Бородина толстая: как выглядела Ксения Бородина до похудения и пластики

Содержание

Контакты | МИСП

Задать интересующий вас вопрос можно, написав нам электронное письмо по адресу: misp@mispxx-xxi.ru или позвонив по телефону: +7981-983-8421

Директор:

Марина Борисовна Джигарханян, e-mail: [email protected]

Cоветник директора по редакционно-издательской деятельности

Екатерина Николаевна Маршалл, e-mail: [email protected]

Советник директора по выставочной деятельности

Марина Борисовна Стекольникова

Начальник отдела, координатор проектов:
Дарья Никитина, e-mail: [email protected]

Заместитель начальника отдела:

Ольга Николаевна Толстая, e-mail: [email protected]

Специалисты по учёту и хранению музейных предметов:

Бородина София Станиславовна, e-mail: borodina@mispxx-xxi. ru

Анастасия Моторина, e-mail: [email protected]

Сканченко Елизавета, e-mail: [email protected]

Немчанинова Оксана, e-mail: [email protected]

Гюльнара Хаедаровна Люкманова

Елена Александровна Эсоно

Специалисты по экспозиционно-выставочной деятельности:

Екатерина Михатова, e-mail: [email protected]

Вероника Никифорова, e-mail: [email protected]

Мария Трунтаева, e-mail: [email protected]

Образовательный центр МИСП:

Оксана Ильзина, e-mail: [email protected]

Анастасия Садырова

PR:

Ирина Соснина,

e-mail: [email protected]

Адрес, информацию о графике работы музея, проводимых выставках, стоимости билетов и льготных категориях граждан, вы можете найти в разделе «Посетителям».

Профсоюз

Почтовый адрес: 305022, г.Курск, ул. Союзная 30

Юридический адрес: 305022, г.Курск, ул. Союзная 30

Контактный телефон, факс: (8-4712) 26-17-23

Председатель профсоюзного комитета
Клемешова Людмила Григорьевна
Состав профсоюзного комитета
Димакова Инна Анатольевна	заместитель председателя
Бородина Ирина Леонидовна	организационно-методическая работа
Молчанова Эльвира Эдуардовна	казначей
Полунин Александр Валентинович	культурно-массовая работа
Хилимова Элеонора Анатольевна	культурно-массовая работа
Каменева Елена Павловна	охрана труда
Состав ревизионной комиссии
Козак Елена Борисовна	председатель
Толстая Татьяна Юрьевна	член комиссии
Третьякова Ирина Ивановна	член комиссии

О НАС:

По состоянию на 01. 01.2017 г.

Число работающих	717 чел.	% профсоюзной принадлежности
Число членов профсоюза	621 чел.; из них:	89%
Врачи	186	87%
Медсестры	301	89%
Прочий персонал	227	82%

Сотрудники больницы добиваются высоких результатов, занимая призовые места, в областных соревнованиях, спартакиадах

И смотр-конкурсах:

Своих победителей и активистов чествует Администрация, Профкомом

Звезда Дома-2 Бородина попала в ловушку анорексии: 45 килограмм и все еще «толстая»

Экс-ведущая Дома-2 и российская светская львица Ксения Бородина, несмотря на известность и большие доходы, прошла не один кризисный период.

Были даже моменты, на которые сама Ксюша теперь не может взглянуть, чтобы не отреагировать на это крепким словцом. Скриншоты из сториз Бородиной в Instagram опубликовал Telegram-канал “Только никому”.

Подпишись на Знай в Google News! Только самые яркие новости!

Всем, кто сегодня в шоке от нарядов телеведущей, можно с уверенностью сказать: это вы ее раньше не видели. На фото, где она позирует в платье с собачками и в фиолетовых сапогах, сама Бородина написала: “Шо это за пи…ц. Собачки еще ок, но откуда, б…ь, фиолетовые сапоги?”

Популярные статьи сейчас Показать еще

Кроме того, был период, когда Ксения была близка к анорексии. Всему виной шейминг со стороны СМИ: когда Ксюша была совершенно нормального размера — её называли толстой, а когда похудела до 46 кг — такой уже видела себя сама. Ксения Бородина маниакально увлеклась правильным питанием. Такими темпами и до анорексии было не далеко.

Но, к счастью, до этого не дошло!

Напомним, ранее сообщалось, что популярное в России шоу «Замуж за Бузову» представляет собой своеобразную альтернативу знаменитому «Холостяк», однако участники будут бороться не за приверженность и любовь богатого красавца, а за сердце эпатажной телезвезды и певицы Ольги Бузовой.

Шоу наделало много шума еще во время кастинга, на который пришло огромное количество мужчин. А каждый эфир раскрывает все новые подробности про Бузову.

Напомним, продюсер Бузовой держит ее в рабстве.

Как сообщал Знай.ua, Бузова в купальнике собрала грудь в могучую кучку.

Также Знай.ua писал, Бузова откровенно рассказала о своей зависимости.

Подпишись на Знай в Google News! Только самые яркие новости!

Виртуальная экспозиция

«Рассказы дедушки». Детский журнал братьев Толстых, автор: Толстой Л.Н.

Текст рукой 10-тилетнего Л.Н. Толстого. Рисунок предположительно рукой одного из старших братьев Толстого.

Портрет Л.Н. Толстого, автор: Фотограф фирмы «Шерер, Набгольц и Ко»

Поясной портрет Л.Н. Толстого, в тёмной блузе, со сложенными на груди руками, голова – фас, корпус – 3/4 вправо, на тёмном фоне.

Портрет Л.Н. Толстого, автор: И.Г. Дьяговченко

Поясной портрет Л.Н. Толстого на визитном бланке, 3/4 влево, на тёмном фоне, в тёмном сюртуке и галстуке и белой рубашке. На бланке внизу логотип название ателье, в котором был выполнен предполагаемый переснимок.

Портрет Л.Н. Толстого, автор: И. Жерюзе

Л.Н. Толстой в рост, 3/4 влево, в длинном чёрном пальто, серых жилете и брюках, чёрных ботинках. Стоит около стола, накрытого тёмной скатертью.

Справа стоит кресло, обитое тёмной тканью, видна часть гардины. Снимок сделан во время путешествия Л.Н. Толстого по Европе.

Альбом «Нашествие Наполеона. Отечественная война 1812 г.», гравюра «Сражение при Вязьме 22-го октября»

Сражение под Вязьмой — сражение 22 октября (3 ноября) 1812 года под Вязьмой русского авангарда под командованием Милорадовича с отступающей французской армией в ходе Отечественной войны 1812 года. На переднем плане конные и пешие войска. На среднем плане справа собор, за ним отсвет пожара, на заднем плане войска на улицах города.

Гравюра «Кутузов Михаил Илларионович (1745-1813 гг.)», автор: С. Карделли

Поясное изображение в профиль, в военном мундире с орденами, Георгиевской лентой, наградами и портретом Императора Александра I в бриллиантовой оправе. На нижнем поле типографские надписи: С.

-Петербургскiй Военный Губернаторъ Генералъ-отъ-Инфантерiи Михаилъ Илларiоновичъ Голенищевъ Кутузовъ 1801-1802 г.

Портрет Л.Н. Толстого, автор: В.Г. Чертков

Поясное изображение Л.Н. Толстого, голова фас, корпус – 3/4 вправо, в тёмной блузе на пуговицах, подпоясанной ремнём, на тёмном фоне. Л.Н. Толстой стоит, засунув кисти рук за ремень.

Гравюра «Князь Багратион. Петр Иванович (1765-1812 гг.)», автор: Д. Доу

Погрудное изображение, 3\4 в право. Вьющиеся волосы, бакенбарды в генеральском мундире с золотым шитьем в виде дубовых листьев, с Андреевской лентой, с тремя звездами орденов Андрея, Георгия и Владимира и многими крестами. На нижнем поле типографская надпись: «PRINCE P.BAGRATION»

Портрет Л.Н. Толстого, автор: С.

М. Прокудин-Горский

Л.Н. Толстой в рост, голова фас, корпус – 3/4 влево, в голубой блузе, серых брюках и чёрных сапогах. Сидит в парке в плетёном кресле нога на ногу, правая рука лежит на подлокотнике кресла, левая – на коленях. На втором плане деревья парка.

Портрет Л.Н. Толстого в день своего восьмидесятилетия, автор: С.А. Толстая

Л.Н. Толстой за работой в кабинете яснополянского дома, фас, в белой блузе. Сидит в черном кресле, держа в руках письмо. Перед ним на раскладном столике разложены книги и бумаги, справа столик, на котором стоят букеты цветов в вазах и колокольчик для вызова прислуги. На первом плане круглый столик с книгами и бумагами. На заднем плане видна дверь, справа – фотопортрет в раме, слева картина.

Гравюра «Молебен перед Бородинским сражением»

На переднем плане коленопреклоненные офицеры, в центре — Кутузов (в профиль, пытается встать с колен) слева на коленях солдаты. На среднем плане слева двое солдат держат икону, фигура священника (в профиль), справа стоят три офицера. На заднем плане стоят солдаты.

«Война и мир». Рук. 23, автор: Толстой Л.Н.

Текст в начале записан рукой С.А. Берса, далее автограф Л.Н. Толстого. Отдельные записи, относящиеся к Бородинскому сражению, сделанные Толстым во время его пребывания в Бородине. В нижнем правом углу рукописи рисунок-чертеж Толстого: план Бородинского поля, расположение деревень вокруг него, линия горизонта и положение солнца при восходе и заходе.

«Война и мир». Рук. 139, автор: Толстой Л.Н.

Текст написан С.А. Толстой с исправлениями Л.Н. Толстого. Текст близок к окончательному, соответствует т. III, ч. 3, гл. XXVI (Наполеон у портрета сына перед Бородинским сражением). Литературное наследство. М. 1983 г. Т. 94. С. 670–673.

Пейзаж «Вид села Бородина», автор: Литография Жарковой

На переднем плане слева памятник воинам 1812 г., справа среди деревьев маленький домик. На заднем плане село.

Парный портрет Л.Н. и С.А. Толстых в последнюю годовщину свадьбы, автор: С.А. Толстая

На первом плане С.А. и Л.Н. Толстые в рост стоят на площадке перед домом. С.А. Толстая 3/4 вправо, в светлом платье держит Толстого за руку. Л.Н. Толстой в тёмных блузе, брюках и сапогах, правой рукой сжимает руку жены, левую руку держит в кармане. На втором плане кустарник и деревья.

Портрет братьев Толстых

Поколенное изображение братьев Толстых. Сидят слева направо: Сергей Толстой фас, в тёмных фраке, жилетке и брюках, руки сложены на груди, Николай Толстой – голова фас, корпус вполоборота, в сером костюме, правой рукой опирается на подлокотник кресла, Дмитрий Толстой фас, в тёмных фраке и жилете и светлых брюках, правая рука – в кармане брюк, левая – заведена за борт жилета, Лев Толстой в военной форме с эполетами, левой рукой держится за ремень, на котором висит сабля.

Журнал поведения Николеньки, автор: Толстая (рожд. Волконская) М.Н.

Журнал представляет собой 2 самодельные тетради из плотной бумаги серо-голубого цвета. Листы прошиты суровыми нитками. Загл.: «Журнал поведения Николеньки, от 10 маия до приезда Папиньки.

«Война и мир». Рук. 103, автор: Толстой Л.Н.

Текст рукой Л.Н. Толстого с многочисленными исправлениями. Сцена дуэли Пьера Безухова и Долохова в Сокольниках.

Портрет Л.Н. Толстого, автор: И.Г. Дьяговченко

Фрагмент парного портрета Л.Н. Толстого с братом Н.Н. Толстым перед их совместным отъездом на Кавказ. Поясное изображение Л.Н. Толстого – голова фас, корпус – прямолично, в светлом сюртуке и тёмном шейном платке. Согнутыми в локтях руками опирается на трость, зажатую в правой руке. На фоне видны следы ретуши. Справа внизу надпись: «И.Г. Дьяговченко въ Москве».

Портрет Л.Н. Толстого

Л.Н. Толстой (поколенно) сидит в кресле нога на ногу, в расстёгнутом сюртуке. Изображён Л.Н. Толстой в период обучения в Казанском университете. Поколенный портрет, голова фас, корпус 3/4 вправо, в светлом расстёгнутом сюртуке и тёмном шарфе. Сидит в кресле, нога на ногу, положив правую руку на подлокотник, левая лежит на коленях. Справа видна часть портьеры. Первый фотоснимок Л.Н. Толстого. Долгое время снимок хранился в семье Иславиных. В 1886 г. был передан С.А. Толстой.

Научная Библиотека МГУ | Отдел редких книг и рукописей

Выдающийся русский философ, государствовед, публицист. Выпускник Московского университета, приват-доцент, профессор (1906-1922). Библиотека вместе с его архивом поступила в Отдел редких книг и рукописей Научной библиотеки МГУ в 2006 г. До этого с 1966 по 2005 гг. хранилась в Мичиганском университе (Ист-Лансинг, США). Всего 630 наименований книг, брошюр, журналов и ротапринтных изданий, из них 563 книги – на русском языке. Издания по русской литературе, истории и философии. В библиотеке имеются редкие издания Н.М. Карамзина («История государства Российского», 1818), «Летописец Новгородский» (1819) и др., а также ценные издания русского зарубежья, касающиеся вопросов русской идеологии и культуры. Литература: Каталог библиотеки Ивана Александровича Ильина: из собрания Отдела редких книг и рукописей Научной библиотеки МГУ / Моск. гос. ун-т им. М. В. Ломоносова ; [сост. И. В. Овчинкина]. – М.: Изд-во Моск. ун-та, 2011. – 200 с. : ил.

