Как сейчас выглядит и чем занимается примерная супруга Латифа из сериала «Клон» — ШоубиZZZ — всё о звёздах — 3 июля — 43705337167

Бразильскую актрису Летисию Сабателлу отечественный зритель помнит, прежде всего, по сериалу “Клон”, где она сыграла роль Латифы Рашид. Ко времени выходу на экраны этого сериала, Летисия у себя на родине давно считалась одной из самых красивых актрис.

Сабателла с юных лет занималась балетом, пела в хоре, занималась в театральном кружке. Именно последнее увлечение девушка решила сделать своей профессией. Мать и отец хотели, чтобы дочь пошла учиться на медицинский, но Летисия выбрала театральный колледж.

Когда ей исполнилось 21 год, Сабателла начала ходить по кастингам. Однако довольно долгое время девушка получала отказы. Через год ей все-таки улыбнулась удача и она получила свою первую роль. Это был телесериал “Властелин мира”, где она сыграла представительницу “древнейшей професии”. Удачно дебютировав в кино, молодая актриса стала получать предложения о съемках. Но на время Летисии пришлось покинуть работу.

Сабателла на съемках “Властелина” познакомилась с коллегой по актерскому цеху Анжело Антонио. Скоро они сыграли свадьбу, а Летисия заберемена. Однако роды начались преждевременно и были очень тяжелыми.

Дочь Клара появилась на свет на четыре месяца раньше срока.

Врачи два года боролись за ее жизнь. Прогнозы были неутешительными. Но, к счастью, малышка выжила. Но вот здоровье самой Летисии было подорвано. Больше родить она уже иметь не могла.

В начале нового тысячелетия актриса приняла участие в “Клоне”. Роль скромной жены и доброй матери Латифы сделала Летисию известной по всему миру. После этого сериала, она снялась еще в трех десятках сериалах и фильмах. В 2009 году Сабателла приняла участие в съемках сериала “Дороги Индии”. Но затем она вновь сделала паузу в карьеру, решив посвятить себя духовным практикам.

В 2003 году Летисия развелась с Анжело. Расставание далось актрисе очень тяжело. Она даже посещала психиатра. Сабателла еще раз выходила замуж. Но и второй брак оказался неудачным.

Сейчас 49-летняя актриса встречается с коллегой Даниэлем Дантасом, а в этом году выходит новая картина с ее участием — «Во времена императора».

Понравилась статья? Подпишитесь на канал, чтобы быть в курсе самых интересных материалов

Подписаться

помнишь Латифу из «Клона»? Посмотри, что с ней случилось спустя десятилетия (ФОТО)

Известная бразильская актриса Летисия Сабателла стала настоящей звездой, когда исполнила в сериале «Клон» роль Латифы. Она стала популярной не только на родине, но и в тех странах, где у зрителей была возможность посмотреть хотя бы фрагмент сериала.

Летисия Сабателла в роли Латифы в сериале Клон

Сейчас Летисии Сабателле исполнилось 48 лет, и она за годы очень изменилась. Многие стали отмечать, что Летисия Сабателла немного поправилась, у нее округлилось лицо, появились отеки. Однако сама актриса никак не стесняется того, что с ней происходит. Вот как она выглядит сейчас:

Девушку изуродовали серной кислотой, но после операции она стала еще красивее (ФОТО)

Популярные статьи сейчас Показать еще

Однако отметим, что Летисия Сабателла осталась такой же обаятельной, как и когда-то в молодости.

Напомним, мы также писали, что Мелике Ипек Ялова — так зовут турецкую актрису, которая сыграла роль Изабеллы Фортуны в сериале «Великолепный век».

21-летняя модель Александра Садовска окрасила белки глаз в черный цвет, но из-за этого ослепла (ФОТО)

По сюжету она была взята в плен и стала любовницей султана, с которой впоследствии боролась Хюррем султан. В один момент она покинула сериал, но ее зрители до сих пор помнят.

У супругов не было фотографий со свадьбы, но правнуки устроили им свадебную фотосессию 60 лет спустя (ФОТО)

Сейчас, спустя около 10 лет актриса продолжает выглядеть ухоженно.

Смотри видео по теме:

Также читай, что еще 50 лет назад люди имели совсем иные представления о красоте. Яркий показатель, это конкурсы красоты. К слову, самый первый такой конкурс прошел в 1955 году в США. С тех пор даже сохранились снимки участниц и одной победительницы. Как оказалось, девушки тех времен имели не такую внешность, какую имеют современные обладательницы корон. «Сейчас таким короны не дают»,

– можно сказать, но тогда мир еще ничего не знал о пластической хирургии, с помощью которой «наводят красоту». Чтобы посмотреть на фотографии королев красоты прошлого тысячелетия, переходи по ссылке.

Больше интересных материалов читай на Clutch.ua

Подписывайтесь на наш YouTube-канал Клатч Онлайн.

Еще редакция Сlutch советует прочитать:

Бренд VOVK 10 лет: подробности

Красивая кожа зимой: ТОП-8 средств для ухода за кожей и волосами в холодное время года

«Как комарик укусил» — почему мы боимся боли и как этого избежать?

Оригинальный подарок для семьи

Удивление гарантировано: ТОП необычных подарков для всей семьи на Новый Год 2022

Укус животных, пережить инфаркт, как спасти себя и ребенка: тайны первой помощи от парамедика

Вторая после Жади.

Рания из «Клона» резко постарела и стала неузнаваемой

В нулевых Нивея Стелманн прославилась чуть ли не на весь мир, сыграв в сериале «Клон» вторую жену Саида, который в свою очередь не любил ее, а был без ума от первой супруги Жади. Сегодня Нивее 47 лет, на ее счету три брака и двое детей — сын Мигель и дочь Бруну.

Нивея Стелманн в роли Рании

На момент съемок в сериале «Клон» Нивее было 27 лет. В то время артистка прекрасно выглядела и пользовалась большой популярностью у мужской аудитории.

Но с годами красота Стелманн, по мнению поклонников, куда-то исчезла. Став мамой, брюнетка набрала лишний вес, у нее поменялось лицо. Сейчас многие попросту не узнают в Нивее ту изящную Ранию.

За плечами исполнительницы роли Рании три брака

Артистка не может похвастаться богатой фильмографией: на ее счету 20 киноработ. Пик популярности Нивеи пришелся на нулевые.

Актриса ведет блог в Instagram, на который сегодня подписано более миллиона человек. В нем брюнетка рассказывает о творчестве и личной жизни.

Несколько лет назад Нивея с семьей переехала в США

Несколько лет назад Стелманн переехала с семьей из родной Бразилии в США.

«Люблю свою семью, но больше детей не хочу. У меня уже есть двое, и я не в том возрасте, чтобы рожать еще. Горжусь тем, чего добилась, и морщинами в том числе. Старение — это неотъемлемая часть жизни, я не скрываю свой возраст и стараюсь как можно лучше за собой ухаживать. Мы живем в Орландо. Чтобы работать в киноиндустрии, нужно было выбирать Лос-Анджелес, потому что здесь делать нечего. У меня есть грин-карта, и я имею право работать в США, кем хочу, необязательно актрисой. Если будут появляться предложения о съемках в коротких бразильских проектах или мини-сериалах — я с радостью их рассмотрю. Но решение о переезде в Америку было не только моим, мы принимали его всей семьей. И я не хочу быть вдали от близких», — рассказывала как-то она.

кто такая Самира и какая она сегодня

У Латиффы в «Клоне» родилась дочь, но Мухаммед не сможет скрыть своего разочарования, так как ждет мальчика.

После предупреждения дяди Али брат Назиры возьмет первенца на руки и назовет ее Самирой, что означает «радость». Узнайте, кто эта девушка и как поживает актриса Стефани Брито сегодня!

Кто дочь Латифы в Клоне?

Самира, которую играет Стефани Брито, является старшей из детей Мохамеда с персонажем Летисии Сабателлы.Его младший брат — Амин (Тиаго де Оливейра), с которым он живет в конфликте из-за того, что он любимец дома и может делать все, что захочет, потому что он мужчина.

Девушка дружит с Сумайей (Каролина Мачейра) и двоюродной сестрой Хадиджи (Карла Диаз), дочерью Джейд (Джованна Антонелли) с Саидом (Далтон Вай). Самира не принимает навязывания своих родителей из-за того, что она женщина, и пытается преодолеть барьеры своей культуры и религии, особенно когда живет в Бразилии со своей семьей, что заставляет ее хотеть быть похожей на любую другую бразильскую девушку.Девушка мечтает быть независимой и борется против правил, которым она должна следовать, таких как ношение чадры.

Во время мыльной оперы «О клон» дочь Латиффы влюбляется в Зе Роберто (Юрий Ксавьер), что, конечно же, вызывает интригу дома. В конце романа, после сильного сопротивления со стороны Мохамеда, Самире разрешается встречаться с мальчиком, который только получает одобрение отца девушки на обращение в ислам.

Семья переживает взлеты и падения из-за обычаев – Фото: репродукция/TV Globo

Как Стефани Брито сегодня?

Сейчас 34-летняя переводчица дочери Латиффы в O Clone находится вдали от маленьких экранов из-за материнства.В 2020 году, когда Донателла жила в Amor sem Igual, мыльной опере Record, которая начала транслироваться в декабре 2019 года, девушка обнаружила, что беременна, и поэтому в некоторых сценах ей пришлось использовать дублера.

