидатов OMT показали 37,8% идентичности друг с другом. Филогенетическое дерево было построено для изучения взаимоотношений кандидатов OMT с другими (изо) флавоидными OMT из других видов растений, функции которых уже известны (Рисунок 2). PlOMT3 и PlOMT4 сгруппированы с флавоноидными 3′-OMT, что позволяет предположить, что они являются кандидатами на 3′- O -метилирование изофлавона в P. lobata .

РИСУНОК 2. Филогенетический анализ P.lobata OMT-кандидатов с другими родственными последовательностями. Дерево было построено методом объединения соседей в MEGA 6.0. Числа на каждом узле указывают значения начальной загрузки 1000 реплик. Масштабная линейка представляет 0,2 аминокислотных замены на сайт.

Функциональный анализ кандидатов в ОМТ в дрожжах

Для скрининга активности PlOMT3 и PlOMT4, два возможных субстрата 3 ‘, 4′, 7-тригидроксиизофлавон (3’-гидрокси-даидзеин ) и 3′-гидроксипуэрарин, как показано на рисунке 1, были добавлены к культуры дрожжей, экспрессирующие рекомбинантные PlOMT.После индукции дрожжевые культуры экстрагировали этилацетатом, и превращение субстратов исследовали с помощью анализа ВЭЖХ. Примечательно, что дрожжевые клетки, экспрессирующие PlOMT4, могут преобразовывать 3′-гидрокси-даидзеин субстрата с образованием 3′-метоксидаидзеина (фиг. 3A), что указывает на активность 3′- O -метилирования PlOMT4. Когда 3′-гидроксипуэрарин добавляли к культуре, экспрессируемой PlOMT4, не наблюдалось явного превращения субстрата по сравнению с контрольной культурой, содержащей пустой вектор (данные не показаны).Эти данные продемонстрировали, что PlOMT4 способен метилировать 3′-гидроксидаидзеин, но не принимает 3′-гидроксипуэрарин в качестве субстрата. С другой стороны, как 3′-гидрокси-даидзеин, так и 3′-гидроксипуэрарин не были значительно преобразованы культурами, экспрессируемыми PlOMT3 (данные не показаны), что позволяет предположить, что PlOMT3 не проявлял активности по отношению к этим двум субстратам. Идентичность продукта 3′-метоксидаидзеина была подтверждена с помощью его стандарта с помощью анализа ЖХ-МС (рис. 3В).

РИСУНОК 3. Биохимическая характеристика PlOMT4 в дрожжевых клетках с помощью анализа ЖХ – МС. (A) , превращение 3′-гидрокси-даидзеина субстрата в 3′-метоксидаидзеин (пик 1) с помощью PlOMT4; (B) , масс-спектры пика 1 с его аутентичным стандартом. WAT11 (pESC-HIS), штамм дрожжей, несущий пустой вектор pESC-HIS в качестве контроля; WAT11 (pESC-HIS-PlOMT4), дрожжевой штамм, экспрессирующий PlOMT4.

In vitro Ферментные анализы

Для изучения субстратной специфичности PlOMT4, PlOMT4 был успешно экспрессирован в E.coli BL21 (DE3) и очищали с использованием смолы HisPur ^TM Ni-NTA (Thermo). Молекулярная масса рекомбинантного PlOMT4 составляла приблизительно 45 кДа, что согласуется с его предсказанной молекулярной массой (дополнительный рисунок S1), что свидетельствует о целостности белка PlOMT4. Очищенный рекомбинантный PlOMT4 затем анализировали in vitro с широким спектром субстратов (дополнительный рисунок S2), включая одну фенольную кислоту (кофейная кислота), один халкон (изоликвиритигенин), один флаванон (ликвиритигенин), два флавона (апигенин и лютеолин). ), два флавонола (кверцетин и кемпферол) и восемь изофлавонов (даидзеин, генистеин, формононетин, биоханин А, прунетин, изоформонетин, 3′-гидрокси-даидзеин и 3′-гидроксипуэрарин).В соответствии с описанными выше анализами in vivo очищенный PlOMT4 метилировал 3′-гидрокси-даидзеин субстрата с образованием продукта 3′-метоксидаидзеина (пик 1) (фиг. 4A). Кроме того, субстраты кверцетин и лютеолин также конвертировались PlOMT4 с образованием соответствующих метилированных продуктов изорамнетина (пик 2) и хризоэриола (пик 3), соответственно (Фигуры 4B, C). Идентичность продуктов (пики 1–3) была подтверждена их химическими стандартами с помощью анализа ЖХ – МС (дополнительный рисунок S3).Напротив, ни один из других используемых субстратов не был преобразован рекомбинантным PlOMT4 (данные не показаны), в частности, 3′-гидроксипуэрарин не преобразовался, что позволяет предположить, что метилирование должно происходить до гликозилирования изофлавоновой основной цепи.

РИСУНОК 4. Анализ ЖХ-МС ферментативной активности очищенного рекомбинантного PlOMT4 in vitro. Ферментативная активность рекомбинантного PlOMT4 была показана для превращения 3′-гидрокси-даидзеина в 3′-метоксидаидзеин (пик 1; A ), превращения кверцетина в изорамнетин (пик 2; B). ) и превращение лютеолина в хризоэриол (пик 3; C ).Масс-спектры пиков 1–3 с соответствующими аутентичными стандартами показаны на дополнительном рисунке S3.

Затем сравнивали начальные скорости PlOMT4 с 3′-гидроксидаидзеином, лютеолином и кверцетином. Как показано в таблице 1, очищенный PlOMT4 проявлял наивысшую активность в отношении изофлавон-3′-гидрокси-даидзеина (100% относительная активность, 4180,4 пикат / мг) с относительно более низкой активностью с флавоном лютеолином (относительная активность 42,1%, 1759,5 пикат / мг). / мг) и флавонол кверцетин (27.3% относительная активность, 1142,3 пкат / мг).

ТАБЛИЦА 1. Ферментативная активность очищенного рекомбинантного PlOMT4 в отношении ряда субстратов in vitro .

Актуальность транскриптов PlOMT4 и его катализированных метаболитов в

P. lobata

Ферментативный продукт PlOMT4, 3′-метоксидаидзеин, в основном обнаруживался в корнях (133,9 ± 2,7 мкг г ^-1 сухой массы), но почти не обнаруживался в его стеблях или листьях (рис. 5A).В соответствии с накоплением метаболитов, наибольшее количество транскриптов PlOMT4 наблюдалось в корнях, тогда как чрезвычайно низкие экспрессии были обнаружены в стеблях и листьях (рис. 5B). Таким образом, транскрипты PlOMT4 хорошо соответствуют характеру накопления его ферментативного продукта 3′-метоксидаидзеина в P. lobata в пространственном отношении.

РИСУНОК 5. Корреляционный анализ распространенности транскрипта PlOMT4 с накоплением 3′-метоксидаидзеина.(A) , характер накопления 3′-метокси-даидзеина в различных органах P. lobata ; (B) , относительное количество транскрипта PlOMT4 в различных органах; (C) , прирост накопления 3′-метоксидаидзеина в корнях P. lobata в ответ на стимулы MeJA; (D) , повышение уровня транскриптов PlOMT4 в корнях P. lobata при обработке MeJA.Ген актина P. lobata (номер доступа в GenBank HO708075) использовали в качестве внутреннего стандарта для анализа экспрессии гена.

Для дальнейшего изучения актуальности транскрипты гена и накопление метаболитов контролировали вызывающим образом, обрабатывая 1-месячные проростки P. lobata с помощью 100 мкМ MeJA. Корни растений, обработанных в течение 10 дней, использовали для анализа метаболитов, в то время как растения, обработанные в течение 6 часов, собирали для измерения уровней транскриптов гена.По-видимому, стимулы MeJA значительно увеличивали биосинтез продукта 3′-метоксидаидзеина по сравнению с ложными контрольными корнями (рис. 5C). В соответствии с увеличением накопления метаболитов, концентрация транскрипта PlOMT4 также повышалась в ответ на лечение MeJA (фиг. 5D). Взятые вместе, содержание транскрипта PlOMT4 хорошо коррелирует с накоплением 3′-метокси-даидзеина в P. lobata , подтверждая его предполагаемую биохимическую роль in vivo .

