Анна калашникова вес рост: Анна Калашникова: фото, биография, фильмография, новости

Содержание

рост и вес, параметры фигуры, секреты красоты, пластика, как худеет, диета, фото.

Анна Калашникова – российская модель и актриса, которая снимается в сериалах и участвует в модельных конкурсах.

Скандал на почве романа с Прохором Шаляпиным принес ей небывалую популярность, но интерес к ее личности подогревается не только благодаря сплетням, но и за счет особых секретов молодости, стройности и красоты, ведь девушка выглядит отлично и имеет подтянутую фигуру.

К оглавлению

Анна Калашникова: рост, вес и параметры фигуры

Краткая биография: Анна Калашникова родилась 13 июня 1984 года в Ставрополе. Знак зодиака — Близнецы, по восточному гороскопу — Крыса. Тягу к искусству она стала проявлять с раннего детства: занималась музыкой и рисованием, делала актерские постановки и мечтала быть актрисой. Прожив в Ставрополе несколько лет, ее семья переехала в Пятигорск, где Анна начала учиться в общеобразовательной школе и посещать музыкальную.

Мысль об актерском ремесле не покинула Аню и на момент окончания школы, поэтому, получив аттестат и золотую медаль, она отправилась в Москву поступать в один из театральных ВУЗов. Он был закрыт, и тогда девушка спонтанно подала документы в МАИ.

Став студенткой экономического факультета, она устроилась на работу в центральную канцелярию «Мосфильма». Поначалу ей предлагали только эпизодические роли, позднее стали давать более важные сценарии. Самыми серьезными работами для нее стали съемки в «Московских окнах» и «Простых истинах», но также она снималась и в других фильмах и сериалах: «Город соблазнов», «Преступление будет раскрыто», «Пуля-дура», «Спецкорр», «Однажды будет любовь», «Одноклассники» и т.д.

Кроме того, Калашникова снималась для различных социальных роликов и билбордов, а с 2014 года является лицом японского бренда SOSU, занимающегося изготовлением педикюрных носочков, а также она представляет фитнес-клуб «Зебра».

Параметры фигуры Анны Калашниковой: 90-65-93 (грудь-талия-бедра)

Личная жизнь: Популярность Анны Калашниковой достигла пика после скандала из-за романа с Прохором Шаляпиным в 2014 году. В то время он был женат на Ларисе Копенкиной. Конфликт разразился после того, как стало известно, что актриса ждет от певца ребенка.

Эта ситуация обсуждалась в эфире «Пусть говорят», в результате чего Прохор ушел от жены. В 2015 году девушка родила сына Даниила, и певец решил сделать ДНК-тест, но отцовство не подтвердилось, и пара распалась.

Сидит ли на диетах Анна Калашникова

Параметры роста и веса Анны Калашниковой – 173 см и 52 кг. Некоторое время она жила в Америке, и набрала там 5 лишних килограммов. После возвращения в Россию она решила избавиться от них и пересмотрела свой рацион питания.

Размеры одежды и обуви

Обхват груди	90 см
Талия	65 см
Бедра	93 см
Размер бюстгальтера	80B
Размер груди	2
Размер одежды	–
Размер (ноги) обуви	38

Бьюти-секреты

Какие секреты стройности и красоты от Анны Калашниковой удалось узнать:

В одежде она предпочитает классический стиль, подчеркивающий достоинства фигуры и скрывающий недостатки;
С детства она любит фигурное катание, поэтому по возможности старается посещать ледовую арену. Также Анна ходит в фитнес-центр и предпочитает длительные пешие прогулки с близкими и друзьями;
Для поддержания тела и всего организма в тонусе актриса посещает сеансы лимфодренажного массажа;
Чтобы волосы были крепкими и красивыми, Калашникова пользуется маской из репейного и касторового масел: просто смешивает их в равных пропорциях и наносит на локоны;
В питании Анна предпочитает здоровую пищу. Она давно отказалась от фастфуда, который любила в Америке. Теперь в ее рационе нет и жареных, копченых и жирных блюд, лишь изредка она позволяет себе съесть немного шоколада.