Всего: 486

<< 1 2 3 4 5 . . . 9 10 11 12 13 14 15 16 17 . . . 21 22 23 24 25 >>

241. Тургенев,Иван Сергеевич (). Первое собрание писем И.
С. Тургенева : 1840-1883 гг.
Санкт-Петербург : О-во для пособия нуждающимся литераторам и ученым, 1884 (обл. 1885)
- Шифр: Ильин, 288
242. Богословский, Михаил Михайлович (историк). Петр I : Материалы для биографии : Т. 3. Стрелецкий розыск. Воронежское кораблекрушение. Городская реформа 1699 г. Карловицкий конгресс. 1698-1699 / Акад. М. М. Богословский; Под ред. проф. В. И. Лебедева

[Москва] : Госполитиздат, 1946
243. Богословский, Михаил Михайлович (историк). Петр I : Материалы для биографии : Т. 4. Русско-датский союз. Керченский подход. Дипломатическая подготовка Северной войны. Реформы и преобразовательные планы 1699-1700 гг. Начало войны Дании и Польши со Швецией и приготовления Петра к Северной войне. 1699-1701 / Акад. М. М. Богословский; Под ред. проф. В. И. Лебедева

[Москва] : Госполитиздат, 1948
244.
Богословский, Михаил Михайлович (историк). Петр I : Материалы для биографии : Т. 5. Посольство Е. И. Украинцева в Константинополь. 1699-1700 / Акад. М. М. Богословский; Под ред. проф. В. И. Лебедева
[М.] : Госполитиздат, 1948
245. Бородин, Александр Порфирьевич (). Письма А.П. Бородина : Полное собрание, критически сверенное с подлинными текстами : Вып. 1. (1857-1871) / С предисл. и примеч. С.А. Дианина

Москва : Гос. изд-во «Музыкальный сектор», 1927
246. Толстой,Лев Николаевич (). Письма графа Л.Н. Толстого к жене,1862-1910 гг. / [Предисл.: Софья Толстая]; Под ред. [и с предисл.] А.Е. Грузинского

Москва : Т-во скоропеч. А. А. Левенсон, 1913
- Шифр: Ильин, 282
247. Петр I (имп.). Письма и бумаги императора Петра Великого : Т.
8. Вып. 1 (Июль-декабрь 1708 г.)
Санкт-Петербург : Гос. тип., 1948
- Шифр: Ильин, 205
248. Петр I (имп.). Письма и бумаги императора Петра Великого : Т. 9. Вып. 1 (Январь-декабрь 1709 г.)

Санкт-Петербург : Гос. тип., 1950
- Шифр: Ильин, 205
249. Петр I (имп.). Письма и бумаги императора Петра Великого : Т. 7. Вып. 2 (1708)

Санкт-Петербург : Гос. тип., 1946
- Шифр: Ильин, 205
250. Александра Федоровна (имп.). Письма императрицы Александры Федоровны к императору Николаю II. В 2 т. : Т. 2. [1916 г.] / пер. с англ. В. Д. Набокова

Берлин : Слово, 1922
251. Александра Федоровна (имп.). Письма императрицы Александры Федоровны к императору Николаю II.
В 2 т. : Т. 1. [1914-1916 гг.] / пер. с англ. В. Д. Набокова
Берлин : Слово, 1922
252. Цицерон,Марк Туллий (). Письма Марка Туллия Цицерона к Аттику, близким, брату Квинту, М. Бруту : I.. Годы 68-51 / Пер. и коммент. В.О. Горенштейна

Москва; Ленинград : АН СССР, 1949
- Шифр: Ильин, 300
253. Повесть временных лет : Ч. 2. Приложения / Статьи и коммент. Д.С. Лихачева

Москва; Ленинград : АН СССР, 1950
- Шифр: Ильин, 211
254. Повесть временных лет : Ч. 1. Текст и перевод / Подгот. текста Д.С. Лихачева; Пер. Д.С. Лихачева и Б.А. Романова Под ред. чл.-кор. АН СССР В.П. Адриановой-Перетц Акад. наук СССР.

Москва; Ленинград : АН СССР, 1950
- Шифр: Ильин, 211
255.
Ремизов,Алексей Михайлович (). Повесть о двух зверях Ихнелат / Алексей Ремизов
Париж : Оплешник, 1950
- Шифр: Ильин, 228
256. Толстой,Алексей Николаевич (). Повесть о многих превосходных вещах : (Детство Никиты) / Алексей Толстой

М.;Берлин : Геликон, 1922
- Шифр: Ильин, 279
257. Сеньобос,Шарль (). Политическая история современной Европы : Эволюция партий и политических форм. 1814-1898 : Т. 1 / Пер. с фр. под ред. В. Поссе.

Санкт-Петербург : Знание, 1899
- Шифр: Ильин, 248
258. Гоголь,Николай Васильевич (). Полное собрание сочинений : В 10 т. : Т. 8. Арабески

Берлин : Слово, 1922
259.
Лесков,Николай Семенович (). Полное собрание сочинений : Т. 31. Печерские антики; Чортовы куклы
Санкт-Петербург : А.Ф. Маркс, 1903
- Шифр: Ильин, 161
260. Григорович,Дмитрий Васильевич (). Полное собрание сочинений : В 12 т. : Т. 1-2. 1. Петербургские шарманщики; Соседка; Лотерейный бал; Деревня; Антон-горемыка; Бобыль; Капельмейстер Сусликов; Четыре времени года. 2. Похождения Накатова; Неудавшаяся жизнь; Светлое Христово воскресенье; Свистулькин; Мать и дочь.

Санкт-Петербург : А.Ф. Маркс, 1896

<< 1 2 3 4 5 . . . 9 10 11 12 13 14 15 16 17 . . . 21 22 23 24 25 >>

Вечно толстая и неразборчивая Бородина

miss_tramell — 02.02.2014 Теги: Бородина От Ксении Бородиной всегда смердило быдловатой глупостью и неразборчивостью.

Причём во всём. То не может удержатьcя от романов с героями телепроекта – от деревенских подростков до ментов-взяточников:

То замуж как-то странно сбегает:

То отдохнет излишне энергично:

Её право: брезгаю, но распинать за это не буду. А вот за то, что рекламирует «похудайки», буду. Засунув в платье вялое тело, которое должно, как я поняла, символизировать «фигуру мечты», Бородина призывает последовать её примеру и похудеть за неделю.

Полюбуйтесь “фигурой мечты”, которую Бородина сулить в обмен на «похудайку»:

Пояс впивается в мягкий жир на талии, а сделанные для Терёхина сиськи не могут отвлечь внимание от “жопиных ушей”. Только посмотрите на эти “провалы”. При других ракурсах ещё и живот барабаном выпирает.

Однако Бородина, остервенело постящая фотки своей тушки, сама, похоже, ничего кроме своих новоприобретенных сисек не замечает. Ни дряблого живота, ни складок на боках:

Дамочки, хорошие мои, поймите: если ваши объемы и вес уменьшились, это не значит, что вы обзавелись хорошими фигурами.

Это – не фигура, а сутулый бесформенный аморфный коротконогий пиздец с заплывшими боками:

Если ты похудела и пришила сиськи, это ещё не значит, что ты можешь учить людей приводить себя в форму, так как у тебя формы нет.

Как была быдло-нелепухой:

Так ею и осталась. Тесто:

Форма строится годам правильным “физо” и питанием, а не мочегонными добавками и силиконом.

И это говорю вам я – женщина с силиконовой грудью, которая лично мне очень нравится. Но пришила я её на тело с 15-летним фитнес-стажем, а не на вялое уёбище.

А вот Бузова удивила и очень порадовала:

Прям зауважала её. И по фиг, что одеваться не умеет. В правильном направлении работает девушка. Пропорции — отличные, спохватилась вовремя, до «тридцатника» мышечный корсет построит, перейдет в поддерживающий режим и будет до климакса с отличной фигурой. Молодец!

Статья «Полипы толстой кишки»

Рассказывает Эльмурат Лафишев — колопроктолог, хирург

Что такое «полип»?

Полипы представляют собой разрастания внутреннего слоя стенки толстой кишки, которые выступают в просвет кишки. По форме выделяют два вида полипов— на ножке (они обычно небольшого размера, с гладкой поверхностью, напоминают гриб) и на широком основании (более плоские и крупные, стелющиеся, мягкие, «ворсинчатые»), их размеры могут варьировать от нескольких миллиметров до сантиметров. Полипы, как правило, до определенного времени не беспокоят пациента и случайно обнаруживаются при эндоскопическом (колоноскопия /ректосигмоскопия) или рентгенологическом (ирригоскопия) исследовании кишки. В некоторых случаях полипы большого размера могут вызывать дискомфорт, боли в области заднего прохода и в области живота, нарушения стула, которые могут также быть признаками других заболеваний (геморрой, анальная трещина, воспалительные заболевания кишечника и другие). В тех случаях, когда полип располагается в нижнем отделе кишечника (прямой или сигмовидной кишке), полипы могут проявляться в виде полоски крови и/или слизи на поверхности каловых масс.

Различают полипы воспалительные (появляются на месте воспаления), гиперпластические (результат избыточного разрастания нормальной ткани) и неопластические (с наличием атипичных клеток). Большинство полипов является доброкачественными образованиями, но в некоторых случаях они могут перерождаться в рак. Такая трансформация больше характерна для ворсинчатых железистых полипов.

Как диагностируют полипы толстой кишки?

Основной метод диагностики полипов — колоноскопия. Это эндоскопическое (внутрипросветное) исследование позволяет визуально оценить состояние толстой кишки практически на всем ее протяжении (около 2-х метров) и при обнаружении полипов удалить их во время процедуры и/или сделать биопсию. В ЕМС колоноскопия выполняется с использованием кратковременной седации (наркоза), что позволяет избежать неприятных ощущений, связанных с введением зонда (эндоскопа) и нагнетанием воздуха для расправления кишки.

Существуют альтернативные методы диагностики полипов толстой кишки, однако каждый из них имеет свои ограничения. Например, ректосигмоскопия позволяет осмотреть только прямую кишку и нижний отдел толстой, в то время как вероятность обнаружения полипов в других отделах кишки высока. Ирригоскопия (рентгенологическое исследование толстой кишки с использованием контрастного вещества — бариевой взвеси) позволяет обнаружить полип, но дает очень приблизительную информацию о его строении и не позволяет взять образец ткани на исследование. Поэтому при обнаружении полипов любым из этих методов пациент в обязательном порядке направляется на колоноскопию.

Почему полипы считают предраковым заболеванием?

Не все полипы перерождаются в рак, однако считается, что в 80% случаев раку толстой кишки предшествует стадия доброкачественного полипа. Поэтому полип рассматривается как предраковое заболевание, предполагающее его эндоскопические удаление (полипэктомию) с целью профилактики развития злокачественной опухоли.

Что делать, если обнаружены полипы в толстой кишке?

Традиционно, любой полип, обнаруженный при колоноскопии, должен быть удален и направлен на гистологическое исследование. Лекарственных методов лечения полипов толстой кишки не существует. Есть лишь предположения о снижении риска развития полипов при приеме определенных лекарств.

Удаление полипов толстой кишки (полипэктомия) в большинстве случаев осуществляется при помощи эндоскопического оборудования — с помощью специального инструмента, на конце которого имеется электрод в виде петли.

Иногда для удаления больших полипов может потребоваться проведение нескольких процедур. Если размеры и местоположение полипов не позволяют произвести эту манипуляцию эндоскопически , требуется хирургическое вмешательство – резекция части кишки с опухолью.

Что такое «биопсия»?

Биопсия — это получение образцов ткани слизистой оболочки толстой кишки для гистологического исследования. Не во всех случаях можно удалить полип при колоноскопии, например, если это ворсинчатый полип на широком основании, легко травмируемый и кровоточащий. Тогда врач отщипывает кусочек патологического образования, обнаруженного при колоноскопии, и направляет в лабораторию для изучения под микроскопом. Это позволяет быстро и точно поставить диагноз, в том числе и на самых ранних стадиях развития болезни. Основываясь на данных гистологического исследования, врач выбирает наилучшую в каждом клиническом случае лечебную тактику.

Стекла с образцами тканей обычно хранят для возможного последующего исследования микропрепарата в другом медицинском учреждении.

Могут ли полипы рецидивировать ?

После того, как полип удален, возможность его рецидива минимальна. Однако факторы, вызывающие образование полипов, не устранены, поэтому у некоторых пациентов полипы могут образоваться вновь. Пациенты, у которых когда-либо были обнаружены полипы толстой кишки, должны в дальнейшем проходить регулярное обследование у колопроктолога. Частота проведения колоноскопии определяется в каждом случае индивидуально, с учетом имеющихся у пациента факторов риска перерождения полипов в рак. После удаления полипов больших размеров (более 2 см), множественных (5 и больше) и ворсинчатых полипов любого размера необходимо проведение колоноскопии каждый год. Кроме того, всем пациентам старше 50 лет мы рекомендуем сделать колоноскопию в рамках скрининга колоректального рака, поскольку, как показывает статистика, начиная с этого возраста риск развития данного вида рака значительно увеличивается. В дальнейшем следует повторять скрининговые исследования в соответствии с рекомендациями лечащего врача.

ОБЗОР ОПЕРЫ

МЕТ; Необязательно быть итальянцем, чтобы играть в l’Italiana

Ключ к успеху г-жи Бородиной в комиксе состоит в том, что она серьезно относится к сюжету. Мораль оперы предполагает, что ни в одном мужчине нет ничего плохого, что не может исправить милая, выносливая итальянская девушка. Мустафе, бею (или губернатору) Алжира, наскучила его жена Эльвира, и он хочет замены, новой жены-итальянки. Однажды среди пленных, которых солдаты Мустафы обычно выхватывают из моря, появляется кандидат: нахальная и желанная Изабелла.Мустафа решает заложить Эльвиру на Линдоро, молодого итальянца, который был вынужден стать его личным рабом, не зная, что в Италии Линдоро и Эльвира были любовниками.

Госпожа Бородина ярко передала невозмутимую уверенность в себе Изабеллы. Правда, после поимки она провела несколько необходимых минут, оплакивая свои трудности в грандиозно лирической каватине Cruda sorte! Но во флоте, ослепительной кабалетте, которая последовала за ней, она выпустила потоки вызывающей колоратуры, пела с роскошным звуком и беззаботным контролем. .Вы не сомневаетесь, что она найдет хитрый выход из этой ситуации, особенно когда Мустафа влюбляется в нее с первого взгляда. А кто бы не стал? Г-н Флорес, гибкий и мальчишеский Линдоро, превосходно стоящий на ногах во время некоторых танцевальных номеров, пел с большей технической осторожностью, чем на его недавнем сольном концерте в Нью-Йорке. Своим легким, но ярким лирическим тенором он формировал прекрасные фразы легато и наслаждался звонкими верхними нотами. И, как всегда, безудержное пение соответствовало его физической энергии.