Обсуждение

Многие изофлавоноиды O -метилированы метоксильным остатком, усиливая их биологическую активность за счет изменения гидрофобности. Обычными сайтами метилирования являются 3′-, 4′- и 7-положения изофлавоноидов (изофлавоновая углеродная нумерация). Активность 4′- или 7-метилирования изучалась на нескольких видах бобовых (He et al., 1998; Akashi et al., 2003; Deavours et al., 2006), однако сообщений об идентификации ген, кодирующий изофлавон 3′-OMT (I3’OMT).Фитохимические исследования выявили присутствие 3′- O -метилированных изофлавонов в P. lobata , что позволяет использовать эту систему для молекулярного исследования 3′- O -метилирования изофлавонов. В этом исследовании мы выделили первую кДНК, кодирующую I3’OMT (PlOMT4) из P. lobata . Гетерологичная экспрессия в дрожжах и E. coli показала, что продукт гена проявлял ферментативную активность по метилированию изофлавонового субстрата 3′-гидрокси-даидзеина в 3′-положении.Ближайшим гомологом PlOMT4 в базах данных последовательностей (идентичность 44,9%) является фермент с активностью флавоноида 3′-OMT (F3’OMT) из Mentha x piperita (Willits et al., 2004), что, вероятно, указывает на то, что PlOMT4 может отличаться от F3’OMT. PlOMT4 предпочтительно метилирует 3′-гидрокси-даидзеин, он действительно имеет некоторые, но относительно более низкие активности в отношении флавоноидных соединений с 3′-гидроксигруппой, например, лютеолина и кверцетина (рис. 4). В частности, не было обнаружено продуктов, когда гликозильные производные 3′-гидрокси-даидзеина, т.е.е., 3′-гидроксипуэрарин, инкубировали с PlOMT4, что позволяет предположить, что реакции модификации изофлавона протекают в строгом порядке и 3′- O -метилирование может происходить до гликозилирования in vivo . Биохимическая функция PlOMT4 позволила нам предложить путь А, показанный на рисунке 1, в качестве благоприятного пути к 3′-метоксипуэрарину. Что касается структурной основы растительных изофлавоновых OMT (Zubieta et al., 2001), остатки His-277, Asp-305 и Glu-337 PlOMT4 могут быть важны для его биохимических функций.

Изучена экспрессия гена PlOMT4 по отношению к 3′- O -метилированному изофлавоноидному профилю P. lobata . 3′-метокси-даидзеин почти исключительно накапливается в корнях P. lobata (фиг. 5A), что согласуется с паттерном распределения транскриптов PlOMT4 (фиг. 5B). Более того, в корнях P. lobata уровни экспрессии гена PlOMT4 были увеличены за счет выявления MeJA (рис. 5C), что также привело к увеличению биосинтеза 3′- O -метилированных изофлавоноидов (рис. 5D). ), предполагая, что метилированные изофлавоноиды действуют как фитоалексины (Ibrahim et al., 1998; Bureau et al., 2007). Интеграция биохимического свойства фермента in vitro , экспрессии генов и накопления метаболитов in vivo убедительно подтверждает предполагаемую роль PlOMT4 в P. lobata .

Заключение

PlOMT4 является первым I3’OMT, идентифицированным у растений, и он, вероятно, ответственен за O -метилирование изофлавонов P. lobata в положении C-3 ‘. Идентификация PlOMT4 должна предоставить возможность улучшить липофильность изофлавоноидов или других структуроподобных соединений за счет O -метилирования в соответствующих положениях и, в свою очередь, подтолкнуть к клиническому применению.

Авторские взносы

YZ разработал это исследование; JL выполнила клонирование гена и биохимические реакции; CL провела лечение MeJA и оказала помощь в анализе ЖХ-МС или ВЭЖХ; JG помог собрать растительный материал; JL и YZ написали рукопись.

Финансирование

Это исследование было поддержано финансированием Национального фонда естественных наук Китая (номера грантов: 31300258 и 31170284) и грантом программы «Сто талантов» CAS для YZ (номер гранта: 29Y129441R0104444).

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/article/10.3389/fpls.2016.00793

Список литературы

Акаси, Т., Савада, Ю., Шимада, Н., Сакураи, Н., Аоки, Т., и Аябе, С. (2003). Клонирование кДНК и биохимическая характеристика S-аденозил-L-метионина: 2, 7, 4’-тригидроксиизофлаванон, 4’-O-метилтрансфераза, критический фермент изофлавоноидного фитоалексинового пути бобовых. Физиология растительных клеток . 44, 103–112. DOI: 10.1093 / pcp / pcg034

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Bureau, T., Lam, K. C., Ibrahim, R. K., Behdad, B., and Dayanandan, S. (2007). Структура, функция и эволюция растительных O-метилтрансфераз. Геном 50, 1001–1013. DOI: 10.1139 / G07-077

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чен, Ю. (2007). Механизм действия 3’-метоксипуэрарина на уменьшение церебральной ишемии-реперфузионного повреждения у крыс. Asia Pac. J. Clin. Nutr. 16, 302–304.

Google Scholar

Деавур, Б. Э., Лю, К.-Дж., Наумкина, М. А., Танг, Ю., Фараг, М. А., и Самнер, Л. В. (2006). Функциональный анализ членов семейств ферментов изофлавон и изофлаванон-О-метилтрансфераз из модельного бобового растения Medicago truncatula . Завод Мол. Биол. 62, 715–733. DOI: 10.1007 / s11103-006-9050-x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дубей С., Саксена П. и Пурсотум Р. (2008). Идентификация основных изофлавонов в корне Pueraria lobata . J. Environ. Res. Dev. 2, 413–420.

Google Scholar

Гитц Р. Д. и Вудс Р. А. (2002). Трансформация дрожжей методом ацетата лития / одноцепочечной ДНК-носителя / полиэтиленгликоля. Methods Enzymol. 350, 87–96.

Google Scholar

Хан, Дж., Ван, Х., Ге, Л., Чжу, З., Го, Ю., Чжан, Ю. и др. (2009). Защитный эффект 3’-метоксипуэрарина при ишемическом повреждении / реперфузии головного мозга у крыс. Китай Дж. Чин. Матер. Med. 34, 1422–1425.

Google Scholar

He, X.-Z., Reddy, J., and Dixon, R.A. (1998). Стрессовые реакции люцерны ( Medicago sativa L.). XXII. Клонирование кДНК и характеристика элиситор-индуцибельной изофлавон-7-O-метилтрансферазы. Завод Мол. Биол. 36, 43–54. DOI: 10.1023 / A: 1005938121453

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хайм К. Э., Тальяферро А. Р. и Бобиля Д. Дж. (2002). Флавоноидные антиоксиданты: химия, метаболизм и взаимосвязь между структурой и активностью. J. Nutr. Biochem. 13, 572–584. DOI: 10.1016 / S0955-2863 (02) 00208-5

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ибрагим, Р. К., Бруно, А., и Бантиньи, Б. (1998).Растительные О-метилтрансферазы: молекулярный анализ, общая сигнатура и классификация. Завод Мол. Биол. 36, 1–10. DOI: 10.1023 / A: 1005939803300

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джин, С. Е., Сон, Ю. К., Мин, Б. С., Юнг, Х. А., и Чой, Дж. С. (2012). Противовоспалительная и антиоксидантная активность компонентов, выделенных из корней Pueraria lobata . Arch. Pharm. Res. 35, 823–837. DOI: 10.1007 / s12272-012-0508-x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ларкин, М.А., Блэкшилдс, Г., Браун, Н. П., Ченна, Р., МакГеттиган, П. А., и Мак-Вильям, Х. (2007). Clustal W и Clustal X версии 2.0. Биоинформатика 23, 2947–2948. DOI: 10.1093 / биоинформатика / btm404

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, Дж., Ли, З., Ли, К., Гоу, Дж., И Чжан, Ю. (2014). Молекулярное клонирование и характеристика изофлавон-7-O-глюкозилтрансферазы из Pueraria lobata . Plant Cell Rep. 33, 1173–1185.DOI: 10.1007 / s00299-014-1606-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Максвелл, К. А., Харрисон, М. Дж., И Диксон, Р. А. (1993). Молекулярная характеристика и экспрессия изоликвиритигенин 2’-O-метилтрансферазы люцерны, фермента, специфически участвующего в биосинтезе индуктора генов нодуляции Rhizobium meliloti . Plant J. 4, 971–981. DOI: 10.1046 / j.1365-313X.1993.04060971.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Помпон, Д., Луерат Б., Бронин А. и Урбан П. (1996). Экспрессия дрожжей животных и растений P450 в оптимизированной окислительно-восстановительной среде. Methods Enzymol. 272, 51–64. DOI: 10.1016 / S0076-6879 (96) 72008-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ронг, Х., Стивенс, Дж. Ф., Дейнзер, М. Л., Де Куман, Л., и Де Кёкелейр, Д. (1998). Идентификация изофлавонов в корнях Pueraria lobata . Planta Med. 64, 620–627. DOI: 10,1055 / с-2006-957534

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тамура, К., Стечер, Г., Петерсон, Д., Филипски, А., Кумар, С. (2013). MEGA6: молекулярно-эволюционный генетический анализ версии 6.0. Мол. Биол. Evol. 30, 2725–2729. DOI: 10.1093 / molbev / mst197