Все рецепты похудения от Анны Калашниковой сводятся к физической активности, здоровому образу жизни, правильному питанию и выбору одежды со вкусом, ведь даже самую стройную фигуру можно сделать полной, если выбрать неподходящий фасон или расцветку.

К оглавлению

Пластические операции

Анна Калашникова в юности

Модель регулярно позирует на обложках журналов и в клипах со знаменитостями, например с Сергеем Зверевым и Эдом Шульжевским. В своих интервью она неоднократно заявляла, что быть успешной невозможно без хороших внешних данных.

Несмотря на то, что природа наделила актрису выразительными чертами лица и стройной фигурой, она уверена, что совершенствовать облик нужно постоянно. На многочисленных фото в Сети можно увидеть изменения Анны Калашниковой до и после. Как актриса и певица, Анна заботится о внешности не только с помощью косметических средств и спа-процедур.

Знаменитость не отрицает вмешательств специалистов эстетической медицины в свою красоту. Она не скрывает от поклонников проделанные процедуры и делится планами на последующие перемены в «Инстаграм»: «Всего при помощи пары уколов избавили меня от асимметрии подбородка и кучи комплексов… Безумно рада, что сейчас существуют такие технологии, которые позволяют добиться шикарных результатов без операций и болезненного периода восстановления».

Также Анне Калашниковой пришлось прибегнуть к услугам пластического хирурга, чтобы удалить следы лечения после тяжелых родов.

После установки катетеров на животе и шее остались некрасивые, грубые и заметные шрамы. Доктор выполнил коррекцию шрамов и вернул актрисе идеальную кожу. В ходе операции специалист в области эстетики живота иссек выступающие шрамы и лишние соединительные ткани и порекомендовал курс восстановительных процедур.

Некоторое время назад Анна Калашникова рассказала о контурной пластике лица. Актриса комплексовала из-за асимметрии подбородка и мечтала о более утонченном носике. Инъекционный метод коррекции внешности преобразил Анну: после пластики овал лица стал уже, скулы выразительнее, а кончик носа тоньше, выше и острее.

Для публичной личности, фотомодели и ведущей идеальный внешний вида – залог успеха в выбранной профессии. Актриса очень довольна изменениями облика и не собирается останавливаться на достигнутом. В частности, она подумывает об увеличении груди, которое не так давно сделала Дарья Пынзарь. Коллеги по актерскому цеху единодушны во мнении, что Анна после инъекционных процедур заметно преобразилась.

К оглавлению

Как худеет Анна Калашникова: меню и рецепты

Анна Калашникова: рост 173 см, вес 52 кг

Правила похудения Анны Калашниковой:

Нужно выпивать достаточно жидкости ежедневно – от 1,5 л негазированной минералки в день;
Желательно раз в неделю ходить на лимфодренажный массаж: это позволит не только убрать лишний вес, но и укрепить здоровье;
Необходимо убрать из меню все продукты с высокой калорийностью;
В основе рациона должны быть овощи, фрукты, ягоды, чаи, яйца, нежирные кисломолочные продукты, морепродукты, зелень.

Диета Анны Калашниковой для похудения: меню

Так выглядит рацион питания Анны Калашниковой на каждый день (пример):

Утром она съедает пачку творога с ягодами, пьет зеленый чай;
На обед кушает суп из морепродуктов и кусочком цельнозернового хлеба;
Полдничает фруктовым салатом;
Ужинает паровыми котлетами и салатом из овощей.