Режиссер-постановщик Дэвид Кнейс придумал для актеров несколько невозмутимых выходок. В финале первого акта в одном из тех типичных ансамблей Россини, в котором все замерзают, чтобы выразить недоумение по поводу сбивающего с толку беспорядка, в котором они находятся, были тени Джина Келли и Дональда О’Коннора, когда шесть главных героев медленно двигались по сцене в беспорядочная хореография от шлепков руками до раскачивающихся голов и бессильных ударов воздуха.

Учитывая нынешнюю напряженность в мире, было трудно не вздрогнуть от комической предпосылки оперы: встревоженный, тоталитарный мусульманский лидер ослаблен покладистой, либерально настроенной европейской женщиной.Единственный кляп, который, возможно, перешел черту этнических стереотипов, произошел, когда у Мустафы, выходящего из паровой бани, было показано, что верхняя часть туловища спереди и сзади покрыта густыми черными пучками волос. Тем не менее, как кого-то не обезоружить харизматичный, вокально сильный Мустафа из ветерана итальянского баса Ферруччо Фурланетто? Также выделялись сопрано Любовь Петрова в роли Эльвиры и баритон Эрл Патриарко в роли Таддео, старого итальянца, тоскующего по Изабелле.

В финальной сцене сумасбродства Линдоро признает все более доверчивого Мустафу избранному отряду итальянцев под названием Паппатачи (сборище итальянских пленников).Они знакомят Мустафу с самым священным ритуалом Паппатачи: обедом из пасты и кьянти. Когда Таддео пытается предупредить Мустафу, что Изабелла и Линдоро собираются сбежать, алжирский бей, копаясь в своих спагетти, как настоящий итальянец, говорит старику расслабиться, сесть и что-нибудь съесть.

Влияние вязкой и проводящей жидкости на характеристики щелевой акустической волны

DOI: 10.1016 / j.ultras.2017.07.011. Epub 2017 18 июля.

Принадлежности Расширять

Принадлежности

¹ Институт радиотехники и электроники им. Котельникова РАН, Саратовский филиал, 410019, Саратов, Россия.Электронный адрес: [email protected].
² Институт радиотехники и электроники им. А.А. Котельникова РАН, Саратовский филиал, 410019, Саратов, Россия.

Элемент в буфере обмена

И. А. Бородина и др. Ультразвук.2018 Янв.

Показать детали Показать варианты

Показать варианты

Формат АннотацияPubMedPMID

DOI: 10.

1016 / j.ultras.2017.07.011.Epub 2017 18 июля.

Принадлежности

¹ Институт радиотехники и электроники им. Котельникова РАН, Саратовский филиал, 410019, Саратов, Россия. Электронный адрес: [email protected].
² Институт радиотехники и электроники им. А.А. Котельникова РАН, Саратовский филиал, 410019, Саратов, Россия.

Элемент в буфере обмена

Полнотекстовые ссылки Опции CiteDisplay

Показать варианты

Формат АннотацияPubMedPMID

Абстрактный

Влияние жидкости с различными значениями проводимости, диэлектрической проницаемости и вязкости на характеристики щелевой моды в структуре, состоящей из линии задержки с распространяющимся сдвигом — горизонтальной акустической волны нулевого порядка (SH ₀) и верхней пьезоэлектрической пластины. разделенных воздушным зазором.Линия задержки из пластины ниобата лития Y-X толщиной 0,2 мм содержала два встречно-штыревых преобразователя для возбуждения и приема акустической волны в диапазоне частот 2,6–3,8 МГц. Верхняя пластина представляла собой пластину из ниобата лития Z-X толщиной 0,5 мм. Возбуждение щелевой моды приводило к появлению резких резонансных пиков на частотных зависимостях вносимых потерь и фазы выходного сигнала. Установлено, что глубина и частота этих пиков зависят от параметров контакта жидкости с верхней пластиной.Показана возможность использования щелевого режима в остроконечной структуре для идентификации жидкостей с различными значениями проводимости, вязкости и диэлектрической проницаемости. Приведены качественные объяснения полученных экспериментальных результатов.

Ключевые слова: Проводимость; Проницаемость жидкости; Пьезоэлектрическая пластина; Резонансные пики частотной зависимости вносимых потерь; Shear — горизонтальная акустическая волна нулевого порядка; Слот-режим; Вязкость.

Процитировано

1 артикул

Акустический щелевой датчик для быстрого обнаружения коронавирусов.
Гулий О, Зайцев Б, Теплых А, Балашов С, Фомин А, Староверов С, Бородина И. Гулий О. и др. Датчики (Базель). 2021 5 марта; 21 (5): 1822. DOI: 10,3390 / s21051822. Датчики (Базель). 2021 г. PMID: 33807879 Бесплатная статья PMC.

Типы публикаций

Поддержка исследований, за пределами США. Правительство

LinkOut — дополнительные ресурсы

Источники полных текстов
Другие источники литературы
Разное

[Икс]

цитировать

Копировать

Формат: AMA APA ГНД NLM

Массивно-параллельное секвенирование опухолевых тканей, залитых формальдегидом с фиксированным парафином (FFPE), для анализа числа копий и мутаций

Абстрактные

Фон

Программы повторного секвенирования рака основаны на ДНК, выделенной из свежезамороженных тканей, подготовка которой сочетается с дополнительными усилиями по консервации. Образцы тканей в отделениях патологии обычно хранятся в виде образцов, фиксированных формалином и залитых парафином (FFPE), и их использование откроет доступ к различным клиническим испытаниям. Однако препарат FFPE несовместим со многими последующими методами молекулярной биологии, такими как методы амплификации на основе ПЦР и исследования экспрессии генов.

Методология / основные выводы

Здесь мы исследовали требования к качеству образцов тканей FFPE для массовых параллельных подходов короткого чтения секвенирования.Мы оценили ключевые переменные процессов префиксации, связанных с фиксацией и постфиксации, которые происходят в обычном медицинском обслуживании (например, степень автолиза, продолжительность фиксации и хранения). Мы также исследовали влияние времени хранения тканей на качество секвенирования с использованием материала возрастом до 18 лет. Наконец, мы проанализировали нормальные и опухолевые ткани груди, используя метод секвенирования путем синтеза (Illumina Genome Analyzer, Solexa), чтобы одновременно локализовать изменения числа копий в масштабе всего генома и обнаружить геномные вариации, такие как замены и точечные делеции и / или вставки в ткани FFPE. образцы.

Выводы / Значение

Применение методов секвенирования второго поколения на небольших количествах материала FFPE открывает возможность анализа образцов тканей, которые были собраны во время рутинной клинической работы, а также в контексте клинических испытаний. Это особенно важно, поскольку образцы FFPE широко доступны после хирургических резекций опухолей и гистопатологической диагностики и включают ткань из предшествующих поражений, первичных опухолей, лимфогенных и / или гематогенных метастазов.Крупномасштабные исследования с использованием этого тканевого материала приведут к лучшему прогнозированию прогноза онкологических больных и раннему выявлению пациентов, которые будут реагировать на терапию.

Образец цитирования: Schweiger MR, Kerick M, Timmermann B, Albrecht MW, Borodina T, Parkhomchuk D, et al. (2009) Полногеномное массивно-параллельное секвенирование опухолевых тканей, содержащих фиксированный парафин формальдегида (FFPE), для анализа числа копий и мутаций. PLoS ONE 4 (5): e5548.https://doi.org/10.1371/journal.pone.0005548

Редактор: И. Кинг Джордан, Технологический институт Джорджии, Соединенные Штаты Америки

Поступила: 3 февраля 2009 г .; Одобрена: 1 апреля 2009 г .; Опубликован: 14 мая 2009 г.

Авторские права: © 2009 Schweiger et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа была поддержана Австрийской программой генома GEN-AU и Обществом Макса Планка. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Развитие методов секвенирования второго поколения (секвенирование 454, анализатор генома Illumina (Solexa), платформа SOLiD, технология Polonator и HeliScope Single Molecule Sequencer) позволяет нам исследовать многие «-омы» материала пациентов, такие как геномы, транскриптомы, эпигеномы и миРНКомы [1], [2], [3].Методы секвенирования основаны на амплификации отдельных молекул ДНК и, таким образом, предоставляют в некотором смысле «цифровую» информацию [4], [5], [6]. Они значительно менее подвержены ошибкам «загрязнения» между нормальными и больными тканями и особенно полезны для анализа опухолевых тканей [7].

На сегодняшний день программы секвенирования рака основаны на ДНК, выделенной из свежезамороженных тканей, доступ к которой может быть ограничен [8]. Использование консервированного материала, то есть из банков тканей, могло бы помочь избежать этого ограничения и сделать возможным повторный анализ различных клинических испытаний.Распространенный и удобный способ хранения салфеток в течение длительного времени — зафиксировать их в формальдегиде и залить парафином. Большие коллекции больных и нормальных тканей хранятся в больницах и являются отличным источником для молекулярно-генетических исследований. Однако извлечение нуклеиновых кислот из этих образцов тканей является сложной задачей. Формальдегид не только приводит к сшивкам между ДНК или РНК и белками, но также приводит к получению фрагментированной ДНК. Оба фактора ограничивают различные генетические методы, такие как полимеразные цепные реакции, из-за низкого количества, чистоты и длины РНК и ДНК.

Чтобы воспользоваться преимуществами сохраненных тканей пациента, мы исследовали требования к качеству образцов тканей, фиксированных формальдегидом и залитых парафином (FFPE), и разработали протокол для применения массовых параллельных подходов к короткочтенному секвенированию. Мы оценили ключевые переменные процессов префиксации, связанных с фиксацией и постфиксации, которые происходят в повседневном медицинском обслуживании (например, степень автолиза, продолжительность фиксации и хранения) (Таблица 1). Мы также исследовали влияние времени хранения тканей на качество секвенирования с использованием материала возрастом до 18 лет.Наконец, мы проанализировали нормальные и опухолевые ткани молочной железы с помощью технологии секвенирования путем синтеза (анализатор генома Illumina) для одновременной локализации изменений числа копий в масштабе всего генома и для обнаружения геномных вариаций, таких как замены и точечные делеции и / или вставки в образцах тканей FFPE.

Результаты

Полногеномное параллельное секвенирование мгновенно замороженной ДНК ткани и ДНК FFPE

Для сравнения ДНК ткани мгновенной заморозки и FFPE мы подготовили образцы ткани груди от одного пациента, разделили ткань на семь равных частей и сохранили их либо в мгновенном замораживании, либо в виде ткани FFPE с временем ишемии от 20 мин.до более 6 часов и время фиксации от 24 до 72 часов (Таблица 1). После шести месяцев хранения ДНК была извлечена, качество контролировалось с помощью биоанализатора и секвенировано с помощью технологии секвенирования путем синтеза (SBS). Тестовые экстракции ДНК с использованием наборов для экстракции ДНК QIAamp, Arcturus PicoPure и Macherey-Nagel дали одинаково успешные результаты секвенирования, поэтому дальнейшие эксперименты были выполнены в соответствии с протоколом Qiagen (данные не показаны). Условия хранения тканей соответствовали тем, которые наиболее часто используются в стандартных протоколах отделения патологии.В результате секвенирования было получено от 3 до 5 миллионов считываний с 2-3 миллионами картируемых уникальных фрагментов на образец (таблица 2). Для визуализации распределения фрагментов мы разделили каждую хромосому на 300 частей равного размера («интервалы») и вычислили количество фрагментов для каждого интервала. Используя эти 300 бинов на хромосому, мы обнаружили очень похожее распределение фрагментов по всем хромосомам (рис. 1) для мгновенной заморозки, а также для ДНК ткани FFPE. Сравнивая количество считываний на установленную единицу (бункер) для мгновенно замороженной ткани и ткани FFPE в качестве меры когерентности охвата, мы вычислили коэффициент корреляции Пирсона и нашли медианную корреляцию количеств двойных связей, равную 0. 82 для быстрозамороженных тканей и тканей FFPE. Мы также использовали размеры бункеров генома 50, 100, 250, 500 и 1000 КБ и стратифицировали коэффициенты корреляции по GC-содержанию бинов (дополнительный рисунок S1). Бункеры с наиболее распространенным содержанием GC около 40% имеют значения корреляции около 0,97. Зависимость значений корреляции от содержания GC уменьшается с увеличением размера бина и, следовательно, вероятно, является следствием низкого покрытия. Подобные результаты наблюдались для технических повторений (дополнительный рисунок S2).В обоих случаях большинство коэффициентов корреляции выше 0,6, и изменчивость уменьшается с увеличением размеров бинов. Таким образом, общее количество фрагментов, выровненные фрагменты и хромосомный охват аналогичны для мгновенно замороженных тканей и тканей FFPE, что доказывает, что свежие ткани FFPE могут быть использованы для подходов к высокопроизводительному повторному секвенированию.

Рис. 1. Распределение фрагментов секвенирования для ДНК, выделенной из мгновенно замороженных тканей молочной железы и тканей молочной железы FFPE.