Стефани записали до конца теленовеллы и с тех пор больше ни в каких сериалах не снимались. В социальных сетях актриса показывает, что наслаждается моментом со своим сыном Энрико, которому в начале ноября этого года исполнился 1 год.

Актриса замужем за Игорем Рашковским – Фото: Reproduction/Instagram/@sthefanybrito

До «Любовь к Игуалю» и ухода с телевидения Стефани снялась еще в двух постановках «Рекорд» – «Иезавель» (2019) и «О Рико и Ласаро» (2017).На TV Globo, помимо роли дочери Латтифы в O Clone, она снималась в фильмах Flor do Caribe (2013), A Vida da Gente (2011), Macho Man (2011), Desejo Proibido (2007–2008), Carga Pesada (2007). ), Páginas da Vida (2007), Начиная заново (2004–2005), Теперь это то, что они есть (2003) и Ангел упал с небес (2001).

Читайте также — Виктор Кугула сегодня: как Лео из O Clone

поклонников «Эквалайзера» раскритиковали «перезагрузку ПК» знаменитого телесериала с Куин Латифой в главной роли

* CBS готовит возможную перезагрузку телесериала « Уравнитель » с Куин Латифой в главной роли и исполнительным продюсером.

Согласно Variety, новый сериал описывается как переосмысление классического телешоу, в котором Латифа изображает загадочную, но высококвалифицированную фигуру, которая помогает тем, кому больше некуда обратиться.

В оригинальном сериале с участием Эдварда Вудворда главную роль играл Эдвард Вудворд, который транслировался в течение четырех сезонов на канале CBS с 1985 по 1989 год. Затем по нему были сняты два художественных фильма с участием Дензела Вашингтона .

Новость о перезапуске сериала с Латифой уже вызвала недовольство некоторых людей.

«Мне нравилась Латифа как рэпер, но не более того.Вашингтон был хорош в роли МакКолла. Но почему мы должны постоянно во все вмешивать политкорректность. Обещаю, эта серия провалится. Людям, которые помнят оригинальный сериал, он понравился из-за Вудворда. Но старайтесь, как можете», — написал один из комментаторов новостей о кастинге на Deadline. Другой добавил: «Просто прекратите перезагрузку ПК. Пожалуйста!»

ДРУГИЕ НОВОСТИ, КОТОРЫЕ ВЫ МОЖЕТЕ ПРОПУСТИТЬ: Шоураннер сериала «Сила» дразнит судьбу Призрака после финала середины сезона: «Я не видел, как он умер, а вы?»

Куин Латифа (Инстаграм)

Третий написал: «Сейчас как никогда нам нужен Уравнитель, чтобы бороться за Истину и Справедливость для простых людей. Не уверен насчет кастинга (они умны, не пытаются клонировать Эдварда Вудворда, и им лучше не называть главного героя Робертой Маколл), но то, найдет ли шоу отклик у зрителей, вероятно, будет зависеть от сценария… современные вопросы и проблемы, чтобы создавать истории вокруг. Я занимаю выжидательную позицию, но я скрестил пальцы».

И еще один критик сказал: «Нет! Просто нет. Ничего против королевы. Но этот ленивый переход от мужчины к женщине в эпоху отмены культуры, которую человек ненавидит #я тоже, должен прекратиться.Это все портит. убил терминатора и убил звездных войн. Теперь ты убиваешь Дензела?!?!?! Как ты смеешь!!!!»

Кажется, что многие люди просто не в восторге от чрезмерно усердной голливудской кампании PC Agents/разнообразия.

«Поэтому сменить персонажа на чернокожего на пару фильмов было недостаточно. Теперь персонаж тоже превратился в чернокожую женщину. Хм. Я бы просто подумал, что они сразу перешли к превращению персонажа в транс. Они сейчас в моде. Может быть, в следующем сезоне…», — отреагировал один из онлайн-читателей на новость о перезапуске сериала.

Как вы относитесь к тому, что Куин Латифа взяла на себя роль «Уравнителя»? Отключите звук в комментариях ниже.

%PDF-1.4 % 76 0 объект > эндообъект 72 0 объект > эндообъект 144 0 объект >поток 2002-01-25T23:44:36Z2022-02-17T20:28:30-08:002022-02-17T20:28:30-08:00Acrobat Distiller 4.05 для Windowsuuid:685d3417-1dd2-11b2-0a00-6e0827edca05uuid4:6b-0827edca00uu34:6b-1827edca00uuid4 1dd2-11b2-0a00-380000000000заявка/pdf конечный поток эндообъект 70 0 объект > эндообъект 145 0 объект > эндообъект 146 0 объект > эндообъект 17 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text/ImageC]/XObject>>>/Повернуть 0/Тип/Страница>> эндообъект 21 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text]>>/Rotate 0/Type/Page>> эндообъект 24 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text]>>/Rotate 0/Type/Page>> эндообъект 27 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text]>>/Rotate 0/Type/Page>> эндообъект 30 0 объект >/ExtGState>/Font>/ProcSet[/PDF/Text]>>/Rotate 0/Type/Page>

> эндообъект 147 0 объект >/ProcSet[/PDF/Text/ImageC]/XObject>>>/Type/Page>> эндообъект 164 0 объект [170 0 R 171 0 R 172 0 R 173 0 R 174 0 R 175 0 R] эндообъект 165 0 объект >поток д 300 0 0 75 164 679 см /Im0 Делать Вопрос БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 324. 90976 565,99979 Тм ( )Tj 0 0 1 рг -8,39499 0 тд (10.1101/гр.224202)Тж 0 г -16,89599 0 тд (Доступ к самой последней версии на doi:)Tj 6,447 1 тд (2002 12: 222-231) Тдж /T1_1 1 тс -6,447 0 Тд (Геном Res.\240)Tj /T1_0 1 тс 0 1.00001 ТД (\240 )Tj 0 1 ТД (Бернар Гризар, Воутер Коппитерс, Фр\351д\351рик Фарнир и др.) Т* (\240 )Tj /T1_2 1 тс 15 0 0 15 72 615,99994 Тм (Влияние на надои и состав молока)Tj 21.50388 1 тд (Джин с мажором) Tj /T1_3 1 тс -3,38899 0 тд (DGAT1)Tj /T1_2 1 тс -18.11489 0 Тд (о мутации Missense у крупного рогатого скота) Tj Т* (Позиционное клонирование QTL-кандидата у молочного скота: идентификация) Tj ET 72 554 м 556 554 л 0 0 м С БТ ET БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 156.942 522,99997 тм (\240 )Tj /T1_2 1 тс -5,11299 1 тд (Ссылки)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 177 514,99994 Тм (\240 )Tj 28.11684 1 тд ( )Tj 0 0 1 рг /T1_2 1 тс -28,11684 0 Тд (http://genome.cshLP.org/content/12/2/222.full.html#ref-list-1)Tj 0 г /T1_0 1 тс 0 1.00001 ТД (В этой статье цитируется 24 статьи, 5 из которых доступны бесплатно по адресу:)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 164,94208 488,99997 Тм (\240 )Tj /T1_2 1 тс -3,44598 1 тд (Лицензия)Tj ET БТ /T1_2 1 тс 11 0 0 11 120,86185 458,99997 Тм (Сервис)Tj -3. 16599 1 тд (оповещение по электронной почте)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 177 450,99994 Тм (\240 )Tj 19.06496 1 тд ( )Tj 0 0 1 рг /T1_2 1 тс -4,892 0 Тд (нажмите здесь.)Tj 0 г /T1_0 1 тс -14.17296 0 Тд (правый верхний угол статьи или )Tj Т* (Получайте бесплатные оповещения по электронной почте, когда новые статьи цитируют эту статью — зарегистрируйтесь \ в коробке на)Tj ET 72 438 м 556 438 л 0 0 м С БТ ET 72 121 м 556 121 л 0 0 м С БТ ET БТ /T1_2 1 тс 10 0 0 10 259,80881 85,99997 Тм ( )Tj 0 0 1 рг -18,78088 0 тд (https://genome.cshLP.org/subscriptions)Tj 0 г /T1_0 1 тс 9 0 0 9 214.05565 96 тм (перейти к: )Tj /T1_1 1 тс -8,66998 0 тд (Исследование генома) Tj /T1_0 1 тс -7,11398 0 Тд (Чтобы подписаться на )Tj ET 72 70 м 556 70 л 0 0 м С БТ ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 74 44 Тм (Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор) Tj ET БТ /T1_0 1 тс 8 0 0 8 502,97162 779 Тм ( )Tj 0 0 1 рг -16,44997 0 тд (Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор) Tj 0 г -16,73097 0 Тд ( 17 февраля 2022 г. — Опубликовано )Tj 0 0 1 рг -7,94798 0 тд (genome. dhsad:n0IpT{7 [-?