Рецепты меню

Рецепт супа из морепродуктов:

Наливаем воду в кастрюлю, доводим до кипения, отправляем туда измельченный картофель, кусочки плавленого сыра и порезанный корень петрушки;
Обжариваем на сковороде репчатый лук и морковь, добавляем туда 300 г смеси из морепродуктов, через 3 минуты наливаем немного воды и тушим под крышкой 10 минут;
Помещаем ингредиенты из сковороды в кастрюлю, солим и варим 5 минут;
Снимаем с плиты и даем 15 минут отстояться. Перед подачей посыпаем зеленью.

Рецепт паровых котлет:

Делаем фарш из куриного филе, прокрутив его в мясорубке вместе с луком и морковью;

К фаршу добавляем соль, муку и сырые яйца, тщательно вымешиваем;
Лепим котлетки и валяем в панировочных сухарях;
Готовим в пароварке 30 минут.

Рецепт грибного салата:

Отвариваем 100 г креветок и 2 тушки кальмара, очищаем морепродукты;
Нарезаем кальмаров кольцами, измельчаем свежий огурец и репчатый лук;
Перемешиваем, посыпаем молотым перцем, заправляем нежирной сметаной;
Добавляем зелень.

К оглавлению

Диета Анны Калашниковой: мнение диетологов

Как выглядит сейчас Анна Калашникова: фото

Методика похудения Анны Калашниковой представляет собой четко выстроенную систему правильного питания, где подразумевается отказ от калорийных продуктов, за счет чего происходит снижение веса. Кроме того, такая диета позволяет улучшить состояние здоровья благодаря разнообразному меню, поэтому ее рекомендуют многие диетологи своим пациентам.

Отзывы наших читательниц

Алина, 28 лет:

«Не зря хвалят эту диету – она действительно одна из лучших. Сижу на ней полгода, за этот срок ушло порядка 25 кг, при этом я не морю себя голодом и практически ни в чем себя не ограничиваю, кроме вредных продуктов»

Олеся, 33 года:

«Я бы не стала выбирать такую диету, если надо похудеть быстро. Лучше сесть на монодиету – это будет более эффективно, пусть и придется постоянно голодать»

Дарья, 39 лет:

«Почитала про особенности диеты Анны и решила опробовать ее на себе. Пока результатами довольна: за пару недель скинула 4 кг, но здесь имеют значение еще и тренировки в зале, куда я хожу почти каждый день».

К оглавлению

Фото

Источник: happy-womens.com

биография, муж, фото, операции, рост, ребенок, вес 2020, личная жизнь.

Анна Калашникова известна не только своими актерскими работами, но и интригами, слухами и сплетнями, которые витают вокруг нее. Сама знаменитость спокойно относится к тому, что она не сходит со страниц светской хроники, называя это издержками публичной жизни.

Подписчики Калашниковой с интересом следят за событиями ее биографии в Instagram, что говорит о популярности актрисы.

Детство и юношеские годы

Девочка появилась на свет в областном центре Ставропольского края, позже семья в полном составе переехала в Пятигорск. С раннего детства Аня мечтала стать актрисой, занималась танцами и музыкой, а также хорошо рисовала.

В 2001 году она окончила школу с отличием и уехала в Москву, где поступила на экономический факультет МАИ, который окончила с красным дипломом в 2007 году. Во время учебы девушка не переставала думать об актерской карьере: бегала по кастингам, снималась в рекламе, выступала в студенческой команде КВН. Тогда же ей удалось устроиться на «Мосфильм», в канцелярию Карена Шахназарова.

Это помогло начинающей актрисе получить эпизодическую роль в своем первом фильме – сериале «Простые истины». В дальнейшем она сыграла еще несколько малозаметных ролей в различных сериалах: «Счастливы вместе», «Детективы», «След», «Знахарь», «Час Волкова», «Шальной ангел». Порой ее имя даже не указывали в титрах.

Как лицо Анны Калашниковой изменилось с возрастом

Рассматривая фото актрисы, сделанные в юности, понимаешь, что ей не было нужды от чего-то избавляться или что-то добавлять: образ русской красавицы-южанки кажется совершенным. Глубокие карие глаза, брови в разлет, небольшой нос, высокие скулы и не слишком пухлые, но красивой формы губы – как говорится, такое лицо улучшать – только портить.