(A) Показано распределение фрагментов секвенирования по хромосоме 1 с использованием трех различных методов сохранения ткани. Слева: замороженные ткани, в центре: ткань FFPE за 20 мин.ишемия, и справа: ткань FFPE с 60 мин. ишемия. Красная линия показывает средний охват генома. (B) Коэффициент хромосомного покрытия быстро замороженных препаратов по сравнению с препаратами FFPE нормальных образцов ткани. Каждая хромосома разбита на бункеры равного размера по 50 КБ. Отношения log2 уникальных считываний на ячейку были нанесены на график по всем хромосомам.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0005548.g001

Секвенирование консервированного тканевого материала возрастом до 18 лет

Большинству тканей, хранящихся в биобанках, несколько лет, а клинические испытания проводились не менее чем через десять лет.Следовательно, было бы очень желательно включить образцы тканей, которые хранились долгое время, для методик полногеномного секвенирования. Кроме того, исследования редких клинических заболеваний, таких как синдром фон Хиппеля-Линдау или Ли-Фраумени, станут более осуществимыми. Секвенирование путем синтеза (SBS) мгновенно замороженных и консервированных FFPE образцов ткани, которым было 14 и 18 лет, привело к примерно 1 миллиону и 4 миллионам выровненных считываний с равномерным распределением по всем хромосомам. Было обнаружено, что медиана корреляции количеств мгновенного замораживания и ткани FFPE очень похожа на недавние значения ткани на уровне 0.84. Таким образом, время хранения ткани имеет незначительное влияние на качество последовательности. Было бы интересно проанализировать таким же образом и более старый материал.

Обнаружение CNA и нуклеотид-специфических геномных изменений в опухолях молочной железы

В дополнение к образцам нормальной ткани мы также использовали образцы опухолевой ткани для исследования изменений числа копий (CNA) и частоты мутаций. CNA являются полезными параметрами для классификации опухолей и, как недавно было введено в процедуры генетического консультирования, в качестве диагностического инструмента для детей с умственной отсталостью неизвестного происхождения [9], [10]. Идентификация опухолевых мутаций имеет важное значение для планирования рассчитанной химиотерапии. Например, ингибиторы тирозинкиназы (TKI), такие как гефитиниб и эрлотиниб, эффективны только у пациентов без мутаций K-ras [11]. До сих пор для обнаружения CNA и мутаций требовалось использовать два разных метода в рутинной клинической диагностике: CNA определялись с помощью массивов сравнительной геномной гибридизации (CGH), а мутации обнаруживались обычными методами секвенирования.Благодаря мощности методов секвенирования второго поколения оба набора информации будут получены в одном процессе. Наряду с этим мы предоставляем здесь комбинированные данные для тканей опухоли молочной железы, как мгновенно замороженных, так и тканей FFPE, с использованием единых подходов SBS. Для этих экспериментов ткани опухоли груди были обогащены по крайней мере до 70% содержания опухолевых клеток путем макродиссекции. Затем были подготовлены и секвенированы библиотеки ДНК для анализатора генома Illumina (Solexa). Мы получили примерно 1 миллион чтений с 0.5 миллионов уникальных отображаемых фрагментов. Используя программное обеспечение для ДНК-скопии в R [12], мы обнаружили прирост ДНК на 8-й и 20-й хромосомах (рис. 2А). Для хромосомы 8 точное картирование изменений числа копий выявило усиление ДНК между хромосомными локализациями 90,32 МБ и 146,27 МБ с небольшим разрывом между 137,06 МБ – 139,4 МБ (рис. 2B). Обнаруженные CNA были идентичны для мгновенно замороженного материала и материала FFPE. Они также соответствовали частым изменениям, обнаруживаемым в опухолях молочной железы в целом, что подчеркивает надежность техники секвенирования [13].

Рис. 2. Вариации количества копий в ДНК из быстро замороженных и FFPE раковых тканей по сравнению с нормальной тканью.

(A) Коэффициент покрытия фрагментов ДНК опухолью по сравнению с нормальной тканью на пяти хромосомах. Ось абсцисс представляет положение в геноме. По оси ординат отложено отношение log2 фрагментов на ячейку опухоли по сравнению с нормальной тканью. Номера фрагментов рассчитаны на сегмент размером 120 Кб. Красные линии изображают локальные средние значения, рассчитанные с помощью ДНК-скопии [12]. Выделены местные различия в количестве копий, превышающие два стандартных отклонения.(B) Подробный вид распределения фрагментов хромосомы 8 из мгновенно замороженных и FFPE образцов ткани рака молочной железы.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0005548.g002

При использовании одной восьмой емкости каждого цикла секвенирования анализатора генома Illumina (Solexa) разрешение в отношении CNA составляет примерно 15 КБ с 10 фрагментами на ячейку. и может быть легко улучшена дополнительным секвенированием. Для сравнения, разрешение массива 244 Кбайт от Agilent, часто используемого в клинических условиях, составляет примерно 45 Кбайт с 5 олигонуклеотидами.В дополнение к информации CNA, секвенирование второго поколения позволяет исследовать геномные изменения, такие как замены, делеции и вставки, и поэтому в будущем станет основным инструментом рутинной клинической диагностики.

Помимо CNA, мы также рассчитали скорости обмена нуклеотидов (NE) для всех образцов. В целом, мы обнаружили вероятность NE от 0,1 до 0,5% на считывание выровненной последовательности (таблица 2). Приблизительно от 12% до 33% обнаруженных NE находятся в dbSNP и поэтому могут быть классифицированы как известные SNP [14].Мы также сравнили NE попарно с учетом как минимум 8-кратного охвата и идентифицировали до 90% «общих SNP» для образцов ID-02.15 и ID-02.48 (таблица 2). Абсолютное количество названных SNP, по-видимому, выше для тканей FFPE с более низкой частотой идентифицированных известных SNP. Скорее всего, это связано с повреждением ДНК образцов FFPE. При увеличении глубины последовательности образцов перекрытие между NE для мгновенной заморозки и ДНК FFPE увеличивается, что позволяет предположить, что с увеличением покрытия последовательности частота ложноположительных вызовов в FFPE может быть минимизирована (дополнительный рисунок S3).Количество конкретных ставок NE, таких как от A до G или от C до A, варьируется от 5% до 14%. Однако количество конкретных скоростей NE было сопоставимо в различных настройках секвенирования со средним стандартным отклонением 0,7%. Воспроизводимость конкретных скоростей NE также была обнаружена при сравнении ДНК ткани мгновенной заморозки и FFPE, как показано на рисунке 3 и в таблице 3. Более высокая вариабельность NE в образцах ткани FFPE в значительной степени связана с увеличенным временем фиксации, поскольку мы включили все доступные данные секвенирования из таблицы 1 в наших расчетах.Для обоих методов подготовки ткани мы обнаружили соответствующие уровни NE, что позволяет предположить, что ткани FFPE также могут использоваться для мутационных анализов. Фильтруя гомозиготные мутации, мы обнаружили примерно 5% всех SNP со степенью охвата секвенированием более чем в 8 раз, и мы смогли повторно обнаружить примерно 90% мутаций как в препаратах ткани мгновенного замораживания, так и в препаратах FFPE. Как и ожидалось, абсолютное количество известных SNP увеличивалось с увеличением количества фрагментов секвенирования, выровненных как для мгновенно замороженных, так и для FFPE-тканей. Это еще раз демонстрирует применимость и масштабируемость методов секвенирования второго поколения для обнаружения мутаций в тканях FFPE.

Рис. 3. Скорость обмена нуклеотидов в ДНК из быстро замороженных тканей и тканей FFPE.

Используя программное обеспечение Maq 0.7.1, нуклеотидные обмены были рассчитаны для всех возможных переходов (например, A> G, A> C) для четырех мгновенно замороженных (SF) и пяти образцов ткани FFPE [18]. Показаны квадратные блоки с показателями NE в виде долей всех мутаций, обнаруженных в образце пациента.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0005548.g003

В совокупности наши результаты показывают, что ДНК, выделенная из ткани FFPE, может использоваться для подходов повторного секвенирования второго поколения. Мы также продемонстрировали возможность сбора информации о CNA и мутациях с помощью одной попытки секвенирования из быстро замороженных, а также FFPE-консервированных типов тканей и доказали, что данные, полученные с помощью обоих методов подготовки, имеют сопоставимое качество.

Обсуждение

В этой статье мы исследовали, можно ли использовать новые и заархивированные ткани FFPE в дополнение к быстрозамороженным тканям для массового параллельного секвенирования и какие требования должны быть выполнены для их использования.Мы пришли к выводу, что ДНК, извлеченная из тканей FFPE, может быть использована для секвенирования путем синтеза (SBS) и что не увеличивает время ишемии с 20 минут. до более 360 мин. ни более длительное время фиксации до 72 часов не играет большой роли в качестве секвенирования (рис. 1, таблица 1). В целом процент уникальных отображаемых считываний находился в одном диапазоне для мгновенно замороженных и залитых парафином образцов. В общем, мы видим вариации отображаемых считываний независимо от источника ДНК. Однако для образцов FFPE вариабельность также может быть частично из-за повреждений ДНК, приводящих к большему количеству фрагментов с одним или несколькими несовпадениями.Несмотря на то, что абсолютное количество уникальных выравниваний немного меньше для ДНК, выделенной из тканей FFPE, фрагменты равномерно распределены по геному и покрывают все хромосомы. Кроме того, как было продемонстрировано, образцы тканей FFPE, хранящиеся более 18 лет в отделениях патологии, могут быть успешно секвенированы и интегрированы в программы повторного секвенирования. Это дает прекрасную возможность оценить образцы тканей, которые были собраны и хранятся в биобанках для клинических испытаний противораковых препаратов.Например, стало очевидным, что ответ на ингибиторы рецепторных тирозинкиназ или ингибиторы нижестоящих сигнальных молекул зависит не только от экспрессии самого лекарства-мишени, но также от наличия мутаций или полиморфизмов в функциональных доменах мишени [15 ] и его нисходящая сигнальная сеть [11].

Сила крупномасштабных методов секвенирования заключается не только в большой производительности секвенирования, но и в возможности получения разноплановых данных геномного, эпигеномного и транскриптомного происхождения.

В качестве примера типа информации на основе генома, которую можно получить, мы представили успешный расчет изменений числа копий и мутаций из мгновенно замороженной ткани, а также из ткани опухоли молочной железы FFPE. Изменения числа копий в ткани рака молочной железы были обнаружены одинаково хорошо как в мгновенно замороженной, так и в ткани, приготовленной с помощью FFPE (рис. 2).

Проведенное пациентом сравнение быстро замороженных тканей и тканей FFPE в отношении названных мутаций продемонстрировало соответствие от 81 до 95% мутаций, обнаруженных в обоих типах препаратов, при восьмикратном охвате.Сопоставимые скорости и частоты мутаций для каждого перехода и трансверсии снова продемонстрировали воспроизводимость результатов секвенирования в различных условиях подготовки (таблица 2). Предел обнаружения зависел от степени охвата, рассчитанной для технических копий мгновенно замороженных тканей и тканей FFPE (данные не показаны), что указывает на то, что количество последовательно обнаруживаемых мутаций в обоих тканевых препаратах может быть увеличено более чем на 90%.

Ткань, фиксированная формалином и залитая парафином, не использовалась в протоколах крупномасштабного секвенирования. Наше исследование продемонстрировало, что его можно надежно использовать для решения важных клинических проблем, таких как комбинированное исследование CNA и SNP в немногочисленных образцах тканей.

Наше наблюдение о том, что длительное хранение образцов не оказывает значительного отрицательного влияния на результаты секвенирования, означает, что можно повторно оценить образцы FFPE, полученные от участников предыдущих клинических испытаний. Таким образом, могут быть созданы биомаркеры на основе последовательности ДНК, которые различают респондентов и не отвечающих на терапию, тем самым способствуя более целенаправленному и более эффективному применению новых терапевтических методов лечения.Кроме того, определение CNA, а также мутаций важно не только для диагностики опухолей, но и для диагностики разнообразных генетических нарушений, связанных с делециями или приростом ДНК, таких как трисомия 21 и синдром микроделеций CATCh32 или с мутациями, такими как синдром Марфана.

Таким образом, наши результаты показывают, что ДНК, выделенная из ткани FFPE, может быть использована для анализа количества копий, а также анализа мутаций. Определение CNA и мутаций с помощью одного усилия по секвенированию делает наш метод очень эффективным с точки зрения времени и денег.Применимость и масштабируемость методов секвенирования второго поколения является важным усовершенствованием для анализа заархивированного тканевого материала из биобанков и приведет к применению крупномасштабных методов секвенирования в качестве рутинных диагностических инструментов в общем генетическом консультировании и онкологии.

Материалы и методы

Заявление об этике

Исследование было одобрено этическим комитетом Медицинского университета Граца (этическое заявление № 20-066, подписанное проф.Доктор П. Rehak и профессор DDr. H.P. Капфхаммер). На новые образцы пациенты дали свое письменное информированное согласие. Для старых образцов (14 и 18 лет) информированное согласие отсутствовало, поэтому все образцы и медицинские данные, использованные в этом исследовании, были необратимо анонимны.

Хранение тканей

Человеческие ткани, полученные во время операции, были разделены на несколько аликвот, которые либо мгновенно замораживали в метилбутане при температуре жидкого азота, либо фиксировали в 4% буфере (pH 7. 4) формальдегид на 24 и 72 часа и заключенный в парафин с использованием автоматической системы заливки сразу после операции (время холодной ишемии <20 минут). Для имитации воздействия холодной ишемии образцы перед замораживанием выдерживали 1 час, 3 часа и 6 часов в увлажненной камере при комнатной температуре. Влияние длительного хранения (1 год по сравнению с 14 и 18 годами) образцов FFPE исследовали на образцах, взятых из банка тканей Института патологии [16].

Препарат ДНК

Из замороженных образцов ткани были изготовлены криосрезы толщиной 3 мкм и окрашены гематоксилин-эозином для оценки содержания опухолевых клеток.Дополнительные криосрезы были собраны и обработаны для выделения ДНК с использованием набора QIAamp DNA Mini (Qiagen) в соответствии с инструкциями производителя.

ДНК

была выделена из образцов FFPE после экстракции парафиновых срезов толщиной 3 мкм в ксилоле и с использованием набора QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen) PicoPure DNA Extraction Kit (Molecular Devices) и протокола экстракции ДНК Macherey-Nagel в соответствии с тем же протоколом, что и применяемый для замороженных образцов.