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ван, X., Ли, С., Ли, Дж., Ли, К., и Чжан, Ю. (2015). Секвенирование транскриптома de novo в Pueraria lobata для выявления предполагаемых генов, участвующих в биосинтезе изофлавонов. Plant Cell Rep. 34, 733–743.DOI: 10.1007 / s00299-014-1733-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Willits, M. G., Giovanni, M., Prata, R. T., Kramer, C. M., De Luca, V., Steffens, J. C., et al. (2004). Биоферментация модифицированных флавоноидов: пример диверсификации вторичных метаболитов in vivo. Фитохимия 65, 31–41. DOI: 10.1016 / j.phytochem.2003.10.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вонг, К. Х., Ли, Г.К., Ли, К. М., Размовски-Наумовски, В., и Чан, К. (2011). Корень кудзу: традиционные способы применения и потенциальные лечебные свойства при диабете и сердечно-сосудистых заболеваниях. J. Ethnopharmacol. 134, 584–607. DOI: 10.1016 / j.jep.2011.02.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Wu, Q., Preisig, C. L., и VanEtten, H. D. (1997). Выделение кДНК, кодирующих (+) 6a-гидроксимаакияин 3-O-метилтрансферазу, конечный этап синтеза фитоалексина писатина в Pisum satvium . Завод Мол. Биол. 35, 551–560. DOI: 10.1023 / A: 1005836508844

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Янг, Х., Ан, Дж.-Х., Ибрагим, Р. К., Ли, С., и Лим, Ю. (2004). Трехмерная структура О-метилтрансферазы Arabidopsis thaliana , предсказанная моделированием на основе гомологии. J. Mol. График. Модель. 23, 77–87. DOI: 10.1016 / j.jmgm.2004.02.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чжан, Ю., Du, G., Xiong, Y., Zhao, Y., Cui, H., Cao, C., et al. (2008). Защитные эффекты 3’-метоксипуэрарина на головной мозг крыс, страдающих ишемией. Китай Дж. Чин. Матер. Med. 33, 537–540.

Google Scholar

Чжу Б. Т., Эзелл Э. Л. и Лир Дж. Г. (1994). Катехол-О-метилтрансфераза, катализируемое быстрым О-метилированием мутагенных флавоноидов. Метаболическая инактивация как возможная причина отсутствия канцерогенности in vivo. J. Biol. Chem. 269, 292–299.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Зубиета К., Хе Х. З., Диксон Р. А. и Ноэль Дж. П. (2001). Структуры двух метилтрансфераз природного продукта раскрывают основу субстратной специфичности растительных O-метилтрансфераз. Нац. Struct. Биол. 8, 271–279. DOI: 10,1038 / 85029

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Молекулярное клонирование и функциональная характеристика новой изофлавон-3′-O-метилтрансферазы из Pueraria lobata

DOI: 10.3389 / fpls.2016.00793. eCollection 2016.

Принадлежности Расширять

Принадлежности

• ¹ Ключевая лаборатория CAS по улучшению зародышевой плазмы растений и специализированному сельскому хозяйству, Ботанический сад Ухань, Академия наук Китая, Ухань, Китай.
• ² Ключевая лаборатория CAS по улучшению зародышевой плазмы растений и специализированному сельскому хозяйству, Уханьский ботанический сад, Академия наук Китая, Ухань, Китай; Университет Китайской академии наук, Пекин, Китай.

Бесплатная статья PMC

Элемент в буфере обмена

Цзя Ли и др.Фронтальный завод им. 2016 .

Бесплатная статья PMC Показать детали Показать варианты

Показать варианты

Формат АннотацияPubMedPMID

DOI: 10.3389 / fpls.2016.00793. eCollection 2016.

Принадлежности

• ¹ Ключевая лаборатория CAS по улучшению зародышевой плазмы растений и специализированному сельскому хозяйству, Ботанический сад Ухань, Академия наук Китая, Ухань, Китай.
• ² Ключевая лаборатория CAS по улучшению зародышевой плазмы растений и специализированному сельскому хозяйству, Уханьский ботанический сад, Академия наук Китая, Ухань, Китай; Университет Китайской академии наук, Пекин, Китай.

Элемент в буфере обмена

Полнотекстовые ссылки Опции CiteDisplay

Показать варианты

Формат АннотацияPubMedPMID

Абстрактный

Корни Pueraria lobata накапливают 3′-, 4′- и 7-O-метилированные изофлавоны, и многие из этих метилированных соединений проявляют различную фармакологическую активность.Активность 4′- или 7-O-метилирования была исследована на молекулярном уровне у нескольких видов бобовых. Однако ген, кодирующий изофлавон-3′-O-метилтрансферазу (ОМТ), еще не выделен ни у одного вида растений. В этом исследовании мы сообщили о первой кДНК, кодирующей изофлавон 3′-OMT из P. lobata (обозначенный как PlOMT4). Гетерологичная экспрессия в клетках дрожжей и Escherichia coli показала, что продукт гена проявляет ферментативную активность по метилированию 3′-гидроксигруппы изофлавонового субстрата.Обилие транскриптов PlOMT4 хорошо согласуется с его ферментативным продуктом в различных органах P. lobata и в корнях растений в ответ на выделение метилжасмоната. Интеграция биохимических данных с метаболическими и транскриптовыми данными поддерживает предполагаемую функцию PlOMT4. Идентификация PlOMT4 не только поможет понять метаболизм изофлавоноидов у P. lobata, но также потенциально предоставит ферментный катализатор для метилирования существующих кандидатов в лекарственные препараты с целью улучшения их гидрофобности.

Ключевые слова: 3′-O-метилирование; Pueraria lobata; изофлавон; метилжасмонат; метилтрансфераза.

Цифры

РИСУНОК 1

Предлагаются два возможных пути (A, B)…

РИСУНОК 1

Предложены два возможных пути (A, B) к 3′-метоксипуэрарину в Pueraria lobata . I3′OMT, изофлавоид…

ФИГУРА 1

Предложены два возможных пути (A, B) к 3′-метоксипуэрарину в Pueraria lobata . I3’OMT, изофлавоид 3′- O -метилтрансфераза; GT, гликозилтрансфераза.

РИСУНОК 2

Филогенетический анализ P.…

РИСУНОК 2

Филогенетический анализ кандидатов OMT P. lobata с другими родственными последовательностями. …

ФИГУРА 2

Филогенетический анализ кандидатов OMT P. lobata с другими родственными последовательностями. Дерево было построено методом объединения соседей в MEGA 6.0. Числа на каждом узле указывают значения начальной загрузки 1000 реплик. Масштабная линейка представляет 0,2 аминокислотных замены на сайт.

РИСУНОК 3

Биохимическая характеристика PlOMT4 в…

РИСУНОК 3

Биохимическая характеристика PlOMT4 в дрожжевых клетках с помощью анализа ЖХ – МС.(A) ,…

РИСУНОК 3

Биохимическая характеристика PlOMT4 в дрожжевых клетках с помощью анализа ЖХ – МС. (A) , превращение 3′-гидрокси-даидзеина субстрата в 3′-метоксидаидзеин (пик 1) с помощью PlOMT4; (B) , масс-спектры пика 1 с его аутентичным стандартом. WAT11 (pESC-HIS), штамм дрожжей, несущий пустой вектор pESC-HIS в качестве контроля; WAT11 (pESC-HIS-PlOMT4), дрожжевой штамм, экспрессирующий PlOMT4.

РИСУНОК 4

Анализ фермента методом ЖХ – МС…

РИСУНОК 4

ЖХ – МС анализ ферментативной активности очищенного рекомбинантного PlOMT4 in vitro.…

РИСУНОК 4

ЖХ-МС анализ ферментативной активности очищенного рекомбинантного PlOMT4 in vitro. Ферментативная активность рекомбинантного PlOMT4 была показана для превращения 3′-гидрокси-даидзеина в 3′-метоксидаидзеин (пик 1; A ), превращения кверцетина в изорамнетин (пик 2; B ). ) и превращение лютеолина в хризоэриол (пик 3; C ).Масс-спектры пиков 1–3 с соответствующими аутентичными стандартами показаны на дополнительном рисунке S3.

РИСУНОК 5

Корреляционный анализ PlOMT4…

РИСУНОК 5

Корреляционный анализ содержания транскрипта PlOMT4 с накоплением 3′-метоксидаидзеина.…

РИСУНОК 5

Корреляционный анализ содержания транскрипта PlOMT4 с накоплением 3′-метоксидаидзеина. (A) , характер накопления 3′-метокси-даидзеина в различных органах P. lobata ; (B) , относительное количество транскрипта PlOMT4 в различных органах; (C) , прирост накопления 3′-метокси-даидзеина в P.lobata в ответ на стимулы MeJA; (D) , повышение уровня транскриптов PlOMT4 в корнях P. lobata при обработке MeJA. Ген актина P. lobata (номер доступа в GenBank HO708075) использовали в качестве внутреннего стандарта для анализа экспрессии гена.