%PDF-1.6 % 4 0 объект > эндообъект 114 0 объект >поток 2002-11-15T13:22:43+01:002011-10-13T09:21:34-05:002011-10-13T09:21:34-05:00Acrobat Distiller 4.05 для Windowsapplication/pdfuuid:8477a468-c323-4773- ae44-7caffc013be0uuid:7b5db287-81c4-44e2-b833-819f5fc74446 конечный поток эндообъект 115 0 объект > эндообъект 1 0 объект > эндообъект 116 0 объект [126 0 Р] эндообъект 126 0 объект >>> эндообъект 127 0 объект > эндообъект 128 0 объект > эндообъект 129 0 объект >поток HW͒8S4Emي(Q7I:JRvgAfl+ɝxc2o

Действительно ли «двойник» Удая Хусейна просто самозванец? | The Independent

Говорят, что некоторые истории слишком хороши, чтобы быть правдой, хотя это никогда не останавливало Голливуд. «Двойник дьявола» — последний блокбастер, выходящий за рамки фразы «основан на реальных событиях». Но кого это волнует, если в нем рассказывается кровавая история об одном из самых жестоких психопатов конца 20-го века?

Вышедший на экраны в конце этого месяца фильм рассказывает душераздирающую автобиографию Латифа Яхии, предполагаемого двойника старшего сына Саддама Хусейна, страдающего психозом, Удая.

Британский актер Доминик Купер играет обе роли и получил признание критиков за роль человека, который насиловал и убивал, пробиваясь через высшее общество Багдада, а также роль бедолаги, которому пришлось притворяться таким маньяком, чтобы защитить его от пуль любого потенциального убийцы.Однако в последние годы все большее число приближенных Удая ставит под сомнение возможность реализации этой истории.

С поразительно похожим лицом на Удая, который был застрелен американским спецназом вместе со своим братом Кусаем в июле 2003 года, г-н Яхья впервые появился в Европе в начале 1990-х годов с замечательным заявлением, которое вызвало заголовки во всем мире.

Он сказал агентам разведки, что прожил жизнь раба как телесный двойник Удая – и отвернулся от своего хозяина, когда Удай пытался убить его, потому что его девушка стала слишком кокетливой.Мемуары и мировая слава быстро последовали.

Нет никаких сомнений в том, что история, рассказанная мистером Яхиа, идеально подходит для киноэкрана. Согласно его книге, блогу и интервью в СМИ, он родился в богатой семье, тесно связанной с баасистским режимом Саддама. Член багдадской элиты, он ходил в ту же школу, что и Удай, где друзья отмечали, насколько внешне он похож на младшего сына иракского диктатора-садиста.

В сентябре 1987 года во время ирано-иракской войны его отозвали с передовой и велели отправиться в Багдадский дворец Саддама, сказал он.

«Когда я вошел в комнату, на лице моего начальника было отчетливо выражено беспокойство», — позже писал г-н Яхья. «Меня отвезли с фронта на встречу, пока я ждал, мой разум метался, задавая вопросы, никогда в моих самых смелых мечтах мне не приходило в голову истинная причина моего вызова».

Удай решил сделать себе двойника. Когда г-н Яхья вежливо отказался, его посадили в тюрьму на неделю и пытали. После освобождения ему сказали, что, если он не согласится стать двойником Удая, его семья будет убита, а его сестры изнасилованы.

После нескольких пластических операций трансформация была завершена. Г-н Яхья сказал, что в период с 1987 по 1991 год он был свидетелем некоторых из худших эксцессов Удая — его ночных скитаний по Багдаду в поисках женщин для изнасилования, его злоупотребления наркотиками, вспышек насилия и склонности к пыткам. Он также утверждает, что пережил 12 покушений.

Мистер Яхья задумался о побеге только после того, как Удай, разгневанный тем, что девушка начала открыто флиртовать с двойником, попытался застрелить его.Г-н Яхья утверждает, что бежал к курдским повстанцам в северном Ираке, а затем в Австрию с помощью ЦРУ.

Тем не менее, некоторые из тех, кто в то время был в ближайшем окружении Удая, высмеивают утверждения г-на Яхии. Хайтам Аджмайя, 48-летний иракский эмигрант, живущий в Лондоне, — один из них. Он дезертировал из Ирака в 1998 году с помощью британского правительства в обмен на информацию о ближайшем окружении Удая, в котором он служил более десяти лет. «Латиф, возможно, выглядел как Удай и говорил, как он, но он никогда не был двойником Удая», — сказал он вчера The Independent.«Это настоящий позор, что Голливуд решил снять фильм, основанный на чепухе, а не фильм, правдивый по истории Ирака».

Г-н Аджмая утверждает, что самое большее, г-н Яхия был кем-то, кто использовал свое близкое сходство с Удаем для получения денег и девушек в Ираке, и фактически был арестован полицией именно за это. В январе Эд Цезарь из «Санди Таймс» разыскал еще трех членов ближайшего окружения Удая, которые поставили под сомнение заявление г-на Яхии, а также пластического хирурга Саддама, который сказал, что двойникам не делали никаких операций.

Мой Яхья вчера не ответил на запросы The Independent о комментариях, но когда ранее в этом году ему рассказали о высказываниях бывших друзей Удая, он сказал: «Я был двойником Удая. У Удая не было друзей; у него были сутенеры, торговцы наркотиками. , вешалки и т. д. Либо я экстрасенс, чтобы знать о дворцах, бункерах и прочих местах… либо я действительно был там. Я знаю правду».

Тоби Додж, историк Лондонского университета королевы Марии, который специализируется на современном Ираке и брал интервью у членов режима Саддама, говорит, что отделить факты от вымысла в баасистском Ираке, как известно, сложно.«Режим всегда был окутан мифологией, — сказал он вчера.

Между тем, Ли Тамахори, родившийся в Новой Зеландии режиссер фильма «Двойник дьявола», по-прежнему не обращает внимания на обвинения. «Биопики — не мои любимые фильмы, потому что они всегда слишком близко подходят к фактам», — пишет он. «Но правда не делает вас свободным в кино. Правда, наложенная на вымысел, делает вас свободными».

Шпион, организовавший побег принцессы Латифы, раскрывает ее отчаянный крик

Ствол пистолета, воткнутый в лицо Эрве Жобера, прозвучал со строгой инструкцией: «Закрой глаза и держи их закрытыми!» Это был момент, когда шкипер яхты осознал свою тайное путешествие длиной в 1300 миль, чтобы вырваться из лап тирана, закончилось. За несколько миль до места назначения Жобер услышал взрывы светошумовых гранат, когда коммандос столпились над его лодкой. Через несколько минут его драгоценный человеческий груз, спрятавшийся в ванной под палубой, был изъят.

И все же это был не арест наркотиков и не операция по борьбе с пиратством, а жестокая демонстрация того, на что пойдет Шейх Мохаммед бин Рашид Аль Мактум, правитель Дубая и один из самых богатых людей мира, чтобы сокрушить жизнь своей дочери. мечтаю сбежать из ее золотой клетки.

Принцесса Латифа бинт Мохаммед Аль Мактум — одна из 30 детей, рожденных шейхом, другом королевы.Сейчас 34-летняя Латифа инсценировала свой дерзкий побег почти два года назад с помощью г-на Жобера, бывшего французского военно-морского капитана и бывшего шпиона, используя потайное отделение в машине, лодку и гидроциклы.

Сегодня он впервые раскрывает детали операции, задуманной за семь лет и спланированной с военной точностью, но закончившейся неудачей в Аравийском море. Навязчивый последний крик, который Жобер услышал от Латифы, когда ее тащили прочь, был: «Стреляйте в меня здесь, не отправляйте меня домой!» Латифа в 2018 году, а ее старшая сестра Шамса — с Кембриджской улицы — в 2000 году.

На фото: Впервые дерзкий план побега Эрве Жобера из морей вокруг Объединенных Арабских Эмиратов Органы власти ОАЭ по расследованию мошенничества и растраты

Для внешнего мира у Латифы было все, что можно было купить за деньги, но на самом деле она была заключенной после попытки побега в 2002 году. 62-летний Жобер был дома во Флориде в 2011 году, когда он впервые письмо от Латифы, который несколькими годами ранее читал красочный отчет о своем побеге из Дубая после конфликта с королевской семьей из-за проекта подводной лодки.

Обвиненный в растрате, он скрылся, переодевшись в бурку поверх акваланга, а затем глухой ночью поплыл к лодке перед отплытием в Индию.

Первоначально подозревая, что электронное письмо Латифы было уловкой, чтобы заманить его обратно в Дубай, г-н Жобер в конце концов убедился, что отчаянные мольбы были искренними. Пара начала общаться через Skype и SIM-карты, за которыми правительство ОАЭ не могло следить».

Он решил помочь, узнав о ее первом неудачном побеге и лечении, назначенном Шамсе после ее приступа в Великобритании.

«Я не мог понять, как отец может жестоко обращаться с собственными детьми или мучить их, — говорит г-н Жобер.

Его по-прежнему преследует неудача в спасении Латифы, но его воодушевляет решение суда, которое, как он надеется, «имеет последствия не только в Дубае, но и на всем Ближнем Востоке». Убедившись в подлинности Латифы, пара начала обсуждать варианты, и примерно за год до побега он начал готовить Латифу к операции через друга, финскую подругу принцессы по прыжкам с парашютом и инструктора по боевым искусствам Тиину Яухиайнен.