Подготовка и секвенирование библиотеки анализатора генома Illumina (Solexa)

Подготовка библиотек и секвенирование выполняли с использованием платформы для секвенирования Solexa (GenomeAnalyzer, Illumina) в соответствии с инструкциями производителя.Мы случайным образом разделили 1,5 мкг геномной ДНК на фрагменты менее 800 п.н. Фрагментированную ДНК репарировали по концам с использованием ДНК-полимеразы Т4 и полимеразы Кленова с полинуклеотидкиназной активностью Т4 для притупления и фосфорилирования 5′-концов. 3′-выступ был создан с использованием экзонуклеазо-отрицательного фрагмента Кленова, и адаптерные олигонуклеотиды Illumina были лигированы с липкими концами. Продукты лигирования очищали электрофорезом в агарозном геле и обогащали успешно лигированными фрагментами с помощью 18-цикловой ПЦР с использованием праймеров для секвенирования на обоих концах.Затем продукты лигирования использовали для создания кластеров и секвенирования путем синтеза с использованием анализатора генома Illumina (Solexa).

Анализ данных биоинформатики

Анализ изображений

и определение оснований были выполнены с использованием Firecrest 1.9.5_14 и Bustard 1.9.5_14, а считанные данные были сопоставлены с геномом человека (NCBI36) с использованием Bowtie 0.9.7.1 [17]. Хромосомный охват определялся путем разделения каждой хромосомы на области (интервалы) одинакового размера и подсчета считываний, которые одинаково отображались в каждом интервале.Сравнение покрытия различных протоколов приготовления FFPE было визуализировано с использованием 300 бункеров на хромосому.

Для сравнения охвата чтением различных образцов по всем хромосомам мы подсчитали однозначно отображенные чтения для пяти различных размеров бинов (50 Кбайт, 100 Кбайт, 250 Кбайт, 500 Кбайт, 1 Мбайт). В качестве метрики сравнения мы использовали коэффициент корреляции Пирсона для подсчетов на ячейку. Подробно мы определили коэффициент Пирсона для каждой хромосомы отдельно и рассчитали медианное значение по всем хромосомам.Стратификация корреляции двойных связей по содержанию GC была выполнена путем расчета коэффициента корреляции Пирсона по всем ячейкам определенного содержания GC независимо от хромосомного положения.

Анализ числа копий

был выполнен в R с использованием пакета DNAcopy [12]. Вкратце, частоты считывания ДНК были определены для бинов размером 120 Кбайт. Отношение частот log2 соответствующих интервалов было вычислено для опухоли по сравнению с нормальной тканью. Медиана отношений была центрирована до нуля в соответствии с экспериментом. Логарифмические отношения были сглажены ДНК-копией с использованием значений по умолчанию, а вариация числа копий была обнаружена ДНК-копией с использованием порога в два стандартных отклонения.

Общие нуклеотидные обмены были рассчитаны с использованием программного обеспечения Maq 0.7.1 с параметрами по умолчанию для шагов cns2snp и SNPfilter [18]. Затем с пациентами сравнивали гомозиготные мутации, обнаруженные в быстро замороженном и приготовленном FFPE материале с по меньшей мере 8-кратным охватом в обоих образцах. Для определения предела обнаружения гомозиготные мутации в технических репликах для мгновенного замораживания и FFPE сравнивали.

Вспомогательная информация

Рисунок S1.

Зависимость коэффициентов корреляции покрытия мгновенно замороженных тканей и тканей FFPE от содержания GC и размера бункера. Содержание GC и соответствующие коэффициенты корреляции покрытия для бункеров размером 50, 100, 250, 500 и 1000 Кб были рассчитаны для мгновенно замороженных тканей и тканей FFPE. Показан один график для каждого размера бина с содержанием GC на оси x, коэффициентами корреляции Пирсона в виде кружков и содержанием GC на распределение бинов в виде гистограммы. Локально взвешенная полиномиальная регрессия (LOESS) была приспособлена для визуализации тенденций.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0005548.s001

(0,51 МБ TIF)

Рисунок S2.

Зависимость коэффициентов корреляции покрытия от двух технических реплик от содержимого GC и размера бина. Содержание GC и соответствующие коэффициенты корреляции покрытия для бинов размером 50, 100, 250, 500 и 1000 Кб были рассчитаны для двух технических повторений. Показан один блот для каждого размера бина с содержанием GC на оси x, коэффициентами корреляции Пирсона в виде кружков и содержанием GC на распределение бинов в виде гистограммы.Локально взвешенная полиномиальная регрессия (LOESS) была приспособлена для визуализации тенденций.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0005548.s002

(0,50 МБ TIF)

Рисунок S3.

Количество SNP, общих для FFPE и быстрозамороженных препаратов, увеличивается с увеличением охвата. Пересечения между двумя выборками рассчитывались с учетом 4-кратного, 8-кратного и 12-кратного покрытия. Открытый треугольник: ID1.0 против ID1.3, закрашенные круги: ID1.0 против ID1.1, закрытый прямоугольник: ID22.1 против ID 22.2, открытый прямоугольник: ID-02.15 против ID-02.48, звезды: ID-02.14 против ID-02.58.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0005548.s003

(0,11 МБ TIF)

Благодарности

Мы благодарим D. Pabst и I. Kufferath за отличную техническую помощь и J. Altreuter за критическое прочтение рукописи.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: MRS KZ HL. Проведены эксперименты: MRS BT TB. Проанализированы данные: MRS MK BT MWA DP KZ HL.Внесенные реактивы / материалы / инструменты анализа: MRS MK BT MWA TB DP KZ HL. Написал статью: MRS MK KZ.

Ссылки

1. Shendure J, Ji H (2008) Секвенирование ДНК следующего поколения. Nat Biotechnol 26: 1135–1145.
2. Велкулеску В.Е., Кинзлер К.В. (2007) Анализ экспрессии генов переходит в цифровой формат. Nat Biotechnol 25: 878–880.
3. Sultan M, Schulz MH, Richard H, Magen A, Klingenhoff A и др. (2008) Глобальный взгляд на активность генов и альтернативный сплайсинг путем глубокого секвенирования человеческого транскриптома.Наука 321: 956–960.
4. Маргулис М., Эгхолм М., Альтман В.Е., Аттия С., Бадер Дж. С. и др. (2005) Секвенирование генома в микроизготовленных пиколитровых реакторах высокой плотности. Природа 437: 376–380.
5. Кэмпбелл П.Дж., Стивенс П.Дж., Pleasance ED, O’Meara S, Li H и др. (2008) Идентификация соматически приобретенных перестроек при раке с использованием массового параллельного секвенирования парных концов всего генома. Нат Генет 40: 722–729.
6. Shendure J, Porreca GJ, Reppas NB, Lin X, McCutcheon JP и др.(2005) Точное мультиплексное секвенирование полонии эволюционировавшего бактериального генома. Наука 309: 1728–1732.
7. Томас Р.К., Бейкер А.С., Дебиаси Р.М., Винклер В., Лафрамбуаз Т. и др. (2007) Профилирование высокопроизводительных мутаций онкогенов при раке человека. Нат Генет 39: 347–351.
8. Гилберт М.Т., Хаселкорн Т., Банс М., Санчес Дж.Дж., Лукас С.Б. и др. (2007) Выделение нуклеиновых кислот из фиксированных, залитых парафином тканей — какие методы полезны, когда? PLoS ONE 2: e537.
9. Зибер О.М., Хейниманн К., Томлинсон И.П. (2003) Геномная нестабильность — двигатель онкогенеза? Nat Rev Cancer 3: 701–708.
10. Солинас-Толдо С., Лампель С., Стилгенбауэр С., Николенко Дж., Беннер А. и др. (1997) Сравнительная геномная гибридизация на основе матриц: биочипы для выявления геномного дисбаланса. Гены Хромосомы Рака 20: 399–407.
11. Le Tourneau C, Vidal L, Siu LL (2008) Прогресс и проблемы в идентификации биомаркеров для противоопухолевых агентов EGFR и VEGFR.Обновление «Устойчивость к наркотикам» 11: 99–109.
12. Venkatraman ES, Olshen AB (2007) Более быстрый алгоритм круговой двоичной сегментации для анализа массивов данных CGH. Биоинформатика 23: 657–663.
13. Хаверти П.М., Фридлянд Дж., Ли Л., Гетц Дж., Бероухим Р. и др. (2008) Геномный анализ и анализ экспрессии с высоким разрешением изменений числа копий в опухолях молочной железы. Гены Хромосомы Рак 47: 530–542.
14. Шерри С.Т., Уорд М.Х., Холодов М., Бейкер Дж., Фан Л. и др.(2001) dbSNP: база данных генетических вариаций NCBI. Nucleic Acids Res 29: 308–311.
15. Эберхард Д.А., Джонсон Б.Е., Амлер Л.С., Годдард А.Д., Хелденс С.Л. и др. (2005) Мутации рецептора эпидермального фактора роста и KRAS являются прогностическими и прогностическими индикаторами у пациентов с немелкоклеточным раком легкого, получавших только химиотерапию и в комбинации с эрлотинибом. Дж. Клин Онкол 23: 5900–5909.
16. Асслабер М., Абуджа П.М., Старк К., Эдер Дж., Готвейс Х. и др.(2007) Австрийский банк тканей Genome (GATiB). Патобиология 74: 251–258.
17. Langmead B, Trapnell C, Pop M, Salzberg SL (2009) Сверхбыстрое и эффективное с точки зрения памяти выравнивание коротких последовательностей ДНК с геномом человека. Геном Биол 10: R25.
18. Li H, Ruan J, Durbin R (2008) Отображение коротких считываний секвенирования ДНК и вызова вариантов с использованием показателей качества сопоставления. Genome Res 18: 1851–1858.

Частотная зависимость вносимых потерь для (Y-X) — (128 ° Y-X)…

Context 1

… также выполнил численные расчеты фазовой скорости и коэффициента электромеханической связи акустических волн для этих структур, используя процедуру расчета характеристик акустических волн, распространяющихся в пьезоэлектрических пластинах, которая была подробно описано в [4]. Расчеты показали, что должны быть распространяющиеся волны, которые можно разделить на три группы. Первая группа может включать непьезоактивные волны, распространяющиеся независимо друг от друга в каждой из пластин.Эти волны не связаны друг с другом. Во вторую группу входят волны, пьезоактивные в одной пластине и непьезоактивные в другой. Они также независимы. Третья группа состоит из щелевых или связанных волн, связанных между собой электрическими полями, проникающими через зазор. Проведено сравнение расчетных данных с результатами экспериментов. Это сравнение показало, что экспериментально наблюдаемые пики соответствуют щелевым волнам в рассматриваемых структурах.Значения фазовой скорости и коэффициента электромеханической связи, рассчитанные для структуры (Y-X) — (Z-X) LiNbO 3, приведены в таблице в качестве примера. Здесь же указаны значения, найденные экспериментально. Видно хорошее согласие теории и эксперимента для щелевой волны со сдвиговой горизонтальной поляризацией (SH 0). Аналогичная ситуация наблюдалась для всех рассмотренных выше структур. В таблицах II, III и IV представлены результаты расчетов и измерений щелевых волн для других ориентаций пластины II.Полученные результаты продемонстрировали два условия, которые должны выполняться для возбуждения щелевой волны в структуре двух параллельных пьезоэлектрических пластин, разделенных зазором: 1) волны, распространяющиеся в каждой из пластин, должны быть пьезоактивными; 2) скорости волн должны быть примерно одинаковыми. Этот вывод был подтвержден дополнительным экспериментом, в котором пластина 128 Y-X LiN-bO 3 использовалась в качестве пластины II. Из таблицы V видно, что в этой пластине нет пьезоактивных волн со скоростями порядка 4200-4500 м / с.Скорость единственной пьезоактивной волны A 0 существенно меньше. Поэтому резонансных пиков на АЧХ исследуемой структуры в данном случае не наблюдалось (рис. 4). Единственный пик, отмеченный на характеристиках, соответствует возбуждению сдвиговой объемной волны, распространяющейся перпендикулярно пластине …

Берлиоз: Fantastique / Gergiev — Classics Today

Обзор: Дэвид Гурвиц

Художественное качество:

Качество звука:

Валерий Гергиев исполняет в целом прекрасную симфоническую фантазию, которая, как и любое хорошее исполнение, действительно нагревается в последних двух частях.«Марш к эшафоту» имеет весьма угрожающий характер, с очень четко озвученными литаврами и большим количеством размахов для игры на духовых. Финал начинается довольно быстро и никогда не утихает; в нем есть особое берлиозское безумие, которое так и не удается уловить стольким версиям. В других местах результаты немного более вариативны. Первая часть в целом идет неплохо, за исключением бессмысленного замедления в какой-то момент ближе к концу, но вальс второй части странный, со странно стравинскими акцентами, нарушающими его течение, и общим отсутствием ритмического напряжения.Однако Гергиев действительно находит идеальный темп для медленной части, а соло гобоя и валторны имеют привлекательно жалобный пасторальный характер.

La Mort de Cléopatre делает щедрый бонус, но не в этом спектакле. Не зацикливаясь на деталях, Гергиев, конечно, неплохо дирижирует, но у Ольги Бородиной просто не тот голос на партию: толстый, тяжелый, а зачастую и шаткий. Она кажется мертвой еще до того, как заиграет музыка — ладно, может быть, это не так уж плохо, но по сравнению с такими певицами, как Джесси Норман, Вероник Ген или Джанет Бейкер, она не улавливает ни благородства египетской королевы, ни пафоса ее затруднительного положения.К счастью, учитывая, что многие диски предлагают только симфонию, мы можем проигнорировать этот конкретный «бонус», и рейтинг это отражает. Philips предлагает яркое живое звучание, которое особенно хорошо передает уникальные тембры валторн и струнных Венской филармонии, хотя арфы во второй части должны звучать более соблазнительно. Коллекционерам фантастики здесь будет чем заняться.