Похожие статьи

• Молекулярное клонирование и характеристика изофлавон-7-O-глюкозилтрансферазы из Pueraria lobata.

  Ли Дж, Ли З, Ли Ц, Гоу Дж, Чжан Ю. Ли Дж. И др. Rep Plant Cell. Июль 2014; 33 (7): 1173-85. DOI: 10.1007 / s00299-014-1606-7. Epub 2014 4 апреля. Plant Cell Rep.2014. PMID: 24700248

• Молекулярное клонирование и функциональная характеристика новой (изо) флавон-4 ‘, 7-O-диглюкозид-глюкозилтрансферазы из Pueraria lobata.

  Ван Х, Фань Р., Ли Дж., Ли С, Чжан Ю.Ван X и др. Фронтальный завод им. 2016 31 марта; 7: 387. DOI: 10.3389 / fpls.2016.00387. eCollection 2016. Фронтальный завод им. 2016 г. PMID: 27066037 Бесплатная статья PMC.

• Альтернативный путь биосинтеза формононетина у Pueraria lobata.

  Ли Дж, Ли К, Гоу Дж, Ван Х, Фан Р, Чжан Ю. Ли Дж. И др. Фронтальный завод им. 2016 14 июня; 7: 861. DOI: 10.3389 / fpls.2016.00861. eCollection 2016. Фронтальный завод им. 2016 г. PMID: 27379141 Бесплатная статья PMC.

• Средства от похмелья Pueraria lobata (корень Кудзу) и риск возникновения новообразований, связанных с ацетальдегидом.

  МакГрегор Н. МакГрегор Н. Алкоголь. 2007 ноябрь; 41 (7): 469-78. DOI: 10.1016 / j.alcohol.2007.07.009. Алкоголь. 2007 г. PMID: 17980785 Рассмотрение.

• [Достижения Pueraria lobate в молекулярной фармакогнозии].

  Ян Б.С., Хуан К.Л., Се LX, Ву Б., Дэн КЗ, Ву З.Г., Чжу В.Ф., Хе С.Л., Хуан Ц., Чжу Й.Й, Ге Ф. Ян Б.С. и др. Чжунго Чжун Яо За Чжи. 2021 Май; 46 (9): 2149-2157. DOI: 10.19540 / j.cnki.cjcmm.20210225.102. Чжунго Чжун Яо За Чжи. 2021 г. PMID: 34047115 Рассмотрение. Китайский язык.

Процитировано

5 статья

• Сравнительный анализ транскриптома корней, стеблей и листьев Pueraria lobata (Willd.) Охви: идентификация генов, участвующих в биосинтезе изофлавоноидов.

  Ван Ц., Сюй Н, Цуй С. Ван С. и др. PeerJ. 2021 22 февраля; 9: e10885. DOI: 10.7717 / peerj.10885. Электронная коллекция 2021 г. PeerJ. 2021 г. PMID: 33665027 Бесплатная статья PMC.

• Идентификация уникального типа изофлавон-О-метилтрансферазы, GmIOMT1, на основе мультиомного анализа сои в условиях биотического стресса.

  Uchida K, Sawada Y, Ochiai K, Sato M, Inaba J, Hirai MY. Учида К. и др. Physiol растительной клетки. 2020 23 декабря; 61 (11): 1974-1985. DOI: 10.1093 / pcp / pcaa112. Physiol растительной клетки. 2020. PMID: 32894761 Бесплатная статья PMC.

• Секвенирование и анализ транскриптома выявляют молекулярный ответ на стимулы селена у Pueraria lobata (willd.) Ohwi.

  Го К., Яо И, Ян М., Ли И, Ву Б., Линь Х. Гуо К. и др. PeerJ. 2020 24 марта; 8: e8768. DOI: 10.7717 / peerj.8768. Электронная коллекция 2020. PeerJ. 2020. PMID: 32231880 Бесплатная статья PMC.

• Всесторонний анализ транскриптома выявляет гены, потенциально участвующие в биосинтезе изофлавонов в бентосе Pueraria thomsonii.

  Хэ М, Яо И, Ли И, Ян М., Ли И, Ву Б, Ю Д.He M, et al. PLoS One. 4 июня 2019 г .; 14 (6): e0217593. DOI: 10.1371 / journal.pone.0217593. Электронная коллекция 2019. PLoS One. 2019. PMID: 31163077 Бесплатная статья PMC.

• Глобальные анализы транскриптома выявляют дифференциально экспрессируемые гены шести органов и предполагаемые гены, участвующие в биосинтезе (изо) флавоноидов у Belamcanda chinensis .

  Тянь М, Чжан Х, Чжу Ю, Се Г, Цинь М.Тиан М. и др. Фронтальный завод им. 14 августа 2018 г .; 9: 1160. DOI: 10.3389 / fpls.2018.01160. eCollection 2018. Фронтальный завод им. 2018. PMID: 30154811 Бесплатная статья PMC.

Рекомендации

1. 1. Акаси Т., Савада Ю., Шимада Н., Сакураи Н., Аоки Т., Аябе С. (2003). Клонирование кДНК и биохимическая характеристика S-аденозил-L-метионина: 2, 7, 4’-тригидроксиизофлаванон, 4’-O-метилтрансфераза, критический фермент изофлавоноидного фитоалексинового пути бобовых.Physiol растительной клетки. 44 103–112. 10.1093 / pcp / pcg034 — DOI — PubMed
2. 1. Бурьян В., Ральф Дж., Баучер М. (2003). Биосинтез лигнина. Анну. Rev. Plant Biol. 54 519–546. 10.1146 / annurev.arplant.54.031902.134938 — DOI — PubMed
3. 1. Бюро Т., Лам К. С., Ибрагим Р. К., Бехдад Б., Даянандан С. (2007). Структура, функция и эволюция растительных O-метилтрансфераз. Геном 50 1001–1013. 10.1139 / G07-077 — DOI — PubMed
4. 1. Чен Ю.(2007). Механизм действия 3’-метоксипуэрарина на уменьшение церебральной ишемии-реперфузионного повреждения у крыс. Asia Pac. J. Clin. Nutr. 16 302–304. — PubMed
5. 1. Деавурс Б. Э., Лю С.-Дж., Наумкина М. А., Тан Ю., Фараг М. А., Самнер Л.W. (2006). Функциональный анализ членов семейств ферментов изофлавон и изофлаванон-О-метилтрансфераз модельного бобового растения Medicago truncatula. Завод Мол. Биол. 62 715–733. 10.1007 / s11103-006-9050-х — DOI — ЧВК — PubMed

Показать все 27 ссылок

LinkOut — дополнительные ресурсы

• Полнотекстовые источники

• Другие источники литературы

Молекулярное клонирование и характеристика изофлавон-7-O-глюкозилтрансферазы из Pueraria lobata

Новую изофлавон-7-O-глюкозилтрансферазу PlUGT1 выделяли из Pueraria lobata.PlUGT1 может превращать даидзеин в даидзин, генистеин в генистин, а также формононетин в ононин. Корни Pueraria lobata традиционно употребляются как богатый источник изофлавоновых гликозидов, которые имеют различные преимущества для здоровья человека. Однако на сегодняшний день гены, кодирующие изофлавон UDP-гликозилтрансферазы (UGT), были выделены только из корней проростков сои (GmIF7GT), семян сои (UGT73F2) и суспензионных культур клеток Glycyrrhiza echinata (GeIF7GT). Для исследования метаболизма изофлавонов у P.lobata, 40 типов частичных кДНК UGT были выделены из P. lobata и идентифицированы семь полноразмерных кандидатов UGT с преимущественной экспрессией в корнях. Функциональные анализы на дрожжах (Saccharomyces cerevisiae) показали, что один из этих кандидатов UGT, обозначенный PlUGT1 (официальное обозначение UGT UGT88E12), эффективно гликозилировал изофлавоновые агликоны по 7-гидроксигруппе. Рекомбинантный PlUGT1, очищенный из клеток Escherichia coli, был охарактеризован и показал, что он относительно специфичен для изофлавоновых агликонов, в то время как флавоноидные субстраты были плохо приняты.Биохимические результаты показали, что PlUGT1 представляет собой изофлавон-7-O-глюкозилтрансферазу. Выведенная аминокислотная последовательность PlUGT1 имела только 26% идентичности с GeIF7GT, 27% с UGT73F2 и 63% с GmIF7GT. Ген PlUGT1 был высоко экспрессирован в корнях P. lobata по сравнению с другими органами и сильно индуцировался сигналом метилжасмоната в суспензионной культуре клеток P. lobata. Обилие транскриптов PlUGT1 коррелировало с паттерном накопления изофлавоновых гликозидов, таких как даидзин, у P.lobata или в культуре клеточной суспензии. Биохимические свойства и профиль экспрессии генов подтверждают идею о том, что PlUGT1 может играть роль в гликозилировании изофлавонов у P. lobata.