Однако наша героиня так не считала и сделала:

Коррекцию подбородка. Оказывается, артистка с детства страдала из-за асимметрии нижней трети лица. Поэтому, как только появилась возможность, она обратилась к специалисту эстетической медицины, который решил проблему, сделав пару уколов гиалуронового филлера. Поскольку эффект от процедуры сохраняется не более года, делать контурную пластику подбородка Анне Калашниковой приходится регулярно.

Операцию по удалению комков Биша. Мода на этот вид хирургической коррекции держится уже несколько лет. Так, в надежде придать щекам впалый вид, подкожную жировую клетчатку в этой зоне удалили многие зарубежные и отечественные звезды. Не устояла перед соблазном добавить образу загадочности и Анна Калашникова. Сегодня актриса негативно оценивает свое решение и предостерегает девушек от столь опрометчивого поступка. Тем более, что сейчас такой же эффект может быть получен проще и безопасней с помощью контурной пластики скул.

Пластику носа. Несмотря на отсутствие показаний к ринопластике (у Ани от природы небольшой изящный нос) актриса все же решила сделать его более «аристократичным». Для этого специалисту пришлось лишь приподнять немного кончик носа с помощью инъекции гиалуронового филлера.

По словам Анны Калашниковой, после пластики ей приходится чаще посещать косметолога, так как без специальных масок и инъекций витаминных препаратов ее кожа быстро обезвоживается и теряет эстетичный вид.

Карьера

Окончив МАИ, Анна решила стать дипломированной актрисой и прослушала курс актерского мастерства в Заочном народном университете искусств. После этого она на несколько лет переехала в США, где продолжила оттачивать навыки на актерских курсах и тренингах. Однако голливудская карьера Анны не сложилась, и она вернулась в Россию.

На родине девушка продолжила сниматься в сериалах, сыграла в нескольких театральных постановках. Однако дальне малозаметных ролей второго плана продвинуться не удалось. Тогда Анна решила сделать ставку на внешность и занялась модельным бизнесом.

Еще в Америке она подкорректировала форму груди и увеличила ее размер. Повысив самооценку, Анна приняла участие в нескольких конкурсах красоты и стала активно сниматься для глянцевых изданий, в том числе и эротических. Ее стали приглашать для съемок в клипах и различных телевизионных проектах.

Но главным «шоу» в жизни Калашниковой, благодаря которому она получила всероссийскую известность, стал роман с певцом Прохором Шаляпиным.

Личная жизнь

Наша героиня – высокая и стройная девушка с милым личиком и роскошными волосами. Вокруг нее всегда было много поклонников, которые преподносили Анне огромные букеты цветов и дорогостоящие подарки (ювелирные украшения, брендовую одежду, путевки в жаркие страны). Завистницы и недоброжелательницы утверждают, что она крутила романы с обеспеченными и женатыми мужчинами.

Вплоть до 2014 года личная жизнь Анны Калашниковой была скрыта от посторонних людей. Затем вся страна узнала о ее романе с молодым певцом Прохором Шаляпиным. В декабре 2014 года пара откровенно рассказала о своих отношениях и об «интересном» положении Ани. Все бы ничего, но тогда Прохор был женат на Ларисе Копенкиной. Постепенно роман Шаляпина и Калашниковой начал превращаться в «Санта-Барбару».

Представители разных российских каналов стали приглашать новоиспеченную парочку, а также Ларису поучаствовать в ток-шоу. Рейтинги этих передач взлетали до небес. Такой пиар принес неплохие деньги всем участникам любовного треугольника – Копенкиной, Шаляпину и Калашниковой.