На снимке: американская яхта Nostromo, незаконно захваченная у берегов Индии. В последовавшем за этим шуме группы по защите прав человека обвинили г-жу Робинсон в том, что она является «добровольной пешкой в ​​пиар-битве между правящей семьей Объединенных Арабских Эмиратов и миром». так же, как я сбежал, используя снаряжение для подводного плавания, но как только они с Тииной начали тренироваться в бассейне, мы поняли, что у Латифы проблемы с дыханием под водой, и нам пришлось отказаться от этого.

Тиина сообщила Высокому суду, что Латифа заплатила мистеру Жоберу около 300 000 фунтов стерлингов. Он говорит, что это должно было покрыть его расходы, такие как поставка внедорожника Audi Q7, специально модифицированного в Омане, чтобы иметь потайное отделение в багажнике.

Г-н Жобер пришвартовал свой кеч под американским флагом «Ностромо» у берегов Омана и, изучив сводки погоды, решил, что побег начнется 24 февраля 2018 года. кафе. Выбросив свои телефоны, они перебрались в Оман, зная, что прозвенит сигнал тревоги, когда она пропустит комендантский час в 22:00.

Селфи, сделанные Латифой после прибытия в Оман, показывают ее радость, но Тиина знала, что дерзкая борьба за свободу только началась.

Убедившись, что Латифа (слева) настоящая, пара начала обсуждать варианты, и примерно за год до побега он начал тренировать Латифу для операции через друга, финского приятеля принцессы по прыжкам с парашютом и инструктора по боевым искусствам, Тиина Яухиайнен (справа)

Из Омана им предстояло пятичасовое путешествие на лодке до Ностромо, но погода ухудшилась, и на полпути 27-мильного пути г-н Жобер и его коллега отправились на гидроциклах с лодки в встретить шлюпку. С женщинами, едущими на заднем сиденье, их швыряло 6-футовыми волнами, когда они возвращались на яхту в течение двух часов.

На неделю они плыли в Индию. Расслабляясь, Латифа отправила матери и близким братьям и сестрам прощальные сообщения, используя защищенную спутниковую систему яхты. Но через пять дней, когда «Ностромо» направился в сторону Гоа, Жобер узнал о присутствии поблизости как минимум трех кораблей береговой охраны Индии, фрегата ВМС ОАЭ и двух вертолетов, но сохранял спокойствие.

«Даже если бы они взяли нас на абордаж, я думал, что смогу объяснить ситуацию и позволить им поговорить с Латифой, и проблем не будет», — сказал он.Тем не менее, он и Латифа связались с Радхой Стерлинг, адвокатом и основателем правозащитной группы «Задержанные в Дубае», и попросили ее выпустить видео, которое Латифа тайно записала о ней и тяжелом положении Шамсы, если что-то пойдет не так, что оно и сделало в 23:00. 4 марта, когда нанесли удар отряды десантников.

Шейх Мохаммед бин Рашид Аль Мактум и королева Елизавета II принимают участие в гонках на выносливость в Королевском Виндзорском забеге в третий день Королевского Виндзорского конного шоу в Большом Виндзорском парке 16 мая 2014 года в Виндзоре, Англия.

Оглушены светошумовыми гранатами и кабина, наполненная слезоточивым газом, Латифа и Тиина жались друг к другу в ванной, в то время как принцесса лихорадочно писала Стирлинг в Испанию.В одном из сообщений она написала: «Пожалуйста, помогите. Пожалуйста, пожалуйста, снаружи мужчины».

В суде Тийна сказала: «Последние слова Латифы, которые я услышала, когда ее с криками и ногами тащили прочь, были: «Вы не можете вернуть меня живой. Не возвращай меня. Стреляй в меня здесь, не бери меня обратно». Мистер Жобер и его команда были избиты, а Латифу доставили на вертолете, а затем на частном самолете в Дубай.

Мистер Жобер был уверен, что умрет. «Я сказал одному из своих похитителей: «Почему бы тебе просто не застрелить меня сейчас?» но он сказал мне, что я буду медленно умирать под пытками, как только мы вернемся в Дубай.’

Вместо этого его отпустили через неделю. Латифе не повезло, она исчезла из поля зрения публики. После попытки спасения ее видели всего один раз, когда в 2018 году она сфотографировалась с бывшим президентом Ирландии Мэри Робинсон, что участники кампании назвали пиар-ходом.

 

Понижение уровня семафорина 3E способствует возникновению признаков экспериментальной хронической аллергической астмы

ВВЕДЕНИЕ

Астма является одним из наиболее распространенных хронических заболеваний, которым страдают около 300 миллионов человек во всем мире.Несмотря на значительные успехи в лечении астмы, оптимальный контроль над заболеванием остается недостижимым, особенно среди тех, кто принимает ингаляционные кортикостероиды и страдает хроническими симптомами [1]. Основные воздействия на качество жизни и экономическое бремя требуют лучшего понимания детерминант неконтролируемой астмы [2, 3]. Хроническая аллергическая астма характеризуется персистирующим воспалением дыхательных путей, гиперреактивностью (ГГР) и структурными изменениями в легких, известными как ремоделирование дыхательных путей [4, 5].AHR представляет собой преувеличенное сужение дыхательных путей, вызванное неспецифическими раздражителями или агонистами, связанное с повышенной инфильтрацией легких воспалительными клетками [6]. Стойкая AHR у пациентов, рефрактерных к стероидной терапии, связана с ограничением воздушного потока или ремоделированием дыхательных путей, что приводит к изменению механических свойств [7]. Точные механизмы, лежащие в основе патологических особенностей хронической астмы, еще далеки от разрешения.

Сенсибилизация к аэроаллергенам в помещении, возникающая при хроническом воздействии, является важным фактором, определяющим контроль над астмой.Хроническое столкновение с клещом домашней пыли (HDM), как распространенным бытовым аллергеном, вызывает раннее поражение дыхательных путей в детском возрасте, что приводит к необратимому разрушению дыхательных путей посредством ремоделирования бронхов [8, 9]. Существующие методы лечения астмы не могут эффективно уменьшить ремоделирование бронхов и воспаление, особенно у неконтролируемых тяжелых астматиков.

Семафорины представляют собой направляющие сигналы, повсеместно экспрессируемые в различных органах и играющие разнообразные регуляторные роли в различных клеточных функциях. Например, ранее мы рассматривали ингибирующее действие семафорина 3E (Sema3E) на гладкую мускулатуру дыхательных путей человека (ASM) в дыхательных путях пациентов с тяжелой астмой, пролиферацию и миграцию клеток как характерную черту ремоделирования дыхательных путей [10].Кроме того, недавно мы продемонстрировали значительное снижение экспрессии Sema3E в дыхательных путях пациентов с тяжелой астмой [11]. Наши недавние исследования на острой модели заболевания показывают, что Sema3E может играть существенную роль при аллергической астме, регулируя функцию нейтрофилов и дендритных клеток [12-14]. Тем не менее, потенциальный вклад Sema3E в хронические проявления астмы еще предстоит изучить. В этом исследовании мы выдвинули гипотезу, что Sema3E негативно регулирует хронические проявления аллергической астмы, вызванной последовательным воздействием HDM.Кроме того, мы стремимся оценить трансляционное значение лечения Sema3E как в терапевтическом, так и в профилактическом контексте.

Мы обнаружили, что хроническое воздействие HDM подавляет экспрессию Sema3E в дыхательных путях мышей. У мышей с дефицитом Sema3E развивалось спонтанное увеличение AHR, воспаление, отложение коллагена и избыточное выделение слизи. Интраназальное введение экзогенного Sema3E облегчало хронические проявления аллергической астмы и восстанавливало гомеостаз дыхательных путей за счет регуляции медиаторов, участвующих в патологии астмы.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Экспрессия Sema3E подавляется в дыхательных путях при хроническом воздействии HDM на мышей

Ранее мы сообщали о снижении поверхностной экспрессии рецептора Sema3E, PlexinD1, на клетках ASM человека у пациентов с астмой [10]. Однако экспрессия Sema3E не исследовалась у мышей, подвергающихся хроническому воздействию HDM. Мы исследовали экспрессию Sema3E в срезах легочной ткани, полученных от мышей, подвергшихся хроническому интраназальному режиму HDM или физиологического раствора, как показано на рисунке 1A.Выполняя иммуногистохимию, мы обнаружили, что Sema3E сильно экспрессируется на бронхиальных эпителиальных клетках мышей, получавших нормальный физиологический раствор (рис. 1В). Интересно, что хроническая интраназальная сенсибилизация и введение HDM в течение семи недель вызывали заметное снижение иммунореактивности Sema3E в эпителиальном слое и миофибробластах (рис. 1C). Это подавление Sema3E сопровождалось увеличением массы ASM, о чем свидетельствует избыточная экспрессия альфа-актина гладких мышц (α-SMA) и рекрутирование воспалительных лейкоцитов в дыхательные пути (рис. 1C).

Рисунок 1: Экспрессия Sema3E подавляется при хроническом воздействии HDM. Хроническая модель аллергической астмы была установлена ​​путем интраназального введения HDM в течение 7 недель (A) . Иммунореактивность мыши Sema3E исследовали, выполняя срезы легочной ткани, полученные нормальные (В) и хронические астматические (С) мышей. Экспрессию Sema3E визуализировали после инкубации срезов ткани со специфическими антителами против Sema3E, проявления Fast-red и контрастного окрашивания при 100-кратном (верхние панели) и 400-кратном (нижние панели) увеличении. Окрашивание α-SMA также проводили на срезах тканей, полученных от тех же мышей (B-C). (n=4 мыши на группу).