Молекулярное клонирование и характеристика изофлавон-7-O-глюкозилтрансферазы из Pueraria lobata

Achnine L, Huhman DV, Farag MA, Sumner LW, Blount JW, Dixon RA (2005) Отбор на основе геномики и функциональная характеристика тритерпенфераз из тритерпенфераз модельная бобовая Medicago truncatula .Завод J 41: 875–887

CAS PubMed Статья Google Scholar

Akashi T, Aoki T, Ayabe S (1999) Клонирование и функциональная экспрессия кДНК цитохрома P450, кодирующей 2-гидроксиизофлаванонсинтазу, участвующую в биосинтезе изофлавоноидного скелета у солодки. Физиология растений 121: 821–828

CAS PubMed Central PubMed Статья Google Scholar

Акаши Т., Аоки Т., Аябе С. (2005) Молекулярная и биохимическая характеристика 2-гидроксиизофлаванондегидратазы.Участие карбоксилестеразоподобных белков в биосинтезе изофлавонов бобовых. Физиология растений 137: 882–891

CAS PubMed Central PubMed Статья Google Scholar

Alekel DL, Germain AS, Peterson CT, Hanson KB, Stewart JW, Toda T (2000) Изофлавон-богатый изофлавонами изолят соевого белка снижает потерю костной массы в поясничном отделе позвоночника у женщин в перименопаузе. Am J Clin Nutr 72: 844–852

CAS PubMed Google Scholar

Auyeung KK, Law PC, Ko JK (2012) Новые антиангиогенные эффекты формононетина на клетки рака толстой кишки человека и ксенотрансплантат опухоли.Oncol Rep 28: 2188–2194

CAS PubMed Google Scholar

Boonsnongcheep P, Korsangruang S, Soonthornchareonnon N, Chintapakorn Y, Saralamp P, Prathanturarug S (2010) Рост и накопление изофлавоноидов Pueraria candollei var. Candollei и P. Candollei var. суспензионные культуры клеток mirifica. Культ органа растительной клетки и ткани 101: 119–126

CAS Статья Google Scholar

Boue SM, Wiese TE, Nehls S, Burow ME, Elliott S, Carter-Wientjes CH, Shih BY, McLachlan JA, Cleveland TE (2003) Оценка эстрогенных эффектов экстрактов бобовых, содержащих фитоэстрогены.J Agric Food Chem 51: 2193–2199

CAS PubMed Статья Google Scholar

Bowles D, Isayenkova J, Lim EK, Poppenberger B (2005) Гликозилтрансферазы: менеджеры малых молекул. Curr Opin Plant Biol 8: 254–263

CAS PubMed Статья Google Scholar

Brazier-Hicks M, Evans KM, Gershater MC, Puschmann H, Steel PG, Edwards R (2009) C -гликозилирование флавоноидов в зерновых.J Biol Chem 284: 17926–17934

CAS PubMed Central PubMed Статья Google Scholar

Chen F, Hao F, Li C, Gou J, Lu D, Gong F, Tang H, Zhang Y (2013) Идентификация трех экологических хемотипов железистых трихомов Xanthium strumarium с использованием комбинированного метода ЯМР и ЖХ-МС . PLoS One 8: e76621

CAS PubMed Central PubMed Статья Google Scholar

Dakora FD, Joseph CM, Phillips DA (1993) Люцерна ( Medicago sativa L.) корневые экссудаты содержат изофлавоноиды в присутствии Rhizobium meliloti . Физиология растений 101: 819–824

CAS PubMed Central PubMed Google Scholar

Dhaubhadel S, Farhangkhoee M, Chapman R (2008) Идентификация и характеристика изофлавоноид-специфической гликозилтрансферазы и малонилтрансферазы из семян сои. J Exp Bot 59: 981–994

CAS PubMed Статья Google Scholar

Gietz RD, Woods RA (2002) Трансформация дрожжей методом ацетата лития / одноцепочечной ДНК-носителя / полиэтиленгликоля.Методы Enzymol 350: 87–96

CAS PubMed Статья Google Scholar

He X, Blount JW, Ge S, Tang Y, Dixon RA (2011) Геномный подход к биосинтезу изофлавонов в кудзу ( Pueraria lobata ). Planta 233: 843–855

CAS PubMed Статья Google Scholar

Hirotani M, Kuroda R, Suzuki H, Yoshikawa T (2000) Клонирование и экспрессия UDP-глюкозы: флавоноид 7- O -глюкозилтрансферазы из культур волосистых корней Scutellaria baicalensis .Planta 210: 1006–1013

CAS PubMed Google Scholar

Huang L, Li J, Ye H, Li C, Wang H, Liu B, Zhang Y (2012) Молекулярная характеристика пути биосинтеза пентациклических тритерпеноидов в Catharanthus roseus . Planta 236: 1571–1581

CAS PubMed Статья Google Scholar

Hughes J, Hughes MA (1994) Множественные гены вторичного растительного продукта UDP-глюкозо-глюкозилтрансферазы, экспрессируемые в семядолях маниоки ( Manihot esculenta Crantz).Митохондриальная ДНК 5: 41–49

CAS Статья Google Scholar

Jin SE, Son YK, Min BS, Jung HA, Choi JS (2012) Противовоспалительная и антиоксидантная активность компонентов, выделенных из корней Pueraria lobata . Arch Pharm Res 35: 823–837

CAS PubMed Статья Google Scholar

Jung W, Yu O, Lau SM, O’Keefe DP, Odell J, Fader G, McGonigle B (2000) Идентификация и экспрессия изофлавон-синтазы, ключевого фермента для биосинтеза изофлавонов в бобовых.Nat Biotechnol 18: 208–212

CAS PubMed Статья Google Scholar

Keung WM, Vallee BL (1998) Корень кудзу: древний китайский источник современных антидипсотропных агентов. Фитохимия 47: 499–506

CAS PubMed Статья Google Scholar

Keung WM, Lazo O, Kunze L, Vallee BL (1996) Усиление биодоступности даидзина экстрактом Radix puerariae.Proc Natl Acad Sci USA 93: 4284–4288

CAS PubMed Central PubMed Статья Google Scholar

Korsangruang S, Soonthornchareonnon N, Chintapakorn Y, Saralamp P, Prathanturarug S (2010) Влияние абиотических и биотических элиситоров на рост и накопление изофлавоноидов в Pueraria candollei var. Candollei и P. Candollei var. суспензионные культуры клеток mirifica. Культ растительных клеток, тканевых органов, 103: 333–342

CAS Статья Google Scholar

Koster J, Barz W (1981) UDP-глюкоза: изофлавон 7- O -глюкозилтрансфераза из корней нута ( Cicer arietinum L.). Arch Biochem Biophys 212: 98–104

CAS PubMed Статья Google Scholar

Lamartiniere CA (2000) Защита от рака груди с помощью генистеина: компонент сои. Am J Clin Nutr 71: 1705S – 1707S Обсуждение 1708S – 1709S

CAS PubMed Google Scholar

Ларкин М.А., Блэкшилдс Г., Браун Н.П., Ченна Р., МакГеттиган П.А., МакВиллиам Х., Валентин Ф., Уоллес И.М., Уилм А., Лопес Р., Томпсон Д.Д., Гибсон Т.Дж., Хиггинс Д.Г. (2007) Кластал В. и Кластал Х версия 2.0. Биоинформатика 23: 2947–2948

CAS PubMed Статья Google Scholar

Lee JS (2004) Добавление водного экстракта Pueraria Radix при изменении антиоксидантных ферментов и липидов профиль у крыс, получавших этанол. Clin Chim Acta 347: 121–128

Google Scholar

Li G, Zhang Q, Wang Y (2010) Химические компоненты из корней Pueraria lobata .Чжунго Чжун Яо За Чжи 35: 3156–3160

CAS PubMed Google Scholar

Li Z-B, Li C-F, Li J, Zhang Y-S (2014) Молекулярное клонирование и функциональная характеристика двух дивергентных лигаз 4-кумарат: кофермент A из кудзу ( Pueraria lobata ). Biol Pharm Bull 37: 113–122

CAS PubMed Статья Google Scholar

Lin RC, Guthrie S, Xie CY, Mai K, Lee DY, Lumeng L, Li TK (1996) Изофлавоноидные соединения, экстрагированные из Pueraria lobata , подавляют предпочтение алкоголя в фармакогенетической модели алкоголизма на крысах.Alcohol Clin Exp Res 20: 659–663