Купить сейчас в Arkiv Music

Сведения о записи:

Референсная запись: Симфония: Мунк (RCA), Томас (RCA), Бернштейн (Sony)

ГЕКТОР БЕРЛИОЗ — Фантастическая симфония; La Mort de Cléopatre

Поделиться этим обзором:

Корреляция in situ механочувствительных ответов адгезина UspA1 Moraxella catarrhalis с фибронектином и рецептором CEACAM1, связывающимся

Бактерии и все другие клетки в первую очередь воспринимают окружающую среду и реагируют на нее через белки, выходящие с их поверхности.Для патогенных бактерий такие взаимодействия образуют начальные события в инфекционных процессах. Несмотря на обширные исследования связывающей активности белков клеточной поверхности, очень мало известно о том, как эти молекулярные ассоциации могут трансформироваться в физические или конформационные изменения, в частности, in situ непосредственно на поверхности клетки. Считается, что физические изменения, сопровождающие связывание рецепторов, вносят важный вклад в биологическую функцию, но редко измеряются напрямую.

Moraxella catarrhalis ( Mx ) — специфическая для человека бактерия, связанная с респираторными заболеваниями и инфекциями среднего уха (средний отит) (1). Исследования начальных молекулярных этапов, с помощью которых Mx воспринимают окружающую среду и взаимодействуют с ней, приводя к инфекции, сосредоточены на поверхностных бактериальных белках адгезина, которые обеспечивают очевидные точки посредничества как для колонизации, так и для инфекции, а также могут помочь в уклонении от иммунного распознавания (2). Mx представляют собой отличную систему для изучения свойств адгезинов in situ, поскольку электронные микрофотографии (рис.1 A ) указывают на то, что на их поверхности преобладают множественные копии одного и большого адгезина: повсеместно распространенного поверхностного белка A1 (UspA1). Размер UspA1 варьируется между разными штаммами Mx , причем каждый мономер обычно содержит от 850 до 950 аминокислот. Эти мономеры образуют удлиненные тримерные структуры, простирающиеся на расстояние до 800 Å от поверхности клетки, где они образуют характерное и плотно упакованное молекулярное покрытие (3). Исследования гомологии последовательностей (3, 4) показывают, что UspA1 принадлежит к семейству бактериальных адгезинов, называемых либо олигомерными адгезинами со спиральной спиралью (Oca), либо тримерными адгезинами-аутотранспортерами (TAA).Эти адгезины, как полагают, имеют общую модульную структуру, состоящую из вариабельной амино-концевой головной группы β-пропеллера, протяженной области стебля coiled-coil и мембранного β-цилиндрического якорного домена на карбокси-конце (рассмотрено в ссылке 5). Этот последний домен формирует мембранную пору, из которой оставшиеся домены-пассажиры, как полагают, перемещаются через внешнюю мембрану (рассмотрено в ссылке 6). Текущее понимание TAA основано на ряде молекулярных (кристаллографических) структур, которые были определены для изолированных сегментов некоторых из этих белков (см.5 и 6; также см. ссылки. 4, 7 и 8). Поскольку эти белки образуют большие и протяженные структуры, нет полных структур TAA, но исследования электронной микроскопии показывают, что эти адгезины часто образуют полностью протяженные структуры «леденцов» на поверхности клетки (3, 7) (Fig. 1). Сходная общая модульная структура белков TAA предполагает общего эволюционного предшественника, но также ясно, что имела место значительная диверсификация.

Сообщалось о множественных партнерах связывания для большинства этих бактериальных адгезинов.В случае UspA1, связывание как с фибронектином (Fn), так и с ламинином, компонентами внеклеточного матрикса, было зарегистрировано для конструкций, которые включают головной домен вместе со значительными участками стебля (9, 10). Кроме того, сообщалось, что UspA1 с высокой аффинностью связывается с рецептором молекулы 1 адгезии клеток, связанной с карциноэмбриональным антигеном человека (CEACAM1) (CD66a), на эпителиальных клетках (11), который в норме формирует гомофильные межклеточные взаимодействия и для которых сайт связывания на UspA1 располагается внутри стебля (7) в области, пространственно удаленной от домена головы.Рабочая модель, возникающая из этого пространственного разделения диапазона сайтов связывания, заключается в том, что головной домен может опосредовать начальные, слабые встречи с внеклеточными компонентами, что приводит к выявлению более специфических сайтов связывания в другом месте, которые способствуют более плотному связыванию, необходимому для запуска инфекционных процессов (7). . В переполненных и плотно упакованных слоях UspA1 на поверхности клетки Mx (рис. 1) можно ожидать, что доступ ко всему диапазону сайтов связывания будет ограничен, и, вероятно, потребуются существенные физические искажения слоя адгезина и составляющие его молекулы.

В этом исследовании мы стремились изучить физические свойства слоя UspA1 на поверхности Mx , как они изменяются в ответ на связывание Fn или CEACAM1, а затем сопоставить эти эффекты in situ с молекулярными деталями модульной структуры. структура адгезина и его комплексы с этими белками.

Результаты и обсуждение

Механические свойства UspA1 на бактериальной поверхности.

Электронные микрофотографии ранее продемонстрировали, что UspA1 образует доминирующий компонент и плотно упакован на поверхности клеток Mx (3, 7) (рис.1), где он образует слой толщиной приблизительно 80 нм, что является значительным по сравнению со средним размером бактерии ( приблизительно 800 нм). Поэтому мы предположили, что адгезионные и механические реакции на кантилевер при нажатии на одну бактерию будут отражать реакцию UspA1 на этот датчик силы. Эти отклики были проверены в силовом микроскопе с вертикально установленным микрокантилевером Si ₃ N ₄, микроскопом боковых молекулярных сил (LMFM), как описано в Materials and Methods .Измерения LMFM выполняются путем наблюдения за демпфированием тепловых колебаний вертикального кантилевера, когда он вступает в первоначальный контакт с поверхностью бактерии. Когда кантилевер входит в контакт с поверхностью бактерии, жесткость комбинированной системы увеличивается, и это используется для определения точки контакта без приложения к бактерии какой-либо значительной силы. Относительные изменения в этой начальной точке контакта, которые не должны зависеть от сжатия ячейки, используются для измерения эффективной толщины слоя адгезина.

У ряда тестированных бактериальных клеток сила адгезии наблюдалась при контакте с кантилевером LMFM (рис. 2; также см. Фильмы S1 – S4). Обычно эта сила составляла менее 300 пН. Поскольку кантилеверы Si ₃ N ₄ являются гидрофильными и отрицательно заряжены в условиях буфера (12), адгезия, вероятно, происходит из-за эффекта заряда на поверхности Mx . Из изменений тепловых флуктуаций кантилевера Si ₃ N ₄ при контакте с поверхностью Mx можно было рассчитать кажущуюся жесткость (13) слоя адгезина, которая оказалась меньше 10 пН / нм.Кроме того, мы отметили, что кажущаяся жесткость меньше, когда кантилевер нажимает на слой адгезина, чем когда он растягивается. В отдельных случаях разрыв адгезии между кантилевером и бактерией был единичным событием с силой менее 100 пН, что позволяет предположить, что наблюдаемые события были вызваны единственной молекулой адгезина. Эти силы коррелируют с другими измерениями клеточного адгезина (14) и существенно меньше сил, необходимых для деформации клетки (15).

Рис. 2.

Анализ с помощью атомно-силовой микроскопии бактерий Mx . ( A ) Синусоидальное движение вбок передается столику для образца, чтобы мягко подтолкнуть единственную адсорбированную бактерию (синяя сфера; бледно-голубой внешний слой представляет собой поверхностные адгезины) против кантилевера. Изменение положения предметного столика (Δ x ₁), необходимое для достижения контакта, измеряется при добавлении либо лиганда (CEACAM1 или Fn), либо буферного / контрольного белка. На графиках справа показаны репрезентативные данные, измеренные для изменения положения точки контакта до (красным) и после (зеленым) добавления ( B ) контроля, ( C ) CEACAM1 и ( D ). ) FNIII _12,13,14.Красная и зеленая линии представляют собой среднее значение красной и зеленой точек соответственно.

Затем мы приступили к исследованию того, как эти свойства слоя UspA1 могут изменяться в ответ на присутствие известных связывающих белков UspA1, в частности CEACAM1 и фибронектина. Во-первых, в контрольных экспериментах было замечено, что добавление буфера или контрольного белка, рекомбинантной формы лактатдегидрогеназы Plasmodium falciparum , в экспериментальную камеру не вызывало каких-либо наблюдаемых изменений в положении точки контакта или в адгезии. сила.Однако в клетках MX2 штамма Mx добавление усеченного фрагмента Fn (FnIII _12–14), который связывает головную область UspA1 (см. Ниже), привело к увеличению расстояния, на которое бактерия должна была перемещаться. чтобы установить контакт с кантилевером на 7 ± 5 нм (стандартное отклонение среднего, SDM) и полную потерю силы сцепления в 90% контактов. Эти результаты показывают, что Fn-специфическое связывание с UspA1 может быть обнаружено LMFM. Простейшим объяснением изменения положения точки контакта до добавления Fn является уменьшение общего размера (диаметра) бактерий MX2 при связывании Fn.Поскольку адгезивные свойства также изменились, мы пришли к выводу, что уменьшение, вероятно, коррелирует с конформационным изменением в слое UspA1, потенциально UspA1 от его расширенной формы до более компактной или «изогнутой» формы.

Затем эти анализы были расширены за счет добавления CEACAM1, который связывает UspA1 с высокой аффинностью. В течение 5 с после добавления CEACAM1 к клеткам штамма MX2, в которых UspA1 включает сайт связывания CEACAM1 в области стебля (7, 11), среднее уменьшение общего размера MX2 составляет 16 ± 5 (SDM) нм. бактерия не наблюдалась.Также было отмечено значительное снижение силы сцепления (70% контактов не давали сцепления). Однако, когда такое же количество CEACAM1 было добавлено к штамму O35E Mx , в котором UspA1 лишен сайта связывания CEACAM1 (7), не было зарегистрировано никакого изменения размера бактерии, и сила адгезии не пострадала (см. Фильм S4. ). Эти результаты действуют как дополнительный контроль и снова указывают на то, что LMFM обнаруживает CEACAM1-специфическое связывание с UspA1.

Наконец, мы измерили эффект от первого добавления FnIII _12–14, а затем CEACAM1 (и наоборот) к MX2.В каждом случае начальное уменьшение размера наблюдалось при добавлении первого белка (как указано выше), за которым следовало дальнейшее сокращение клетки примерно на 10 нм при добавлении CEACAM1 после Fn (но не наоборот), давая максимальное сокращение, эквивалентное сокращению, полученному только с CEACAM1. Эти результаты показывают, что механизм наблюдаемого сокращения в каждом случае является независимым, что согласуется с тем, что Fn- и CEACAM1-связывающие области на UspA1 находятся в дистальных участках, но что искажение CEACAM1 является доминирующим.

В целом, данные LMFM показывают, что физические свойства слоя UspA1 на поверхности клетки Mx изменяются в ответ на связывание специфических белков. В частности, эти данные in situ согласуются с коррелированным изгибом, ранее отмеченным для изолированного фрагмента стебля UspA1 при связывании CEACAM1 (7). Данные также показывают, что внеклеточный белок фибронектин вызывает аналогичные изменения. Поскольку прямые структурные данные по UspA1 были ограничены сайтом CEACAM1 в области стебля, поэтому мы решили исследовать взаимодействие UspA1-фибронектин более подробно, сначала расширив структурный анализ UspA1 на указанный сайт связывания Fn, область головы.

Структура Главного региона УспА1.

Из-за высоких молекулярных масс и экстремального молекулярного удлинения как UspA1, так и Fn, подробный молекулярный анализ их взаимодействий сначала потребовал генерации усеченных форм каждого белка (Fig. S1). Были получены кристаллы ряда конструкций UspA1, но только два из них, UspA1 ^(42–345) и UspA1 ^(165–366), оказались подходящими для определения структуры. Полученные две структуры длиной около 110 Å каждая и диаметром до 40 Å (рис.1 C — E ), можно легко объединить, чтобы сформировать композитную структуру (рис. 3 C ) для остатков UspA1 42–366, которая имеет длину около 160 Å.

Рис. 3.

МУРР-анализ комплекса UspA1 ^(42–366) -FnIII _12–15. ( A ) Молекулярная оболочка (оранжевая), определенная ab initio моделированием бусинок, с пятью независимыми реконструкциями твердого тела, показанными как ленты C ^α, причем каждая реконструкция отображается другим цветом.( B ) Типичная реконструкция твердого тела комплекса UspA1 – Fn с UspA1 ^(165–366), окрашенным, как на рис. 1 C и FnIII _12–15 в виде рисунка C ^α раскрашен доменом и помечен. Остатки, связывающие гепарин, показаны сферами. ( C ) Общая модель для UspA1 ^(154–869) (окрашена, как на рис. 1 C ) и деформации, связанной с последовательным связыванием Fn (окрашены, как в B ) и CEACAM-1 (серым) .Остальная часть молекулы Fn обозначена грубым желтым эллипсоидом (не в масштабе). Показанные расстояния и погрешности взяты из анализа LMFM и представляют собой уменьшение общей длины UspA1 в результате связывания каждого лиганда. Угол изгиба при связывании CEACAM1, необходимый для достижения этого изменения, был рассчитан из линейных размеров объединенных кристаллических структур и оценивается примерно в 45 ± 15 °, что находится в пределах диапазона движения, наблюдаемого в предыдущем моделировании молекулярной динамики (7 ).

Головной домен UspA1 (остатки 42–275) в целом подобен другим структурам головных доменов TAA (рис. S2) и включает тримерный левосторонний параллельный β-валик, который образован 14 повторяющимися сегментами из 14–16 остатков. которые образуют лестницу из катушек β-прядей. Этот головной домен отличается от YadA (16) вариабельностью его повторов (9 × 15, затем 3 × 14, затем 2 × 16 остатков на повтор).

Горловая область UspA1 (остатки 276–334) имеет сложное переплетение, которое отличается от наблюдаемого в YadA, но сходно с шейной областью BpaA (рис.S2). Большие внешние петли образуют концентрацию положительного заряда в этой области, которая может указывать на функциональную активность связывания лиганда, и с которой сульфат-ионы случайно связываются в одной из кристаллических структур. Затем структура показывает начало ножки (остатки 334–372), которое простирается примерно на 60 Å (UspA1 ^(42–366)) в виде канонической левосторонней спиральной спирали.