Дефицит Sema3E увеличивает AHR при хроническом воздействии HDM

Поскольку AHR является отличительной чертой клинического проявления аллергической астмы [15], мы сначала оценили влияние делеции гена Sema3E на базальную и HDM-индуцированную AHR путем изучения параметров функции легких. Sema3e ^-/- и мышам WT была проведена анестезия, а затем трахеотомия с последующей интратрахеальной инстилляцией возрастающих концентраций метахолина. Sema3e ^-/- мышей имели несколько более высокое сопротивление дыхательных путей (рис. 2A), сопротивление тканей (рис. 2B) и эластичность тканей (рис. 2C) на исходном уровне. Параметры AHR были значительно повышены у мышей Sema3e ^-/- по сравнению с однопометниками дикого типа при хронической сенсибилизации HDM и контрольном заражении (рис. 2D-2F). Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что Sema3E участвует в регуляции HDM-индуцированного AHR.

Рисунок 2: У мышей с дефицитом Sema3E наблюдается усиление AHR при хроническом воздействии HDM. Sema3e ^-/- мышей или однопометников WT, подвергшихся воздействию HDM в течение 7 недель, подвергались трахеотомии, сопровождаемой введением метахолина для измерения параметров AHR, включая сопротивление дыхательных путей (A и D) , сопротивление тканей (B и E ) и эластичность тканей (C и F) . Данные представляют собой два независимых эксперимента на мышах одинакового возраста и пола. (n = 5-6 на группу, ^* P<0,05 , ^** P<0.01 . и ^*** P<0,001 ).

Перепроизводство слизи и отложение коллагена усугубляются у мышей с дефицитом Sema3E

Мы исследовали влияние дефицита Sema3E на структурные изменения в дыхательных путях. Чтобы определить, играет ли Sema3E роль в развитии ремоделирования дыхательных путей, мы сначала оценили перибронхиальный фиброз, характеризующийся отложением коллагена [16], у мышей Sema3e ^-/- , подвергшихся воздействию HDM или физиологического раствора, по сравнению с мышами WT. Окрашивание Sirius red на срезах легочной ткани показало, что воздействие HDM усиливало отложение коллагена у мышей Sema3e ^-/- в большей степени, чем у мышей WT (рис. 3A). Кроме того, ранее было показано, что обструкция дыхательных путей при хронической астме частично опосредована закупоркой слизью, при которой слизь избыточно вырабатывается бокаловидными клетками [17, 18]. Поэтому мы оценили уровень муцина с помощью окрашивания PAS на срезах легочной ткани, полученных от мышей Sema3e ^-/- и WT.Положительное окрашивание муцина с помощью PAS значительно увеличивалось при хроническом воздействии HDM на эпителий дыхательных путей мышей Sema3e ^-/- по сравнению с однопометниками дикого типа (рис. 3B). Повышенное отложение коллагена и гиперпродукция слизи у мышей Sema3e ^-/- были дополнительно подтверждены на уровне мРНК путем проведения количественной ПЦР для изучения экспрессии Col3 и Muc5ac соответственно (рис. 3C-3D). В целом дефицит Sema3E увеличивает отложение коллагена и метаплазию бокаловидных клеток как характерные признаки ремоделирования дыхательных путей.

Рис. 3: Отложение коллагена и избыточная продукция слизи повышены у мышей с дефицитом Sema3E. Срезы легочной ткани мышей Sema3e ^-/- и WT, подвергшихся воздействию солевого раствора или HDM, окрашивали красителем Sirius red (A) и PAS (B) для определения отложения коллагена и гиперсекреции слизи, соответственно (шкала шкалы). : 100 мкм). Экспрессия генов ремоделирования, Col3 (C) и Muc5ac (D) , в легких мышей Sema3e ^-/- и мышей WT в исходном состоянии или после заражения HDM изучали с помощью количественного реального — время ПЦР с использованием специфических праймеров (n= 5-6 на группу, ^* P<0.05 и ^** P<0,01 ).

Дефицит Sema3E усиливает хроническое аллергическое воспаление дыхательных путей

Мы оценили роль Sema3E в привлечении воспалительных клеток в дыхательные пути путем анализа цитоспинов, полученных из жидкости БАЛ. Общее количество воспалительных клеток и количество эозинофилов и нейтрофилов было значительно выше в жидкости БАЛ от Sema3e ^-/- мышей, чем у однопометников WT на исходном уровне (рис. 4A-4B).Воздействие HDM вызывало эозинофильное воспаление, которое было более выраженным в отсутствие Sema3E (рис. 4C-4D). Окрашенные гематоксилином и эозином срезы легких дополнительно продемонстрировали заметное увеличение величины перибронхиальных воспалительных инфильтратов у мышей Sema3e ^-/- по сравнению с контрольной группой дикого типа (рис. 4Е).

Рисунок 4: Базальное и HDM-индуцированное хроническое воспаление дыхательных путей увеличивается у мышей с дефицитом Sema3E. Общий и дифференциальный подсчет клеток проводили в жидкости БАЛ либо у мышей Sema3e ^-/- , либо у мышей дикого типа после воздействия физиологического раствора (AB) или HDM (C-D) .Воспаление дыхательных путей изучали путем проведения H&E на срезах легочной ткани (E) . Уровни IL-4, IL-5, IL-17A и IFN-γ в дыхательных путях измеряли при интраназальном воздействии HDM или физиологического раствора с помощью ELISA в жидкости БАЛ, полученной от Sema3e ^–/– или мышей WT (F) . Уровень общего и HDM-специфического IgE и IgG1 в сыворотке мышей, подвергшихся воздействию физиологического раствора или HDM sema3-e- и WT, определяли с помощью ELISA (G) . E: эозинофилы, N: нейтрофилы, M: макрофаги, L: лимфоциты.(Шкала баров: 100 мкм, n = 5-6 на группу, ^* P<0,05 , ^** P<0,01 и ^*** P<0,001 ).

Мы также оценили уровень цитокинов, участвующих в патогенезе аллергической астмы, в ЖБАЛ мышей WT и Sema3e ^-/- . Концентрация цитокинов Th3 (IL-4 и IL-5) и Th27 (IL-17A) была значительно увеличена в ЖБАЛ у мышей Sema3e ^-/- , подвергшихся воздействию HDM, по сравнению с контрольной группой дикого типа (рис. 4F).Напротив, воздействие HDM значительно снижало уровень цитокина Th2, IFN-γ, в отсутствие Sema3E (рис. 4F). Увеличение Th3/Th27-асимметричного цитокинового ответа у мышей Sema3e ^-/- после хронического воздействия HDM было дополнительно подтверждено внутриклеточным окрашиванием IL-4, IL-17A и IFN-γ в CD4 ⁺ Т-клетках из дренирование легких MLN (дополнительный рисунок 1). Учитывая важность IgE и IgG1 при аллергической астме [19, 20], мы измерили уровни общих и HDM-специфических форм этих антител в сыворотке, полученной от мышей Sema3e ^-/- и WT.Как показано на рисунке 4G, генетическая делеция Sema3E повышала общий уровень IgE у наивных; но не у мышей, подвергшихся воздействию HDM. Однако уровень HDM-специфического IgE был повышен как у мышей Sema3e ^-/- , подвергшихся воздействию физиологического раствора, так и у мышей, подвергшихся воздействию HDM, по сравнению с однопометниками дикого типа. Общий или специфичный для HDM уровень IgG1 существенно не отличался между Sema3e ^-/- и мышами дикого типа ни на исходном уровне, ни после хронического заражения HDM. Таким образом, делеция Sema3E усиливает воспалительный клеточный инфильтрат дыхательных путей, индуцирует Th3/Th27-отклоненный ответ и увеличивает синтез IgE.

Рисунок 5: Интраназальное введение экзогенного Sema3E предотвращает развитие хронического воспаления, вызванного HDM. Интраназальное введение Sema3E предотвращает вызванное HDM сопротивление дыхательных путей (A) . Sema3E также снижал рекрутирование всех воспалительных клеток (B) , особенно эозинофилов (C) . Ингибирующий эффект лечения Sema3E на воспаление легких и гиперсекрецию слизи был устранен путем окрашивания H&E и PAS соответственно (D) .Индуцированная HDM секреция IL-4, IL-5 и IL-17A в дыхательные пути значительно прекращалась при введении Sema3E (E) . (n=4, ^* P<0,05 , ^** P<0,01 и ^*** P<0,001) .

Интраназальное введение Sema3E ингибирует AHR, ремоделирование и воспаление дыхательных путей

Чтобы устранить потенциальный защитный эффект Sema3E при хронических аллергических заболеваниях дыхательных путей, мы вводили экзогенный рекомбинантный Sema3E за 1 час до каждого воздействия HDM. Затем измеряли параметры функции легких в ответ на увеличение дозы распыляемого метахолина. Индуцированное HDM сопротивление проводящих дыхательных путей (рис. 5A), сопротивление тканей и эластичность тканей (дополнительные рисунки 2A-2B) были значительно снижены у мышей, получавших интраназально Sema3E до воздействия HDM.