CAS PubMed Статья Google Scholar

Merz-Demlow BE, Duncan AM, Wangen KE, Xu X, Carr TP, Phipps WR, Kurzer MS (2000) Изофлавоны сои улучшают липиды плазмы у нормохолестеринемических женщин в пременопаузе. Am J Clin Nutr 71: 1462–1469

CAS PubMed Google Scholar

Modolo LV, Blount JW, Achnine L, Naoumkina MA, Wang X, Dixon RA (2007) Функциональный геномный подход к (изо) гликозилированию флавоноидов в модельной бобовой Medicago truncatula .Plant Mol Biol 64: 499–518

CAS PubMed Статья Google Scholar

Murashige T, Skoog F (1962) Пересмотренная среда для быстрого роста и биологических анализов с культурами тканей табака. Physiol Plant 15: 473–497

CAS Статья Google Scholar

Нагашима С., Инагаки Р., Кубо А., Хиротани М., Йошикава Т. (2004) Клонирование кДНК и экспрессия изофлавоноид-специфической глюкозилтрансферазы из культур суспензии клеток Glycyrrhiza echinata .Planta 218: 456–459

CAS PubMed Статья Google Scholar

Nagatoshi M, Terasaka K, Nagatsu A, Mizukami H (2011) Иридоид-специфическая глюкозилтрансфераза из Gardenia jasminoides . J Biol Chem 286: 32866–32874

CAS PubMed Central PubMed Статья Google Scholar

Noguchi A, Saito A, Homma Y, Nakao M, Sasaki N, Nishino T, Takahashi S, Nakayama T (2007) UDP-глюкоза: изофлавон 7- O -глюкозилтрансфераза из корней сои ( глицин макс ) саженцы.Очистка, клонирование генов, филогенетика и значение альтернативной стратегии ферментативного катализа. J Biol Chem 282: 23581–23590

CAS PubMed Статья Google Scholar

Offen W, Martinez-Fleites C, Yang M, Kiat-Lim E, Davis BG, Tarling CA, Ford CM, Bowles DJ, Davies GJ (2006) Структура флавоноидной глюкозилтрансферазы раскрывает основу для модификации растительного природного продукта . EMBO J 25: 1396–1405

CAS PubMed Central PubMed Статья Google Scholar

Paquette S, Moller BL, Bak S (2003) О происхождении растительных гликозилтрансфераз семейства 1.Фитохимия 62: 399–413

CAS PubMed Статья Google Scholar

Pompon D, Louerat B, Bronine A, Urban P (1996) Дрожжевая экспрессия животных и растений P450 в оптимизированных окислительно-восстановительных средах. Методы Enzymol 272: 51–64

CAS PubMed Статья Google Scholar

Sambrook J, Russell DW (2001) Молекулярное клонирование: лабораторное руководство, том 1, 3-е изд.Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор

Google Scholar

Sawada S, Suzuki H, Ichimaida F, Yamaguchi MA, Iwashita T, Fukui Y, Hemmi H, Nishino T, Nakayama T (2005) UDP-глюкуроновая кислота: глюкуронозилтрансфераза антоцианина из цветков красной ромашки ( Bellis) . Энзимология и филогенетика новой глюкуронозилтрансферазы, участвующей в биосинтезе цветочного пигмента. J Biol Chem 280: 899–906

CAS PubMed Статья Google Scholar

Shao H, He X, Achnine L, Blount JW, Dixon RA, Wang X (2005) Кристаллические структуры многофункциональной тритерпен / флавоноидной гликозилтрансферазы из Medicago truncatula .Растительная клетка 17: 3141–3154

CAS PubMed Central PubMed Статья Google Scholar

Steele CL, Gijzen M, Qutob D, Dixon RA (1999) Молекулярная характеристика фермента, катализирующего реакцию миграции арила при биосинтезе изофлавоноидов в сое. Arch Biochem Biophys 367: 146–150

CAS PubMed Статья Google Scholar

Тамура К., Стечер Г., Петерсон Д., Филипски А., Кумар С. (2013) MEGA6: анализ молекулярной эволюционной генетики, версия 6.0. Mol Biol Evol 30: 2725–2729

CAS PubMed Статья Google Scholar

Thiem B (2003) Размножение in vitro продуцирующего изофлавоны Pueraria lobata (Willd.) Ohwi. Plant Sci 165: 1123–1128

CAS Статья Google Scholar

Wu HQ, Guo HN, Wang HQ, Chang MZ, Zhang GL, Zhao YX (2009) Защитные эффекты и механизм пуэрарина на расстройство обучающей памяти после глобального церебрального ишемического реперфузионного повреждения у крыс.Chin J Integr Med 15: 54–59

CAS PubMed Статья Google Scholar

Yasuda T, Endo M, Kon-no T, Kato T, Mitsuzuka M, Ohsawa K (2005) Жаропонижающее, обезболивающее и миорелаксантное действие изофлавоноидов пуэрарии и их метаболитов из Pueraria lobata Ohwi — традиционный китайский препарат . Biol Pharm Bull 28: 1224–1228

CAS PubMed Статья Google Scholar

Yu H-S, Ma L-Q, Zhang J-X, Shi G-L, Hu Y-H, Wang Y-N (2011) Характеристика гликозилтрансфераз, ответственных за биосинтез салидрозида в Rhodiola sachalinensis .Фитохимия 72: 862–870

CAS Статья Google Scholar

Zhang FR, Chen JZ, Zhu JH, Wang XX, Shang YP, Guo XG, Dai HM, Sun J (2004) Влияние пуэрарина на количество и активность эндотелиальных клеток-предшественников периферической крови. Чжунго Чжун Яо За Чжи 29: 777–781

CAS PubMed Google Scholar

Zhao C, Chan HY, Yuan D, Liang Y, Lau TY, Chau FT (2011) Быстрое одновременное определение основных изофлавонов Pueraria lobata и дискриминационный анализ его географического происхождения с помощью анализа главных компонентов.Фитохим Анал 22: 503–508

CAS PubMed Статья Google Scholar

Pueraria lobata — обзор

1.28.3.4 Халкон-синтаза и восстановление халкона

Первым предшественником изофлавоноидов C ₁₅ является халкон, полученный в результате конденсации 4-кумароил-КоА ( 40 ) и три молекулы малонил-КоА ( 41 ), катализируемые ферментом халконсинтазой (CHS).CHS представляет собой димерную поликетидсинтазу, субъединицу M _r ≈ 42000, которая катализирует реакции присоединения, конденсации и циклизации, приводящие к образованию 2 ‘, 4,4′, 6’-тетрагидроксихалкона (нарингенина халкона) ( 42 ) (Схема 5). CHS был очищен и охарактеризован, а его гены клонированы из многих видов растений. ^134–138 Дальнейшие обсуждения здесь будут ограничены аспектами его действия и экспрессии, конкретно связанными с его участием в синтезе изофлавоноидов.

Схема 5.

Генетическая модель растения Arabidopsis thaliana содержит единственный ген CHS , ¹³⁹ , которого явно достаточно для основных функций роста и развития растения. Однако у большинства видов бобовых культур CHS кодируется мультигенными семействами, состоящими из 6-8 членов у зеленой фасоли ( P. vulgaris ), ¹⁴⁰ не менее семи у сои, ¹³⁵ не менее семи в горохе, ¹³⁶ по крайней мере четыре в подземном клевере, ¹³⁷ шесть или семь в Pueraria lobata , ¹⁴¹ и более семи в люцерне. ¹³⁸ Члены семейства генов часто плотно сгруппированы в геноме, ^135,137,140 , что позволяет предположить, что они возникли в результате недавних событий дупликации генов. Было высказано предположение, что множественные формы CHS в бобовых, возможно, эволюционировали для обслуживания определенных специализаций флавоноидного пути для производства изофлавоноидных фитоалексинов и индукторов гена нодуляции флавоноидов / изофлавоноидов / халконов. Однако в настоящее время нет прямых доказательств в поддержку этой гипотезы.У люцерны по крайней мере пять различных членов генного семейства CHS конститутивно экспрессируются в корнях и корневых клубеньках, но не в надземных частях растения. Однако эти члены семейства экспрессируются в листьях в начале защитной реакции на изофлавоноид фитоалексином после воздействия патогенов или элиситоров. ¹³⁸ Белки CHS, кодируемые разными членами семейства генов, обычно очень похожи по первичной последовательности, и неизвестно, обладают ли они разными кинетическими свойствами или по-разному локализованы в клетке.