Анна Калашникова и Прохор Шаляпин

Об их отношениях заговорили летом 2014 года. Прохор Шаляпин, уже заявивший о себе после женитьбы на Ларисе Копёнкиной (возлюбленная была старше его на 28 лет), завёл себе подругу – Анну Калашникову.

Многие люди, следившие за развитием их отношений, полагали, что вся история затевалась с целью пиара. Влюбленные старательно демонстрировали на публику неземную любовь, но путались в показаниях: то говорили, что познакомились на вечеринке у друга и влюбились с первого взгляда, то утверждали, что знали друг друга много лет, но все это время оставались приятелями.

Так или иначе, парочка не собиралась ходить вокруг да около, и уже в декабре 2014 скоро Анна и Прохор сообщили, что ждут ребенка. В социальных сетях пара демонстрировала «приданое» для малыша – кроватку, коляски, распашонки, но съезжаться Анна и Прохор не торопились.

Роды были тяжелыми – девушка угодила в реанимацию, врачи несколько часов вытаскивали ее с того света. Сын Анны Калашниковой появился на свет 20 марта 2020 года и получил имя Данил. Новоиспеченные родители радовались каждому достижению малыша и заговорили о свадьбе.

Влюбленные планировали провести роскошную церемонию бракосочетания 24 мая 2020, но планам не суждено было сбыться. Когда в эфире передачи «Пусть говорят» (в эфир она вышла 20 апреля) огласили результаты ДНК-экспертизы, оказалось, что отец ребенка Калашниковой вовсе не Шаляпин. «Пожалуйста, дайте мне некоторое время, чтобы я мог осмыслить все, что произошло!», – сказал певец в студии Андрея Малахова. После этого отношениям пары пришел конец. Прохор отменил свадьбу.

Имя настоящего отца своего ребенка Анна Калашникова так и не сообщила. О нем она рассказала лишь следующее: «Я встречалась с человеком, он был меня старше, человек бизнеса. Мы жили вместе». В 30-й день рождения Анны он порвал с ней, но именно тогда девушка и познакомилась с Шаляпиным. Причем, утверждала Калашникова, она честно предупреждала Прохора, что ребенок может быть и не его.

В октябре 2020 года Калашникову заподозрили в романтических отношениях с Алексеем Паниным. Обе знаменитости – любители провокаций и ажиотажа вокруг их персон, поэтому неудивительно, что многие поклонники сочли их отношения очередной пиар-акцией.

Романы с мужчинами и воспитание сына

Долгое время поклонники артистки ничего не знали про ее личную жизнь. Но уже с 2014 года ее отношения с мужчинами стали достоянием общественности. Вскоре журналисты сообщили, что у Анны роман с Прохором Шаляпиным. Более того, весной 2020 года она родила сына Даниила, отцом которого объявили певца. Но как оказалось, отцом ребенка является некий бизнесмен, который намного старше актрисы. Певица встречалась с мужчиной долгое время, но он так и не стал ее мужем, а через некоторое время вообще уехал, разорвав с ней все отношения.

Актриса и Прохор Шаляпин.

После расставания с возлюбленным девушка стала общаться с Прохором Шаляпиным. Когда Калашникова узнала о том, что скоро станет мамой, она не знала, кто является его отцом. Через некоторое время Шаляпин сделал певице предложение, но когда узнал, что не имеет отношения к малышу, разорвал помолвку. Сейчас бывшие возлюбленные продолжают общаться как друзья, а вот биологический отец Даниила так и не появился в их жизни. Калашникова переживает за мальчика, так как ему нужен отец. Она не против родить еще детей, чтобы у сына появилась младшая сестра или брат.

На фото Анна Калашникова с Григорием Аветовым.

Ее личная жизнь наладилась: сейчас артистка встречается с миллионером Григорием Аветовым, который задаривает ее вниманием и подарками. Артистка старается не афишировать подробности романа, однако, известно, что недавно она потеряла ребенка от своего избранника. Анна никогда не зависела от своих мужчин, зарабатывая неплохие деньги на участии в проектах, проведении вечеринок и выездных корпоративах. Недавно она приобрела в курортной зоне Испании дом, где будет отдыхать вся ее семья.