Введение рекомбинантного Sema3E значительно снижало уровень общих воспалительных клеток (рис. 5B) и эозинофилов (рис. 5C), вызванных HDM в дыхательных путях. Не было значительного влияния Sema3E на вызванное HDM рекрутирование нейтрофилов, лимфоцитов или макрофагов (рис. 5C).Окрашивание H&E также показало, что лечение Sema3E ингибирует индуцированное HDM периваскулярное и перибронхиальное накопление воспалительных клеток в легких (рис. 5D). Цитокиновый ответ Th3 / Th27 (рис. 5E), а также общие и специфичные для HDM формы синтеза IgE (дополнительные рисунки 3A-3B) и IgG1 (дополнительные рисунки 3C-3D), индуцированные хроническим воздействием HDM, были отменены при лечении Sema3E. Однако Sema3E существенно не изменил уровни IFN-γ (рис. 5E). Кроме того, лечение Sema3E предотвращало гиперпродукцию слизи, вызванную HDM (рис. 5D).

Лечение Sema3E после хронического заражения HDM обращает вспять AHR, ремоделирование и воспаление дыхательных путей

Мы создали модель хронической астмы путем интраназального воздействия HDM в течение 5 недель подряд, а затем лечили мышей либо Sema3E, либо физиологическим раствором в течение еще 2 недель, а затем повторно вводили HDM в течение одной недели (рис. 6А). Этот протокол позволит нам оценить, является ли терапевтический эффект Sema3E длительным. Наши измерения результатов показали, что интраназальное лечение мышей с хронической астмой рекомбинантным Sema3E защищает их от развития чрезмерного сопротивления дыхательных путей (рис. 6B), сопротивления тканей (дополнительный рисунок 4A) и эластичности тканей (дополнительный рисунок 4B).Общее количество воспалительных клеток дыхательных путей (рис. 6C), а также эозинофилов и нейтрофилов (рис. 6D) значительно уменьшилось в группе, получавшей Sema3E. Терапевтический эффект Sema3E при повторном воздействии HDM был связан со снижением воспаления дыхательных путей Th3/Th27 (рис. 6E-6F) и уровня муцина (рис. 6E). Наконец, Sema3E снижал уровни как общего, так и HDM-специфического IgE (дополнительная фигура 5A-5B) и общего IgG1 (дополнительная фигура 5C); в то время как существенно не изменился синтез HDM-специфического IgG1 (дополнительная фигура 5D).В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что Sema3E может играть существенную ингибирующую роль в устранении патологических признаков хронической аллергической астмы.

Рис. 6. Интраназальное лечение Sema3E ослабляет проявления хронической аллергической астмы при повторном воздействии HDM. Мышей подвергали воздействию HDM в течение 7 недель, затем вводили контроль Sema3-Fc или Fc-Ig, затем подвергали воздействию HDM еще в течение одной недели (A) Интраназальное введение Sema3E защищает мышей от вызванной HDM резистентности дыхательных путей после повторного воздействия HDM (Б) . Лечение Sema3E также уменьшало общее (C) и гранулоцитарное (D) привлечение воспалительных клеток в дыхательные пути. Воспаление легких и гиперсекреция слизи уменьшались при лечении Sema3E (E) . Снижение секреции цитокинов Th3 и Th27 с помощью Sema3E сохранялось при повторном воздействии HDM. (F) E: эозинофилы, N: нейтрофилы, M: макрофаги, L: лимфоциты. (n=4, ^* P<0,05, P<0,01 и ^*** P<0.001 ).

ОБСУЖДЕНИЕ

В наших недавних исследованиях мы обнаружили, что Sema3E играет решающую регулирующую роль в острой модели аллергической астмы. Острые проявления астмы были усилены у мышей Sema3e ^-/- [13]. Однако хронический характер заболевания требует изучения роли Sema3E в хронической модели заболевания. Это позволяет нам, в частности, выяснить, сохраняется ли регуляторная роль Sema3E с течением времени, и расшифровать его роль в длительном AHR.

В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что хроническое воздействие HDM заметно снижает иммунореактивность Sema3E в дыхательных путях мышей, что свидетельствует о потенциальной защитной роли этого медиатора против хронического дефицита аллергической астмы. Мы также обнаружили, что в модели хронической мышиной аллергической астмы генетическая отмена Sema3E преувеличивает развитие AHR, ремоделирования и воспаления. Генетическая делеция Sema3E может быть аналогична астматическим состояниям, при которых экспрессия Sema3E патологически подавлена ​​неизвестным механизмом.Большое терапевтическое значение имеет введение внешнего рекомбинантного Sema3E во время или после развития заболевания, облегчающее хронические проявления астмы. Таким образом, мы предполагаем, что восполнение Sema3E может быть защитной стратегией во время хронического заражения HDM, которое связано с подавлением Sema3E.

Заметное снижение Sema3E в хронической модели аллергической астмы сходно с нашими предыдущими выводами на модели острой болезни [12], а также у тяжелых пациентов [11].Однако до сих пор неясно, вызывает ли воздействие аллергена в первую очередь снижение уровня Sema3E; генетический дефект Sema3E приводит к обострению астматической патологии; или комбинация обеих возможностей. Это заслуживает дальнейших исследований развития, чтобы определить, является ли подавление Sema3E причиной или следствием воздействия аллергена.

AHR является ключевым клиническим признаком аллергической астмы, вызванной хроническим воспалением 2-го типа [21]. Таким образом, снижение AHR посредством уравновешивания аллергического воспаления типа 2 с помощью Sema3E может быть основным механизмом действия Sema3E при астме.Кроме того, независимый от воспаления AHR, опосредованный структурными клетками [22], может быть обращен вспять прямым действием Sema3E на эти клетки. Например, подавление Sema3E может способствовать гиперплазии или сокращению клеток ASM, что в конечном итоге приводит к усилению параметров AHR, наблюдаемых у мышей Sema3e ^-/- и снижающихся при лечении Sema3E.

Усиление фиброза легких, проявляющееся повышенным отложением коллагена в отсутствие Sema3E, которое было реверсировано при лечении Sem3E, может быть связано с неизвестным механизмом, в котором Sema3E действует как антифиброзный медиатор, вероятно, посредством уменьшения миграции и пролиферации фибробластов в качестве основным источником выработки коллагена [23]. Это может быть похоже на наш предыдущий отчет, в котором мы продемонстрировали ингибирующее действие Sema3E на клетки ASM человека [10]. Усиленный легочный фиброз приводит к повышенной жесткости легких, что может быть причиной увеличения AHR, наблюдаемого у мышей Sema3e ^-/- . Антифибротический эффект Sema3E можно исследовать на моделях идиопатического легочного фиброза, при котором интерстициальный фиброз и отложение коллагена вызывают повреждение легких и дыхательную недостаточность [24]. Гиперпродукция слизи, опосредованная HDM, которая является еще одним важным аспектом структурных изменений в дыхательных путях, усиливалась в отсутствие Sema3E и уменьшалась при его интраназальном введении.Можно предположить, что Sema3E может напрямую подавлять экспрессию генов, ответственных за выработку слизи в бокаловидных клетках, т.е. Muc5ac или косвенно уменьшать экспрессию медиаторов, например IL-13, которые способствуют гиперплазии бокаловидных клеток [25, 26].

Повышенные уровни IL-5 и IL-17A в Sema3e ^-/- , а также их снижение при лечении Sema3E могут объяснить, по крайней мере частично, механизм, с помощью которого Sema3E играет решающую роль в регуляции эозинофилов и рекрутирование нейтрофилов в дыхательные пути [27, 28]. Секреция как ИЛ-5, так и ИЛ-17А повышена при аллергической астме, ассоциированной с эозинофильным и нейтрофильным эндотипами соответственно [27, 29]. Учитывая их биологические функции, эти цитокины являются потенциальными терапевтическими мишенями при аллергической астме [27, 30, 31]. Наше исследование предполагает, что Sema3E можно рассматривать как новый метод лечения хронической аллергической астмы посредством регуляции как Th3, т.е. IL-4 и IL-5, и Th27, т.е. IL-17A, ассоциированные цитокины. Более высокие уровни HDM-специфического IgE в сыворотке мышей Sema3e ^-/- , подвергшихся заражению HDM, а также снижение секреции IgE при экзогенном лечении Sema3E предполагают отрицательную неизвестную регуляторную роль Sema3E в переключении класса IgE, т.к. кардинальная особенность развития В-клеток, приписываемая ответу IL-4 [32–34].

Чтобы полностью понять механизм, лежащий в основе терапевтического эффекта Sema3E на модели хронической астмы HDM, необходимо подробное исследование экспрессии и функции is PlexinD1. Было показано, что PlexinD1 взаимодействует с семафорином 4A, который участвует в развитии воспаления 2 типа [35]. Кроме того, передача сигналов Sema3E опосредована корецепторами, такими как нейропилин 1 (Nrp1) и рецептор 2 фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR2) контекстно-зависимым образом [36-38].Следовательно, потенциальная роль этих молекул в модели HDM должна быть изучена при введении Sema3E.