Комплекс фибронектин-UspA1.

Определив структуру области головы UspA1, мы затем исследовали, как в этой области размещается сайт связывания фибронектина.Следуя более ранним сообщениям о том, что внеклеточный Fn связывается с N-концевой частью UspA1 (9, 10), мы первоначально предприняли исследования связывания с укороченными формами обоих белков (Fig. S1), чтобы лучше определить комплекс Fn-UspA1.

В исследованиях связывания использовали иммуноблоттинг (дот-блоттинг), ELISA и поверхностный плазмонный резонанс, и они полностью описаны в SI Text и на фиг. S3 и S4. Консенсус этих анализов заключался в том, что FnIII ₁₃ играет ключевую роль в связывании с областью UspA1, содержащейся в конструкции UspA1 ^(42–366), и обеспечивает приблизительно 90% энергии связывания и FnIII ₁₂ ∼ 10%. (при 25 ° C) на основании констант диссоциации, приведенных в Таблице S1.

Эта центральная роль FnIII ₁₃ в связывании была затем подтверждена анализами конкуренции с гепарином, которые показали, что с увеличением концентрации гепарина связывание UspA1 с Fn снижается. Сайт связывания гепарина на Fn ранее был подробно охарактеризован и сосредоточен на Arg-6, Arg-7 и Arg-23 на FnIII ₁₃ (17, 18). Гепарин не связывается в значительной степени с самим UspA1, что согласуется с предыдущим наблюдением (19).

Данные связывания показали, что комплекс с умеренным сродством ( K _d ∼ 5 мкМ) образуется между UspA1 ^(42–366) и фрагментом FnIII _12–15.В отсутствие кристаллов этого комплекса были собраны данные рассеяния рентгеновских лучей в растворе с низким разрешением (фиг. S5), на основании которых была рассчитана молекулярная оболочка, к которой затем были подобраны кристаллические структуры обоих компонентов (фиг. 3). Отличительная форма головного домена UspA1 очевидна в очертаниях комплекса. Наблюдаемые данные плохо соответствовали альтернативным моделям, таким как димеры любого компонента (рис. S5). Из-за сходства доменов FnIII существует потенциальная неоднозначность полярности ориентации фрагмента FnIII _12–15, но ориентация, показанная на рисунке, предпочтительна, поскольку она максимизирует контакты между FnIII ₁₃ и UspA1 в в соответствии с данными привязки.Контакты UspA1 находятся преимущественно в основании домена головки β-валика, места, где обнаруживаются удлиненные петли витка 1 β-валков и петли из области шейки.

Примечательной особенностью этой модели с низким разрешением является отчетливая угловая связь (примерно 40 °) между длинными осями каждого компонента. Поскольку в интактном белке Fn имеется значительная масса белка по обе стороны от домена FnIII ₁₃, трудно предположить, что этот угловой контакт с UspA1 может быть создан без искажения тесного набора протяженных структур адгезина.

Общая модель структуры, связывания и функций UspA1.

На бактериальной поверхности каждый мономер UspA1 содержит 821 аминокислоту, для которых теперь доступны кристаллические структуры для сегментов 42–366 (это исследование) и 527–665 (7). Важно отметить, что эти два сегмента покрывают два основных сайта связывания на UspA1. Хотя кристаллические структуры составляют только около 60% от общей структуры, остальные части структуры легко поддаются моделированию гомологии: большая часть оставшейся последовательности имеет сильную склонность к спиральной спирали (11), а трансмембранная область очень высока. консервативны и, как ожидается, сохранят структуру, аналогичную адгезину Hia (20).Таким образом, была построена общая композитная модель для UspA1 (рис. 3 C ).

Эта общая модель для UspA1 имеет структурное сходство с ранее предложенной для YadA (21), хотя она варьируется в деталях, размерах и, что важно, может быть объединена с функциональными данными, которые указывают на чувствительность к связыванию лиганда. Исходя из модели, в своей полностью вытянутой конформации UspA1 простирается на 760 Å в длину от мембраны, что коррелирует с более ранними оценками, полученными с помощью электронной микроскопии (3).Эти же исследования с помощью электронной микроскопии и другие (7) показывают, что нелигандированный UspA1 часто является одновременно полностью вытянутым и плотно упакованным на бактериальной поверхности, так что области стебля и головы соседних молекул UspA1 лежат параллельно и в непосредственной близости. Такое расположение, по-видимому, (частично) препятствует доступу к сайту связывания Fn в основании головного домена и, более полно, к сайту связывания CEACAM1, который находится на расстоянии примерно 400 Å от кончика молекулы. Такая плотная упаковка может обеспечить некоторую физическую степень защиты этих консервативных областей от иммунного распознавания (2, 7).

Mx , нацеленные на эпителиальные клетки, будут сталкиваться со все более высокими локальными концентрациями фибронектина по мере приближения к эпителию, потому что Fn является основным компонентом внеклеточного матрикса, а также прикрепляется к апикальной поверхности эпителия (22, 23). Поскольку сайт связывания Fn находится в основании головного домена, доступ для большой молекулы, такой как Fn (димер 440 кДа), возможен только в случае нарушения плотной параллельной упаковки UspA1. Изгиб головки UspA1 (Fig. 3 C ), возможно инициированный физическим контактом, делает этот сайт доступным для внеклеточных белков.Угловая ассоциация, наблюдаемая между UspA1 и Fn, может отражать степень изгиба, необходимого для полного раскрытия сайта связывания на поверхности. Небольшое уменьшение общего диаметра Mx при добавлении Fn, измеренное в этом исследовании, согласуется с искажением слоя UspA1, которое легче всего достигается за счет изгиба расширенной структуры UspA1. Анализы связывания показывают, что эти начальные взаимодействия имеют умеренное сродство ( приблизительно 5 мкМ), что отражает широкие возможности для поливалентных взаимодействий, обеспечиваемые большим количеством UspA1, экспонированного на поверхности бактериальных клеток.

Это нарушение также коррелирует с предыдущими экспериментальными данными, предполагающими, что связывание высокоаффинного рецептора CEACAM1 человека, которое происходит в нижней половине области ножки и ближе к мембране, связано с характерным изгибом ножки UspA1 (7 ). В этом предыдущем исследовании было обнаружено, что изолированный комплекс стебля CEACAM1∶UspA1 проявляет выраженную кривизну в растворе, при этом моделирование молекулярной динамики указывает на то, что образование комплекса дестабилизирует протяженную стержнеобразную конформацию области стебля.Неясно, предшествует ли это искажение, сопровождает ли оно связывание CEACAM1 или является его результатом, хотя согласованные действия кажутся наиболее вероятными. Эксперименты, проведенные с LMFM в данном исследовании, косвенно свидетельствуют о том, что такое изгибание также происходит на поверхности клеток Mx . Эти исследования показывают корреляцию между добавлением CEACAM1 и уменьшением адгезии и уменьшением общего диаметра Mx , что означает, что расширенная структура UspA1 (которая определяет толщину слоя адгезина) физически искажается связыванием CEACAM1.Измеренное уменьшение общего диаметра на 16 ± 5 (SDM) нм (рис. 2) аналогично ожидаемому изменению, вызванному (рис. 3 C ) изгибом UspA1 на величины, ранее предложенные (7) путем моделирования. Широкая корреляция между этими измерениями поддерживает простейшее объяснение того, что расширенный — и, следовательно, сжимаемый — слой молекул UspA1 становится более компактным при связывании CEACAM1, как можно было бы ожидать, если бы ножки были изогнуты. Эти изменения не наблюдались при добавлении контрольного белка, что означает, что они возникают в результате специфических взаимодействий UspA1 как с Fn, так и с CEACAM1.

Контактная деформация структуры UspA1, пожалуй, неудивительна, учитывая ее крайнее удлинение. Более удивительно то, что изгибание может быть вызвано или, по крайней мере, усилено за счет связывания определенных белков. Эта прямая корреляция подразумевает, что индуцированное искажение может возникать в или вблизи областей связывания UspA1 (Fig. 3 C ). Предыдущие исследования взаимодействия UspA1: CEACAM1 показали, что присоединение CEACAM1 может нарушать симметрию удлиненного стержня coiled-coil, что приводит к дестабилизации расширенной структуры (7).Отдельная и более низкая степень изгиба, наблюдаемая при связывании Fn, может просто отражать крутильное искажение, являющееся результатом угловой ассоциации этих молекулярных компонентов. Интересно поразмышлять о биологическом значении этих конформационных изменений. Явным следствием искажения UspA1 является уплотнение белкового слоя на бактериальной поверхности, что позволяет ближе подходить к мембранам бактерий и клеток-хозяев, что является требованием для эффективного распространения инфекции. Кроме того, как отмечалось выше, этот примитивный переключатель физической деформации обеспечивает простой способ локализации сайтов связывания Fn и, в частности, CEACAM1, вдали от наиболее удаленных и, следовательно, доступных областей UspA1, что может обеспечить некоторую степень уклонения от иммунного ответа. признание.Хотя данные указывают на то, что искажения, возникающие в результате связывания Fn и CEACAM1, являются независимыми событиями, последовательная модель, в которой связывание Fn инициирует изгибание, чтобы облегчить связывание CEACAM1, является привлекательной.

Наконец, поскольку связывание с белками клеточной поверхности тесно связано с эффективной бактериальной инфекцией, предполагается прямая роль этих механоселективных деформаций в инфекционном процессе. Дальнейшие исследования этих динамических свойств адгезинов и родственных молекул in situ потребуют разработки различных технических подходов.

Материалы и методы

Производство, очистка и определение структуры белка.

Серия усеченных форм Mx UspA1 из штамма MX2 ATCC 25238 и рекомбинантных конструкций человеческого фибронектина (фиг. S1) была экспрессирована в Escherichia coli и очищена, как описано в SI Text . Кристаллы UspA1 ^(42–366) и UspA1 ^(42–345) были получены, как описано в SI Text . Дифракционные данные были собраны в алмазном источнике света (линии пучка IO2 и IO4), а структуры были определены с использованием комбинации молекулярного замещения и экспериментального фазирования из пропитки бромидом, как описано в SI Text .Сбор данных и окончательная статистика уточнения для обеих структур сведены в Таблицу S2. Гомологические модели были построены для областей UspA1, не охваченных доступными кристаллическими структурами, как описано в SI Text .

Исследования связывания.

Взаимодействия фрагментов UspA1 и Fn изучали стандартными методами с использованием плазмонного резонанса, точечного иммуноблоттинга и иммуноферментных анализов, как описано в SI Text .

Анализ малоуглового рентгеновского рассеяния (МУРР).

Данные SAXS комплекса FnIII _12–15 / UspA1 ^(42–366) были собраны в Diamond Light Source (луч I22) и проанализированы, как описано в SI Text .

Боковой молекулярно-силовой микроскоп.

Механические свойства UspA1 на внешней поверхности Mx были протестированы с использованием недавно разработанного LMFM, описанного в ссылке. 13. Жесткость пружины кантилеверов, использованных в этом исследовании, составляла 2,4 пН / нм ± 15%, а поперечное сечение составляло 1 мкм ± 10%.Для определения жесткости UspA1 использовались более мягкие кантилеверы с тем же поперечным сечением, но двойной длины, что дало жесткость 2,7 пН / нм ± 15%.

Одиночные бактерии были обнаружены оптически с использованием освещения с полным внутренним отражением. Синусоидальное движение вбок было придано столику для образца, чтобы осторожно протолкнуть одну бактерию к кантилеверу. Положение бактерии было отрегулировано так, чтобы обеспечить максимальное отклонение кантилевера от 50 до 300 нм.Положение стадии, на которой установился контакт между бактерией и кантилевером, отслеживали при добавлении контрольного белка / буфера, CEACAM1 и FnIII _12–14. Изменения в этих положениях могут быть напрямую связаны с изменениями размера бактерии.

Координатное нанесение.

Координаты и структурные факторы кристаллических структур UspA1 ^(165–366) и UspA1 ^(42–345) были депонированы в Научно-исследовательское сотрудничество для структурной биоинформатической базы данных белков (идентификационные коды 3NTN и 3PR7), а также координаты моделей комплекса фибронектин-UspA1 и всей структуры UspA1 доступны у авторов.

Наследование текстуры при фазовом переходе в низкоуглеродистой, низколегированной трубной стали после термомеханической контролируемой обработки

Эндо, С. и Наката, Н., Разработка процесса термомеханического контроля (TMCP) и стали с высокими эксплуатационными характеристиками в JFE Steel, в Технический отчет JFE № 20 , Токио: JFE Steel Corporation, 2015, стр. 1–7.

Google ученый

Чжао, М.-Ш., Ян, К., и Шань, Ю., Влияние термомеханического процесса управления на микроструктуру и механические свойства коммерческой трубопроводной стали, Mater. Sci. Eng., А , 2002, т. 335. С. 14–20.

Артикул Google ученый

Лян, X.J., Хуа, M.J., Гарсия, C.I., и ДеАрдо, A.J., Термомеханическая контролируемая обработка высокопрочного стального листа: новый взгляд на ударную вязкость, основанный на современной металлографии, Mater. Sci. Форум , 2013, т.762. С. 38–46.

Артикул Google ученый

Настич С.Ю., Морозов Ю.Д., Матросов М.Ю., Денисов С.В., Галкин В.В., Стеканов П.А. Освоение производства на толстолистовом стане ММК 5000. листовой прокат из низколегированных сталей с улучшенными прочностными и хладостойкими свойствами, Металлург , 2012, вып. 55, №№ 11–12, с. 810–818.

Артикул Google ученый

Морозов Ю.Д., Голи-оглу Э.А., Настич С.Ю., Денисов С.В., Стеканов П.А. Термомеханическая обработка микролегированной низкоуглеродистой стали на стане 5000 по производству хладостойких толстых материалов. полоса, сталь Пер. , 2012, т. 42, нет. 2. С. 171–176.