Индукция CHS на уровне активности, белка, уровней транскриптов, транслируемой активности мРНК или скорости транскрипции была продемонстрирована в клетках многих видов бобовых в отношении выявления изофлавоноидов. ^{138,142–145} Значительное внимание было уделено регуляторным механизмам, посредством которых гены CHS активируются в ответ на сигналы развития и окружающей среды, а промоторные элементы и родственные им факторы транскрипции участвуют в включении экспрессии гена во время ответ на изофлавоноид фитоалексин не выявлен. ¹⁴⁶

Многие изофлавоноиды не имеют 5-гидроксильной группы (6′-гидроксил, нумерация халконов) и происходят от 2 ‘, 4,4’-тригидроксихалкона ( 36 ), а не от ( 42 ). ). 5-дезоксиизофлавоноиды особенно распространены в корнях бобовых, а фитоалексины птерокарпанов неизменно относятся к этому классу. ¹³ Исследования C-мечения показали, что 5-гидроксильная группа была потеряна до циклизации A-кольца халкона, ¹⁴⁷ предположительно на стадии поликетида.После многих безуспешных попыток продемонстрировать реакцию in vitro было показано, что неочищенный экстракт из вызванных культур клеток Glycyrrhiza echinata может продуцировать ( 36 ) и соответствующий ему флаванон ликвиритигенин ( 60 ) в дополнение к нарингенин ( 61 ), из ( 40 ) и ( 41 ) в присутствии высоких концентраций НАДФН. ¹⁴⁸ Соединение ( 36 ) было сначала получено, а затем преобразовано в ( 60 ) халконизомеразой, присутствующей в препарате.Активность описывалась как 6′-дезоксихалконсинтаза, а также была продемонстрирована на протопластах G. echinata . ¹⁴⁸

Механизм образования 6′-дезоксихалкона стал очевидным, когда было показано, что очищенный CHS сои требует присутствия отдельного белка, учитывая тривиальное название «халконредуктаза» (CHR), для НАДФН-зависимого образования. из ( 36 ). ¹⁴⁹ Редуктаза была очищена до кажущейся гомогенности, и было показано, что она является мономером M _r 34000, который катализирует перенос pro- R -водорода [4- ³ H] NADPH к поликетиду, связанному с CHS, что приводит к потере гидроксильной функции воды (схема 5).Фермент имел оптимум pH 6,0, K _m для НАДФН 17 мкмоль · л ^-1 , проявлял примерно 90% максимальную активность при молярном соотношении (CHS: редуктаза) 2: 1 и мог взаимодействовать. с CHS из петрушки, вида, который не синтезирует производные 6′-дезоксихалкона. ¹⁴⁹ Последний пункт предполагает, что множественные формы CHS, обнаруженные в бобовых, вряд ли по-разному участвуют в образовании 6′-дезокси и 6′-гидроксихалконов.

Были получены антитела против редуктазы сои ¹⁵⁰ и были получены клоны кДНК. ¹⁵¹ CHR кодируется небольшим семейством генов сои ¹⁵¹ и люцерны ^152–155 , а также был клонирован из Pueraria lobata и Glycyrrhiza echinata ; ^101,155 этот ген, по-видимому, не присутствует у таких видов, как морковь и петрушка, которые не накапливают 5-дезоксиизофлавоноиды. ¹⁵¹ CHR может функционально экспрессироваться в Escherichia coli ¹⁵¹ , и рекомбинантный фермент может быть получен в миллиграммах из этого источника. ¹⁵⁶ Фермент обладает доменом лейциновой молнии, но неизвестно, участвует ли он во взаимодействиях с CHS. Хотя фермент представляет собой поликетидредуктазу, он не обладает значительной идентичностью последовательности с редуктазами синтеза жирных кислот; скорее, он связан с альдозоредуктазой и простагландинсинтазой млекопитающих, а также с редуктазой 2,5-дикето-d-глюконовой кислоты из Corynebacterium . ¹⁵¹ До сих пор не ясно, почему совместное взаимодействие CHR с CHS никогда не приводит к образованию более чем 50% 6′-дезоксихалкона. Так обстоит дело с ферментом, если он очищен из растительных источников или если он произведен в E. coli. Взаимодействие рекомбинантного CHR с гетеродимером CHS, содержащим единственный активный сайт, не привело к значительным различиям в соотношении продуктов 6′-дезокси и 6′-гидроксила по сравнению с тем, которое наблюдается с CHS дикого типа, что указывает на то, что образование обоих халконов не может быть результатом наличие двух функционально различных активных сайтов (т.е., один связан с CHR, а другой нет). ¹⁵⁷

Исследования с использованием антител CHR и зондов кДНК продемонстрировали тесно скоординированную индукцию CHR с CHS на уровне белка, активности мРНК или скорости транскрипции в вызванных суспензионных культурах клеток сои, ¹⁵⁰ G. echinata , ¹⁵⁸ и люцерна. ¹⁵⁹

Клонирование гена, кодирующего гликозилтрансферазу из Pueraria lobata (Wild.) Ohwi и его выражение в Pichia pastoris

• Вэньлин Чжоу
• Инхуа Ван
• Ганг Чен
• Мин Люй
• Ликсия Ян
• Сяосян Ху
• Хайхан Ли
• Лин Ли

Ключевые слова: Пуэрария лобата (Willd.) Ohwi, гликозилтрансфераза, клонирование, экспрессия, Pichia pastoris

Абстрактные

Ключевой фермент биосинтеза пуерарина у Pueraria lobata (Willd.) Ohwi неясен, но может включать гликозилирование. Для исследования регуляции биосинтеза пуерарина, предполагаемого гена UDP-зависимой гликозилтрансферазы (UGT), PlUGT1 был выделен из корня P. lobata , который содержал большое количество пуерарина.PlUGT1 кодирует 480 выведенных аминокислотных остатков с консервативным UDP-связывающим глюкозу доменом, который имеет 61-84% сходства с гомологами из других видов растений. Результаты электрофореза в SDS-полиакриламидном геле и вестерн-блоттинга показали, что гибридный белок мигрировал в виде единой белковой полосы с молекулярной массой 55 кДа. Был сконструирован дрожжевой экспрессионный вектор pPICZA-PlUGT1, который трансформировали в штамм GS115 Pichia pastoris . Несколько рекомбинантов, содержащих мульти-копийные кассеты экспрессии, были получены на планшете с зеоцином-YPD и подтверждены саузерн-дот-блоттингом.Выход PlUGT1 достигал 0,05 г / л, когда рекомбинантные клетки культивировали при pH 5,5, 30 ° C и индуцировали 0,5% метанолом в течение 72 часов. Экспрессия белка PlUGT1 положительно коррелирует с числом копий PlUGT1 в трансформированных дрожжевых клетках. Эти результаты предполагают, что белок PlUGT1 может эффективно экспрессироваться в системе экспрессии P. pastoris и может обеспечивать новый экономичный и удобный способ продукции белка PlUGT1.

Ключевые слова: Pueraria lobata (Willd.) Ohwi, гликозилтрансфераза, клонирование, экспрессия, Pichia pastoris

Авторское право на статьи, опубликованные в этом журнале, сохраняется за журналом.

(PDF) Молекулярное клонирование и функциональная характеристика нового (изо) флавон-4 ‘, 7-O-диглюкозид-глюкозилтрансферазы из Pueraria lobata

fpls-07-00387 28 марта 2016 г. Время: 13: 7 # 10

Wang et al. al.40,7-O-диглюкозид-глюкозилтрансфераза

ССЫЛКИ

Cheynier, V., Comte, G., Davies, K. M., Lattanzio, V., and Martens, S.

(2013). Фенольные соединения растений: последние достижения в области их биосинтеза, генетики и экофизиологии. Plant Physiol. Biochem. 72, 1–20. DOI: 10.1016 / j.plaphy.2013.

05.009

Deavours, B.E., Liu, C.J., Naoumkina, M.A., Tang, Y., Farag, M.A., Sumner,

L. W., et al. (2006). Функциональный анализ членов семейств ферментов изофлавон и изофлавон-О-метилтрансферазы

из модельного бобового растения

Medicago truncatula.Завод Мол. Биол. 62, 715–733. DOI: 10.1007 / s11103-006-

9050-x

Ду, Г., Чжао, Х., Сун, Ю., Чжан, К. и Ван, Ю. (2011). Rapid

одновременное определение изофлавонов в Radix puerariae с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии

— тройной квадрупольной масс-спектрометрии на колонке

нового типа оболочки. J. Sep. Sci. 34, 2576–2585. DOI: 10.1002 / jssc.2011

00295

Фанг, К., Ван, X., Тан, Х. и Цзян, К. (2006a). Идентификация изофлавоноидов

в нескольких образцах кудзу с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с

и тандемной масс-спектрометрией с ионизацией электрораспылением.J. Chromatogr. Sci. 44,

57–63. DOI: 10.1093 / chromsci / 44.2.57

Fang, C., Wan, X., Tan, H., and Jiang, C. (2006b). Разделение и определение

изофлавоноидов в нескольких образцах кудзу с помощью высокоэффективного капиллярного электрофореза

(HPCE). Аня. Чим. 96, 117–124. DOI: 10.1002 / adic.2006

Феррейра, М. Л. Ф., Риус, С. П., и Касати, П. (2012). Флавоноиды: биосинтез,

биологические функции и биотехнологические приложения.Фронт. Plant Sci. 3: 222.

doi: 10.3389 / fpls.2012.00222

Фунаки, А., Ваки, Т., Ногучи, А., Кавай, Ю., Ямасита, С., Такахаши, С., и др.