Таким образом, снижение экспрессии Sema3E в мышиной модели хронической аллергической астмы предполагает потенциальную роль этого медиатора в этом заболевании. Усиление AHR, ремоделирование и воспаление у мышей с дефицитом Sema3E, а также реверсия этих патологических признаков при лечении Sema3E обеспечивают новый биологический терапевтический подход к хронической аллергической астме в будущем.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Животные

Sema3e ^-/- мышь (штамм 129 P2) была любезно подарена д-ром Ф. Манном (Институт биологии развития Марселя Люмини, Франция, Марсельеран). [37]. Штамм 129 P2 дикого типа (WT) использовали в качестве контроля однопометников. Кроме того, в моделях лечения использовали самок мышей Balb/c в возрасте 6-8 недель, приобретенных в Центральной службе по уходу за животными (CACS) Университета Манитобы. Всех мышей содержали в определенных условиях, свободных от патогенов, и использовали в соответствии с рекомендациями, установленными Канадским советом по уходу за животными.

Модель воздействия клещей домашней пыли

Лиофилизированный белковый экстракт HDM был получен от Greer Laboratories (Lenoir, NC). Рабочая концентрация (25 мкг на мышь) была свежеприготовленной. Хроническую модель заболевания устанавливали путем интраназального введения под газовым наркозом 5 дней в неделю в течение первых двух недель. ГДМ непрерывно вводили интраназально каждые два дня в течение следующих 5 недель с интервалом в 2 дня между этими неделями (рис. 1А) [39].В некоторых экспериментах рекомбинантный мышиный Sema3E-Fc [40] или физиологический раствор-Fc (10 мкг/кг в PBS) вводили интраназально за 1 час до воздействия HDM в течение 7 недель мышам Balb/c. В противном случае воздействие HDM прекращали в конце семи недель с последующим лечением Sema3E-Fc в течение следующих двух недель, а затем повторное воздействие HDM каждые два дня в течение еще одной недели.

Иммуногистохимия

Фиксированные формалином легочные ткани заливали парафином, изготавливали срезы толщиной 5 мкм, депарафинизировали в ксилоле и регидратировали путем постепенной концентрации спирта до воды.Затем проводили выделение антигена в кипящем цитратно-натриевом буфере в течение 10 мин. Срезы инкубировали с блокирующим буфером в течение 1 часа при комнатной температуре, после чего инкубировали в течение ночи либо с антителом против мышиного Sema3E (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота), либо с изотипическим контрольным IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, Pa) при 4°C. Затем предметные стекла дважды промывали TBS с последующим инкубированием в течение 1 часа при комнатной температуре с конъюгированным с биотином вторичным антителом. После обширной промывки TBS предметные стекла инкубировали со стрептавидин-щелочной фосфатазой в течение 30 минут при комнатной температуре. Проявку проводили с использованием Fast Red (Sigma-Aldrich, Оквилл, Онтарио, Канада) и докрашивали модифицированным гематоксилином Майера (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ). Наконец, слайды были смонтированы и визуализированы с использованием программного обеспечения AxioVision (Carl Zeiss, Inc, Thornwood, NY).

Измерения гиперреактивности дыхательных путей

Параметры AHR, включая сопротивление дыхательных путей, сопротивление тканей и эластичность тканей, измеряли с использованием системы вентиляции мелких животных FlexiVent (SCIREQ, Монреаль, Квебек, Канада).Вкратце, мышей, сенсибилизированных HDM или физиологическим раствором и зараженных, подвергали трахеотомии. Затем интратрахеально вводили возрастающий градиент дозы метахолина (0, 3, 6, 12, 25 и 50 мг/мл) с 5-минутным интервалом между дозами и проводили измерения функции легких.

Гистология легкого

Нижняя левая доля легкого была рассечена, надута и зафиксирована в формалине на ночь с последующим заливанием в парафин. Базальное и HDM-индуцированное воспаление дыхательных путей, гиперпродукцию слизи и отложение коллагена в срезах легочной ткани изучали с помощью окрашивания H&E, периодической кислотой-Шиффа (PAS) и Sirius Red соответственно.

Выделение РНК и ПЦР в реальном времени

Правую среднюю долю легких гомогенизировали в Trizol® (Life Technologies, Burlington, ON) с последующим выделением РНК и синтезом кДНК в соответствии с инструкциями производителя. Затем исследовали экспрессию Col3 и Muc5ac с использованием специфических мышиных праймеров.

Сбор жидкости бронхоальвеолярного лаважа

Жидкость бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) собирали у трахеально канюлированных мышей с помощью двух инстилляций 1 мл стерильного физиологического раствора, содержащего 0.1 мМ ЭДТА. После лизиса эритроцитов подсчитывали общее количество клеток жидкости БАЛ. Цитоспины, приготовленные из BAL, фиксировали и окрашивали для проведения дифференциального подсчета воспалительных клеток. Супернатанты жидкости БАЛ хранили при -80°C для оценки уровней цитокинов.

Измерение цитокинов и иммуноглобулинов

Уровень ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-17А и ИФН-γ в жидкости БАЛ измеряли с помощью ИФА в соответствии с инструкциями производителя. Все наборы для ELISA цитокинов были получены от BioLegend (Сан-Диего, Калифорния).Общие и специфичные для HDM формы уровней IgE и IgG1 количественно определяли с использованием коммерческих наборов ELISA в сыворотке (Southern Biotech Birmingham, Al), как описано ранее [41].

Проточная цитометрия

Собирали медиастинальные лимфатические узлы (MLN) и готовили суспензию отдельных клеток. Клетки повторно суспендировали в DMEM и инкубировали со свежеприготовленным коктейлем, содержащим 50 нг/мл ФМА, 500 нг/мл иономицина и 10 мкг/мл брефельдина А (Sigma-Aldrich, Oakville, ON) в течение 4 ч при 37°C и 5% CO ₂ .Внеклеточное окрашивание проводили с использованием антимышиного CD3 e-Fluor® 450 (клон: 17A2) и CD4-FITC (клон: RM4-5) от eBioscience. После фиксации параформальдегидом в течение 15 мин при 4°С клетки пермеабилизировали 0,1% сапонином. Наконец, внутриклеточное окрашивание выполняли с использованием антимышиного IL-4-PE (клон: 11B11), IL-17A-PE (клон: eBio17B7) и IFN-γ-PE (клон: XMG1.2). Образцы были получены на FACSCantoII и проанализированы с использованием программного обеспечения FlowJo.

Статистика

GraphPad Prism 5.Для статистического анализа использовалось программное обеспечение 0. Данные анализировали с помощью непарного t -критерия, однофакторного или двухфакторного дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом множественных сравнений Бонферрони. Различия считали статистически значимыми при ^* P ≤0,05, ^** P ≤0,01 и ^*** P ≤0,001.

Сокращения

AHR: гиперреактивность дыхательных путей; ASM: гладкие мышцы дыхательных путей; БАЛ: бронхоальвеолярный лаваж; HDM: клещ домашней пыли; MLN: медиастинальные лимфатические узлы; Nrp1: нейропилин 1; ПАСК: Периодическая кислота-Шифф; Сема: семафорин; VEGFR2: фактор роста эндотелия сосудов 2; WT: дикий тип.

Вклад авторов

Х.М. разработал, выполнил и проанализировал эксперименты и подготовил рукопись. Л.С. помогал в проведении опытов. JSD-C. клонировали, экспрессировали и очищали рекомбинантный мышиный Sema3E-Fc. А.Дж.Х. внес свой вклад в изучение механики легких. LK и JC разработали эксперименты и проанализировали данные. А.С.Г. разработал эксперименты, проанализировал данные и подготовил рукопись. Все авторы пересмотрели и одобрили окончательный вариант рукописи.

БЛАГОДАРНОСТИ

Авторы благодарят д.Фанни Манн (Институт биологии развития Марселя Люмини, Университет Средиземноморья, Марсель, Франция) за предоставление нам модели мыши Sema3e ^-/- , миссис Суджата Басу (лаборатория функции легких мышей, Детский научно-исследовательский институт здоровья Манитобы) , Виннипег, Канада) за помощь в измерениях AHR, и г-жу Назанин Татари за помощь в экспериментах ПЦР в реальном времени.

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Авторы заявили об отсутствии конфликта интересов.

ФИНАНСИРОВАНИЕ

Эта работа была поддержана грантом Канадского института медицинских исследований (MOP № 115115), грантом Национального совета по науке и инженерным исследованиям (RG PIN/386289) и грантом Института детского здоровья Манитобы для A.S.G. Х.М. был поддержан Научно-исследовательским институтом студенческой молодежи Манитобы при детской больнице.

ССЫЛКИ

1. Агаче И.О. От фенотипов к эндотипам и к лечению астмы. Курр Опин Аллергия Клин Иммунол. 2013; 13:249-256.

2. Чен В., Линд Л.Д., Фитцджеральд Дж.М., Садацафави М. Влияние социально-экономического статуса на затраты на лечение астмы при всеобщем охвате услугами здравоохранения. Мед уход. 2016; 54:789-795.

3. Зафари З., Линд Л.Д., Фитцджеральд Дж.М., Садацафави М. Экономические и медицинские последствия полного соблюдения контролирующей терапии у взрослых с неконтролируемой астмой: имитационное исследование. J Аллергия Клин Иммунол. 2014; 134:908-915.