Артикул Google ученый

Ильинский В.И., Степанов П.П., Эфрон Л.И., Головин С.В., Гейер В.В., Матросов М.Ю., Голи-Оглу Е.А., Таланов О.П., Опыт освоения производства листов пилы 450 категории прочности для глубоководных труб на Выксунском металлургическом заводе, стан 5000, Металлург , 2014, т. 58, нет. 1. С. 38–42.

Артикул Google ученый

Морозов Ю.Д., Настич С.Ю., Матросов М.Ю., Чевская О.Н. Получение качественных свойств проката для труб большого диаметра на основе образования феррита. трубы бейнитового диаметра на основе формирования ферритно-бейнитной микроструктуры, Металлург , 2008, т.52, №№ 1–2, с. 21–28.

Артикул Google ученый

Морозов Ю.Д., Матросов М.Ю., Настич С.Ю., Арабей А.Б. Новое поколение высокопрочных трубных сталей с ферритно-бейнитной структурой, Металлург . , 2008, т. 52, нет. 7–8. С. 450–456.

Артикул Google ученый

Матросов М.Ю., Ефрон Л.И., Кичкина А.А., Лясоцкий И.В. Исследование микроструктуры трубной микролегированной ниобием стали после различных режимов управляемой прокатки с ускоренным охлаждением // Мет. Sci. Термическая обработка. , 2008, т. 50, №№ 3–4. С. 136–141.

Артикул Google ученый

10.

Арабей А.Б., Пышминцев И.Ю., Штремель М.А., Глебов А.Г., Струин А.О., Гервасьев А.М. Устойчивость стали Х80 к распространению вязких трещин в магистральных газопроводах, Сталь . Пер., 2009, т. 39, нет. 9. С. 719–724.

Артикул Google ученый

11.

Эфрон Л.И., Морозов Ю.Д., Голи-оглу Е.А. Влияние контролируемой прокатки на структуру и механические свойства низкоуглеродистой микролегированной стали // Сталь . , 2011, т. 41, нет. 5. С. 434–439.

Артикул Google ученый

12.

Хулка К., Петерс П., and Haisterkamp, F., Тенденции развития сталей для труб большого диаметра, Steel Transl. , 1997, т. 27, нет. 10. С. 64–70.

Google ученый

13.

Штольхейм, Д.Дж., Современные конструкции из сплавов и производственная практика для современных высокопрочных сталей для трубопроводов для трубопроводов нефти и газа. Часть I, Металлург , 2013, вып. 11. С. 53–66.

Google ученый

14.

Сабиров, И., Де Диего-Кальдерон, И., Молина-Алдарегия, Дж. М., Фёйер, К., Тиссен, Р., и Петров, Р. Х., Микроструктурный расчет закаленных и разделенных сталей (Q&P) для улучшения их свойств разрушения , Матер. Sci. Англ., А , 2016, т. 657. С. 136–146.

Артикул Google ученый

15.

Частухин А.В., Рингинен Д.А., Хадеев Г.Е., Эфрон Л.И. Кинетика статической рекристаллизации аустенита микролегированных ниобием трубных сталей // Металлург , 2016, т.59, нет. 11. С. 1180–1187.

Артикул Google ученый

16.

Кичкина А.А., Матросов М.Ю., Ефрон Л.И., Клюквин М.Б., Голованов А.В. Влияние структурной анизотропии трубной ферритно-бейнитной стали на механические свойства при испытаниях на растяжение и ударный изгиб. , Металлург , 2011, т. 54, ном. 11–12, с. 808–816.

Артикул Google ученый

17.

Штремель, М.А., Прочность сплавов. Часть 2. Деформация (Прочность сплавов. Часть 2: Деформация). М .: Моск. Inst. Стали Сплавов, 1997.

Google ученый

18.

Беляевских А.С., Лобанов М.Л., Русаков Г.М., Редикульцев А.А. Совершенствование производства сверхтонкой анизотропной электротехнической стали. , 2015, т. 45, нет. 12. С. 982–986.

Артикул Google ученый

19.

Пышминцев И.Ю., Струин А.О., Гервасьев А.М., Лобанов М.Л., Русаков Г.М., Данилов С.В., Арабей А.Б. Влияние кристаллографической текстуры бейнита на разрушение листов трубной стали, изготовленных контролируемым термомеханическим способом. обращения, Металлург , 2016, т. 60, нет. 3–4, с. 405–412.

Артикул Google ученый

20.

Пышминцев И.Ю., Гервасев А.М., Петров Р.Х. и др. Кристаллографическая текстура как фактор, обеспечивающий задержку вязкого разрушения высокопрочной трубопроводной стали, Mater.Sci. Форум , 2012, т. 702–703, с. 770–773.

Google ученый

21.

Мохтади-Бонаб, М.А., Эскандари, М., Шпунар, Дж. А., Текстура, локальная разориентация, границы зерен и фракция рекристаллизации в стали трубопроводов, связанная с водородным растрескиванием, Mater. Sci. Англ., А , 2014, т. 620. С. 97–106.

Артикул Google ученый

22.

Данилов С.В., Струина Е.Р., Бородина М.Д. Раскалывание трубной стали производства ТМХП // Сталь , пер. , 2017, т. 47, нет. 3. С. 188–189.

Артикул Google ученый

23.

Hölscher, M., Raabe, D., and Lücke, K., Взаимосвязь между текстурами качения и текстурами сдвига в f.c.c. и b.c.c. металлы, Acta Metall. Матер. , 1994, т. 42, нет. 3. С. 879–886.

Артикул Google ученый

24.

Андреев Ю.Г., Зайкова Е.И., Штремель М.А. Границы и границы линий в мартенсите шихты // Физ. Мезомех. Встретились. Металлогр. , 1990, т. 49, нет. 3. С. 161–167.

Google ученый

25.

Счастливцев В.М., Блиндт Л.Б., Родионов Л.П., Яковлева И.Д. Структура мартенситных пакетов в конструкционных сталях // ФММ. Встретились. Металлогр. , 1988, т. 66, нет. 4. С. 123–133.

Google ученый

26.

Нестерова Е.В., Рубцов А.С., Рыбин В.Р., Золоторевский Н.Ю. Высокоугловые границы, возникающие при фазовых превращениях. , 1982, нет. 5. С. 30–35.

Google ученый

27.

Гонг В., Томота Ю., Парадовска А.М. и др., Влияние температуры аусформирования на превращение бейнита, микроструктуру и выбор вариантов в нанобейнитной стали, Acta Mater. , 2013, т.61. С. 4142–4154.

Артикул Google ученый

28.

Счастливцев В.М. Структурные и кристаллографические особенности решетчатого мартенсита конструкционных сталей. 5. С. 32–41.

Google ученый

29.

Перелома Е.В., Аль-Харби Ф. и Газдер А.А. Кристаллография бескарбидных бейнитов в термомеханически обработанных сталях с низким содержанием кремния, обусловленных превращением пластичности, Дж.Сплавы Compd. , 2014, т. 615. С. 96–110.

Артикул Google ученый

30.

Ray, R.K. и Йонас, Дж. Дж., Текстуры трансформации в стали, Int. Матер. Ред. , 1990, т. 35, стр. 1–36.

Артикул Google ученый

31.

Хатчинсон Б., Райд Л., Линд Э. и Тагашира К. Текстура горячекатаного аустенита и продукты его превращения, Mater.Sci. Англ., А , 1998, т. 257, нет. 1. С. 9–17.

Артикул Google ученый

32.

Лобанов М.Л., Данилов С.В., Струин А.О., Бородина М.Д., Пышминцев И.Ю. Структурно-текстурная наследственность при-превращениях в низкоуглеродистой низколегированной трубной стали // Вестн. Юж.-Урал. Гос. Ун-та, Сер .: Металл. , 2016, т. 16, нет. 2. С. 46–54.

Google ученый

33.

Русаков Г.М., Лобанов М.Л., Редикульцев А.А., Беляевских А.С. Особые разориентации и текстурная наследственность в промышленном сплаве Fe – 3% Si // Физ. Мезомех. Встретились. Металлогр. , 2014, т. 115, нет. 8. С. 775–785.

Артикул Google ученый

34.

Накада Н., Ито Х., Мацуока Ю. и др. Поведение при деформационном мартенситном превращении в холоднокатаных и холоднотянутых нержавеющих сталях типа 316, Acta Mater., 2010, т. 58. С. 895–903.

Артикул Google ученый

35.

Хамфрис, Ф.Дж. и Хазерли, М., Рекристаллизация и родственные явления отжига , Oxford: Elsevier, 2004.

Google ученый

36.

Лобанов М.Л., Русаков Г.М., Редикульцев А.А. Беликов С.В., Карабаналов М.С., Струина Е.Р., Гервасьев А.М. Исследование особых границ в реечном мартенсите низкоуглеродистой стали методом ориентационной микроскопии // Физ. Мезомех.Встретились. Металлогр. , 2016, т. 117, нет. 3. С. 254–259.

Артикул Google ученый

37.

Степанов А.И., Ашихмина И.Н., Сергеева К.И., Беликов С.В., Мусихин С.А., Карабаналов М.С., Аль-Катави А.А. Структура и свойства низколегированной Cr – Mo – V стали. после аустенизации в межкритическом интервале температур // Сталь , Пер. , 2014, т. 44, нет. 6. С. 469–473.

Артикул Google ученый

Контакты | МИСП

Профсоюз

Звезда Дома-2 Бородина попала в ловушку анорексии: 45 килограмм и все еще «толстая»

Виртуальная экспозиция

«Рассказы дедушки». Детский журнал братьев Толстых, автор: Толстой Л.Н.

Портрет Л.Н. Толстого, автор: Фотограф фирмы «Шерер, Набгольц и Ко»

Портрет Л.Н. Толстого, автор: И.Г. Дьяговченко

Портрет Л.Н. Толстого, автор: И. Жерюзе

Альбом «Нашествие Наполеона. Отечественная война 1812 г.», гравюра «Сражение при Вязьме 22-го октября»

Гравюра «Кутузов Михаил Илларионович (1745-1813 гг.)», автор: С. Карделли

Портрет Л.Н. Толстого, автор: В.Г. Чертков

Гравюра «Князь Багратион. Петр Иванович (1765-1812 гг.)», автор: Д. Доу

Портрет Л.Н. Толстого, автор: С.

Портрет Л.Н. Толстого в день своего восьмидесятилетия, автор: С.А. Толстая

Гравюра «Молебен перед Бородинским сражением»

«Война и мир». Рук. 23, автор: Толстой Л.Н.

«Война и мир». Рук. 139, автор: Толстой Л.Н.

Пейзаж «Вид села Бородина», автор: Литография Жарковой

Парный портрет Л.Н. и С.А. Толстых в последнюю годовщину свадьбы, автор: С.А. Толстая

Портрет братьев Толстых

Журнал поведения Николеньки, автор: Толстая (рожд. Волконская) М.Н.

«Война и мир». Рук. 103, автор: Толстой Л.Н.

Портрет Л.Н. Толстого, автор: И.Г. Дьяговченко

Портрет Л.Н. Толстого

Научная Библиотека МГУ | Отдел редких книг и рукописей

241. Тургенев,Иван Сергеевич (). Первое собрание писем И.

244.

246. Толстой,Лев Николаевич (). Письма графа Л.Н. Толстого к жене,1862-1910 гг. / [Предисл.: Софья Толстая]; Под ред. [и с предисл.] А.Е. Грузинского

247. Петр I (имп.). Письма и бумаги императора Петра Великого : Т.

248. Петр I (имп.). Письма и бумаги императора Петра Великого : Т. 9. Вып. 1 (Январь-декабрь 1709 г.)

249. Петр I (имп.). Письма и бумаги императора Петра Великого : Т. 7. Вып. 2 (1708)

250. Александра Федоровна (имп.). Письма императрицы Александры Федоровны к императору Николаю II. В 2 т. : Т. 2. [1916 г.] / пер. с англ. В. Д. Набокова

251. Александра Федоровна (имп.). Письма императрицы Александры Федоровны к императору Николаю II.

252. Цицерон,Марк Туллий (). Письма Марка Туллия Цицерона к Аттику, близким, брату Квинту, М. Бруту : I.. Годы 68-51 / Пер. и коммент. В.О. Горенштейна

253. Повесть временных лет : Ч. 2. Приложения / Статьи и коммент. Д.С. Лихачева

255.

256. Толстой,Алексей Николаевич (). Повесть о многих превосходных вещах : (Детство Никиты) / Алексей Толстой

257. Сеньобос,Шарль (). Политическая история современной Европы : Эволюция партий и политических форм. 1814-1898 : Т. 1 / Пер. с фр. под ред. В. Поссе.

258. Гоголь,Николай Васильевич (). Полное собрание сочинений : В 10 т. : Т. 8. Арабески

259.

Вечно толстая и неразборчивая Бородина

Статья «Полипы толстой кишки»

Что такое «полип»?

Как диагностируют полипы толстой кишки?

Почему полипы считают предраковым заболеванием?

Что делать, если обнаружены полипы в толстой кишке?

Что такое «биопсия»?

Могут ли полипы рецидивировать ?

МЕТ; Необязательно быть итальянцем, чтобы играть в l’Italiana

Влияние вязкой и проводящей жидкости на характеристики щелевой акустической волны

Принадлежности

Принадлежности

Абстрактный

Похожие статьи

Процитировано

Типы публикаций

LinkOut — дополнительные ресурсы

Источники полных текстов

Другие источники литературы

Разное

Массивно-параллельное секвенирование опухолевых тканей, залитых формальдегидом с фиксированным парафином (FFPE), для анализа числа копий и мутаций

Абстрактные

Фон

Методология / основные выводы

Выводы / Значение

Введение

Результаты

Полногеномное параллельное секвенирование мгновенно замороженной ДНК ткани и ДНК FFPE

Секвенирование консервированного тканевого материала возрастом до 18 лет

Обнаружение CNA и нуклеотид-специфических геномных изменений в опухолях молочной железы

Обсуждение

Материалы и методы

Заявление об этике

Хранение тканей

Препарат ДНК

Подготовка и секвенирование библиотеки анализатора генома Illumina (Solexa)

Анализ данных биоинформатики

Вспомогательная информация

Рисунок S1.

Рисунок S2.