(2015). Идентификация высокоспецифичной изофлавон-7-O-глюкозилтрансферазы в

сои (Glycine max (L.) Merr.). Physiol растительной клетки. 56, 1512–1520. DOI:

10.1093 / pcp / pcv072

Gachon, C.M., Langlois-Meurinne, M., and Saindrenan, P. (2005). Завод

гликозилтрансферазы вторичного метаболизма: новый функциональный анализ

.Trends Plant Sci. 10, 542–549. DOI: 10.1016 / j.tplants.2005.

09.007

Хансен, С. Ф., Хархольт, Дж., Оикава, А., и Шеллер, Х. В. (2012). Посадите

гликозилтрансфераз за пределами CAZy: взгляд на семейства DUF. Фронт. Завод

Sci. 3:59. DOI: 10.3389 / fpls.2012.00059

He, X. Z., Blount, J. W., Ge, S.J., Tang, Y.H, and Dixon, R.A. (2011). Геномный подход

к биосинтезу изофлавонов у кудзу (Pueraria lobata). Planta 233,

843–855.DOI: 10.1007 / s00425-010-1344-1

Jiang, J. R., Yuan, S., Ding, J. F., Zhu, S. C., Xu, H. D., Chen, T., et al. (2008).

Превращение пуэрарина в его 7-O-гликозидные производные с помощью Microbacterium

oxydans (CGMCC 1788) для улучшения его растворимости в воде и фармакокинетических свойств

. Прил. Microbiol. Biotechnol. 81, 647–657. DOI: 10.1007 / s00253-008-

1683-z

Каяно, С., Мацумура, Ю., Китагава, Ю., Кобаяси, М., Нагаяма, А.,

, Кавабата, Н., и другие. (2012). Изофлавон C-гликозиды изолировали

из корня кудзу (Pueraria lobata) и их эстрогенную активность

. Food Chem. 134, 282–287. DOI: 10.1016 / j.foodchem.2012.

02.137

Кеунг, В. М., Лазо, О., Кунце, Л., и Валле, Б. Л. (1996). Усиление

биодоступности даидзина экстрактом Radix puerariae.

Proc. Natl. Акад. Sci. USA 93, 4284–4288. DOI: 10.1073 / pnas.93.

9,4284

Кинджо, Дж.E., Furusawa, J. I., Baba, J., Takeshita, T., Yamasaki, M., and Nohara, T.

(1987). Исследования составных частей Pueraria lobata. III. Изофлавоноиды и родственные соединения

в корнях и эластичных стеблях. Chem. Pharm. Бык. 35,

4846–4850. DOI: 10.1248 / cpb.35.4846

Ли, Д., Парк, С. Х., Шим, Дж. Х., Ли, Х. С., Тан, С. Ю., Парк, С. С. и др. (2004). В исследовании

vitro ферментативная модификация пуэрарина до гликозидов пуэрарина мальтогенной амилазой

.Углеводы. Res. 339, 2789–2797. DOI: 10.1016 / j.carres.2004.

09.017

Ли, Дж., Ли, З. Б., Ли, К. Ф., Гоу, Дж. Б. и Чжан, Ю. С. (2014). Молекулярное клонирование

и характеристика изофлавон-7-О-глюкозилтрансферазы из

Pueraria lobata.Plant Cell Rep. 33, 1173–1185. DOI: 10.1007 / s00299-014-

1606-7

Модоло, Л. В., Блаунт, Дж. У., Ахнин, Л., Наумкина, М. А., Ван, X. и Диксон,

Р. А. (2007). Функциональный геномный подход к (изо) флавоноидному гликозилированию

в модельной бобовой Medicago truncatula.Завод Мол. Биол. 64, 499–518. DOI:

10.1007 / s11103-007-9167-6

Ohshima, Y., Okuyama, T., Takahashi, K., Takizawa, T., and Shibata, S.

(1988). Выделение и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

изофлавоноидов из корня пуэрарии. Planta Med. 54, 250–254. DOI: 10.1055 / s-

2006-962420

Прасейн, Дж. К., Репперт, А., Джонс, К., Мур, Д. Р., Барнс, С., и Лила, М. А.

(2007). Идентификация изофлавонных гликозидов в культурах Pueraria lobata

методом тандемной масс-спектрометрии.Фитохим. Анальный. 18, 50–59. DOI: 10.1002 /

pca.951

Rong, H., Stevens, J. F., Deinzer, M. L., Cooman, L. D. и

Keukeleire, D. D. (1998). Идентификация изофлавонов в корнях

Pueraria lobata.Planta Med. 64, 620–627. DOI: 10.1055 / s-2006-

957534

Руби, Кумар, Р. Дж. С., Вишвакарма, Р. К., Сингх, С., и Хан, Б. М. (2014).

Молекулярное клонирование и характеристика генистеиновой 40-O-глюкозидной специфической гликозилтрансферазы

из Bacopa monniera.Мол. Биол. Реп. 41, 4675–4688. DOI:

10.1007 / s11033-014-3338-8

Сайто, К., Йонекура-Сакакибара, К., Накабаяси, Р., Хигаси, Ю., Ямазаки, М.,

Тохге, Т. и др. al. (2013). Путь биосинтеза флавоноидов у Arabidopsis:

структурное и генетическое разнообразие. Plant Physiol. Biochem. 72, 21–34. DOI:

10.1016 / j.plaphy.2013.02.001

Шао, Х., Хе, X., Ахин, Л., Блаунт, Дж., Диксон, Р., и Ван, X. (2005).

Кристаллические структуры многофункциональной тритерпен / флавоноидной гликозилтрансферазы

из Medicago truncatula.Растительная клетка 17, 3141–3154. DOI: 10.1105 / TPC.105.

035055

Ши, Дж., Чанг, К., Шен, Л., и Чен, Д. (2006). Химические компоненты из

Pueraria lobata.J. Китайская Фарм. Sci. 15, 248–250.

Сонг, В., Ли, Ю. Дж., Цяо, X., Цянь, Ю., и Е, М. (2014). Химия китайского лекарственного растения

Puerariae Radix (Ge-Gen): обзор. J. Chinese Pharm. Sci. 23,

347–360.

Тан, X. L., Лю, X. J., Tian, ​​Q., и Zhang, W. (2012).Динамический окислительный стресс

и повреждение ДНК, вызванное дефицитом эстрогена и защитными эффектами пуэрарина

и 17 бета-эстрадиола у крыс, подвергшихся овариэктомии. Basic Clin. Pharmacol.

111, 87–91.

Вейтч, Н. К. (2009). Изофлавоноиды бобовых. Nat. Прог. Rep.26, 776–802.

DOI: 10.1039 / b616809b

Фогт Т. и Джонс П. (2000). Гликозилтрансферазы в растительном натуральном продукте

синтез: характеристика супергенного семейства.Trends Plant Sci. 5, 380–386.

DOI: 10.1016 / S1360-1385 (00) 01720-9

Ван, X., Ли, С. Т., Ли, Дж., Ли, К. Ф. и Чжан, Ю. С. (2015). De novo секвенирование транскриптома

в Pueraria lobata для идентификации предполагаемых генов, участвующих в биосинтезе изофлавонов

. Растительная клетка Rep. 34, 733–743. DOI: 10.1007 / s00299-014-

1733-1

Вонг, К. Х., Ли, Г. К., Ли, К. М., Размовски-Наумовски, В., и Чан, К.

(2011). Корень кудзу: традиционные способы применения и потенциальная лекарственная польза от

диабета и сердечно-сосудистых заболеваний.J. Ethnopharmacol. 134, 584–607. doi:

10.1016 / j.jep.2011.02.001

Вонг, К. Х., Размовски-Наумовски, В., Ли, К. М., Ли, Г. К. и

Чан, К. (2015). Сравнение морфологических, химических и анти-

диабетических характеристик Puerariae Lobatae Radix и Puerariae

Thomsonii Radix. J. Ethnopharmacol. 164, 53–63. DOI: 10.1016 / j.jep.2014.

12.050

Сяо, Дж. Б., Музашвили, Т. С., Георгиев, М.