4. Пейн М., Бермудес О. , Лакост П., Ройер П.Дж., Боттури К., Тиссо А., Бруар С., Эйкельберг О., Маньян А.Ремоделирование тканей при хронических заболеваниях бронхов: от эпителиального к мезенхимальному фенотипу. Европейская версия Respir 2014; 23:118-130.

5. Пракаш Ю.С. Новые концепции вклада гладких мышц в структуру и функцию дыхательных путей: последствия для здоровья и болезней. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2016; 311:L1113-L1140.

6. Лоухаген О. Диагностика бронхиальной астмы — новые теории. Дж Астма. 2015 г.; 52:538-544.

7. Лаузон А.М., Мартин Дж.Г. Гиперреактивность дыхательных путей; гладкой мускулатуры в качестве главного действующего лица.F1000рез. 2016.

8. Grainge CL, Davies DE. Эпителиальное повреждение и репарация при заболеваниях дыхательных путей. Грудь. 2013; 144:1906-1912.

9. Vroman H, Bergen IM, Li BW, van Hulst JA, Lukkes M, van Uden D, Hendriks RW, Kool M. Развитие эозинофильного воспаления не зависит от взаимодействия клеток BT в модели хронической астмы, вызываемой клещами домашней пыли. . Клин Эксперт Аллергия. 2017; 47:551-564.

10. Мовасах Х., Шан Л., Халайко А.Дж., Рот М., Тамм М., Чакир Дж., Гунни А.С. Нейрональный химиопрепарат семафорин 3Е ингибирует пролиферацию и миграцию гладкомышечных клеток дыхательных путей человека.J Аллергия Клин Иммунол. 2014; 133:560-567.

11. Мовассах Х., Шан Л., Чакир Дж., МакКонвилл Дж. Ф., Халайко А. Дж., Куссих Л., Гунни А. С. Экспрессия семафорина 3Е подавляется при тяжелой астме. J Аллергия Клин Иммунол. 2017; 140:1176-1179.

12. Мовасах Х., Шан Л., Дьюк-Коэн Дж.С., Халайко А.Дж., Узонна Дж.Е., Гунни А.С. Семафорин 3Е облегчает симптомы аллергического заболевания дыхательных путей, вызванного клещами домашней пыли. Ам Джей Патол. 2017; 187:1566-1576.

13. Мовассах Х., Шан Л., Мохаммед А., Халайко А.Дж., Гунни А.С.Дефицит семафорина 3E усугубляет воспаление дыхательных путей, гиперреактивность и ремоделирование в мышиной модели аллергической астмы. Дж Иммунол. 2017; 198:1805-1814.

14. Мовассах Х. , Саати А., Нандагопал С., Мохаммед А., Татари Н., Шан Л., Дюк-Кохан Дж. С., Фоук К. Р., Лин Ф., Гунни А. С. Хеморепеллентный семафорин 3E негативно регулирует миграцию нейтрофилов in vitro и in vivo. Дж Иммунол. 2017; 198:1023-1033.

15. Charron CB, Pakhale S. Роль гиперреактивности дыхательных путей, измеренной с помощью метахолинового теста, в определении тяжести астмы при синдроме астмы-ожирения.Курр Опин Аллергия Клин Иммунол. 2016; 16:218-223.

16. Бройтман О., Браун Р.К., Морган Б.Дж., Пегелоу Д.Ф., Хсу П.Н., Мэй Л.С., Коя А.К., Элдридж М., Теодореску М. Влияние хронической перемежающейся гипоксии на вызванное аллергеном воспаление дыхательных путей у крыс. Am J Respir Cell Mol Biol. 2015 г.; 52:162-170.

17. Fahy JV, Dickey BF. Функция и дисфункция слизистой оболочки дыхательных путей. N Engl J Med. 2010 г.; 363:2233-2247.

18. Шен М.Л., Ван Ч., Линь Ч., Чжоу Н., Као С.Т., Ву Д.К. Лютеолин ослабляет гиперпродукцию слизи в дыхательных путях за счет ингибирования ГАМКергической системы. Научный представитель 2016 г.; 6:32756.

19. Канбаз Д., Утч Л., Логиантара А., ван Ри Р., ван Райт Л.С. IL-33 способствует индукции продукции иммуноглобулинов после ингаляции экстракта клещей домашней пыли у мышей. Аллергия. 2015 г.; 70:522-532.

20. Resch Y, Michel S, Kabesch M, Lupinek C, Valenta R, Vrtala S. Различное распознавание IgE компонентов клещевого аллергена у детей с астмой и без нее. J Аллергия Клин Иммунол. 2015 г.; 136:1083-1091.

21. Lommatzsch M. Гиперреактивность дыхательных путей: новый взгляд на патогенез.Semin Respir Crit Care Med. 2012 г.; 33:579-587.

22. Баленга Н.А., Шутка В., Цзян М., Панеттьери Р.А. младший, Друи К.М. Потеря регулятора передачи сигналов G-белка 5 способствует гиперреактивности дыхательных путей при отсутствии аллергического воспаления. J Аллергия Клин Иммунол. 2014; 134:451-459.

23. Knudsen L, Ruppert C, Ochs M. Ремоделирование тканей при легочном фиброзе. Сотовые Ткани Res. 2017; 367:607-626.

24. Лимджунявонг Н., Митцнер В., Хортон М.Р. Мышиная модель хронического идиопатического легочного фиброза.Физиол Респ. 2014; 2:e00249.

25. Эрле Д.Дж., Шеппард Д. Клеточная биология астмы. Джей Селл Биол. 2014; 205:621-631.

26. Куперман Д.А., Хуанг Х., Кот Л.Л., Чанг Г.Х., Долганов Г.М., Чжу З., Элиас Дж.А., Шеппард Д., Эрле Д.Дж. Прямое воздействие интерлейкина-13 на эпителиальные клетки вызывает гиперреактивность дыхательных путей и гиперпродукцию слизи при астме. Нат Мед. 2002 г.; 8:885-889.

27. Chesne J, Braza F, Mahay G, Brouard S, Aronica M, Magnan A. IL-17 при тяжелой астме. Где мы стоим? Am J Respir Crit Care Med.2014; 190:1094-1101.

28. Йоханссон М.В., Мошер Д.Ф. Состояния активации интегрина и рекрутирование эозинофилов при астме. Фронт Фармакол. 2013; 4:33.

29. Саглани С., Ллойд К.М. Эозинофилы в патогенезе тяжелой бронхиальной астмы у детей. Курр Опин Аллергия Клин Иммунол. 2014; 14:143-148.

30. Al-Ramli W, Prefontaine D, Chouiali F, Martin JG, Olivenstein R, Lemiere C, Hamid Q. T(H)17-ассоциированные цитокины (IL-17A и IL-17F) при тяжелой астме. J Аллергия Клин Иммунол.2009 г.; 123:1185-1187.

31. Фитцджеральд Дж.М., Бликер Э.Р., Наир П., Корн С., Охта К., Ломматч М., Фергюсон Г.Т., Буссе В.В., Баркер П., Спроул С., Гилмартин Г., Веркстром В., Ауривиллиус М., Голдман М.; Исследователи исследования CALIMA. Бенрализумаб, моноклональное антитело против альфа-рецептора интерлейкина-5, в качестве дополнительного лечения пациентов с тяжелой неконтролируемой эозинофильной астмой (CALIMA): рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование фазы 3. Ланцет. 2016; 388:2128-2141.

32. Луни Т.Дж., Ли Дж.Ю., Роскин К.М., Хох Р.А., Кинг Дж., Гланвилл Дж., Лю И., Фам Т.Д., Деккер С.Л., Дэвис М.М., Бойд С.Д.Происхождение IgE при переключении изотипа В-клеток человека. J Аллергия Клин Иммунол. 2016; 137:579-586.

33. Ву Л.С., Заррин А.А. Продукция и регуляция IgE иммунной системой. Нат Рев Иммунол. 2014; 14:247-259.

34. Wu YL, Stubbbington MJ, Daly M, Teichmann SA, Rada C. Внутренняя гетерогенность транскрипции в B-клетках контролирует раннее переключение класса на IgE. J Эксперт Мед. 2017; 214:183-196.

35. Nkyimbeng-Takwi EH, Shanks K, Smith E, Iyer A, Lipsky MM, Detolla LJ, Kikutani H, Keegan AD, Chapoval SP.Нейроиммунный семафорин 4А снижает тяжесть аллергического ответа. Иммунол слизистых оболочек. 2012 г.; 5:409-419.

36. Bellon A, Luchino J, Haigh K, Rougon G, Haigh J, Chauvet S, Mann F. Передача сигналов VEGFR2 (KDR/Flk1) опосредует рост аксонов в ответ на семафорин 3E в развивающемся мозге. Нейрон. 2010 г.; 66:205-219.

37. Gu C, Yoshida Y, Livet J, Reimert DV, Mann F, Merte J, Henderson CE, Jessell TM, Kolodkin AL, Ginty DD. Семафорин 3Е и плексин-D1 контролируют сосудистый рисунок независимо от нейропилинов.Наука. 2005 г.; 307:265-268.

38. Shimizu I, Yoshida Y, Moriya J, Nojima A, Uemura A, Kobayashi Y, Minamino T. Индуцированное семафорином3E воспаление способствует резистентности к инсулину при диетическом ожирении.