Анна Калашникова сейчас

В начале 2020 года Калашникова сделала еще одну операцию по увеличению груди и решила плотно заняться поисками достойного мужа. За помощью она собиралась обратиться к услугам профессиональной свахи Розы Сябитовой, но та ей отказала, посоветовав вырасти в духовном плане.

Также девушка попробовала себя как певица. В августе 2020 года вышел ее первый клип на песню «Две планеты». Однако слушатели встретили композицию прохладно, заявив, что петь Анна не умеет, и что вся шумиха с Шаляпиным и ребенком была искусственно создана ради пиара.

Интересные факты

Несколько любопытных вещей об Анне Калашниковой:

Аня вполне может построить успешную певческую карьеру. В августе 2020 года она представила на суд зрителей клип на композицию «Две планеты». Изначально в кадре должен был появиться Прохор Шаляпин, но после разрыва отношений с ним девушка выбрала для съемок парня модельной внешности.
С 2014 года Анна Калашникова является соведущей проекта «Я буду жить». Участники этой передачи – творчески одаренные люди с инвалидностью.
Ее рост составляет 173 см. Чтобы быть выше, Аня носит туфли на каблуках.
В ноябре 2012 года она участвовала в откровенной фотосессии для мужского журнала Maxim.
Калашникова Анна Игоревна является лицом ювелирной фирмы Lamore (Италия), косметического бренда «Лошадиная сила», фитнес-клуба «Зебра» (г. Москва). Также она рекламирует педикюрные носочки SOSU (Япония) и интернет-магазин «ПокупкаЛюкс» (модная одежда из Европы).

Как стала популярной

Аня Калашник родилась в столице нашей страны, городе Москва. Информации о том, где и как проходило ее детство мало, сама Аня неохотно делится этим со своей публикой. Известно, что в детстве она увлекалась танцами, даже планировала стать профессиональной танцовщицей. По мере взросления желание танцевать сошло на нет, но артистичность и амбициозность никуда не делась. В подростковом возрасте она продолжала искать свое призвание, пытаясь найти себе подходящую творческую деятельность, которая помогла бы ей раскрыть потенциал. В этом ей помогли социальные сети, преимущественно Тик Ток. Именно там, записывая небольшие и забавные ролики, она смогла привлечь большую аудиторию и стать по-настоящему известной. Также девушка снимает видеоблоги на ютуб, и активно ведет личный инстаграм. Сейчас Аня студентка, ведущая здоровый образ жизни. У нее много друзей, которые поддерживают ее увлечение видеоблогингом и часто помогают снимать новые ролики.

Анна Калашникова невероятно похудела. ФОТО

Калашникова впервые стала мамой почти год назад — тогда на свет появился мальчик Даниил, отцом которого стал 32-летний певец Прохор Шаляпин. Вскоре после родов Анна принялась худеть и об этом процессе сообщала подписчикам в микроблоге.

В интервью woman.ru Калашникова рассказывала, что до беременности при росте 173 см весила 50-51 кг, а во время последнего месяца ее вес поднялся до отметки «59». Сначала Анна пыталась похудеть сама, но у нее не получилось, поэтому актриса обратилась к диетологу Миле Гриценко, которая пообещала, что результаты будут быстрыми. Так оно и случилось: за первую неделю молодая мама избавилась от 3 кг, а за следующие пять — 6,5. «Поначалу я не то чтобы срывалась — просто не могла выполнить все предписания. Например, сложно было не ужинать после семи вечера или не пить чай сразу после обеда… Пришлось отказываться от некоторых своих привычек. С Милой мы постоянно на связи по WhatsApp — так она меня контролирует. Если я иду в ресторан, то обязательно высылаю ей меню и заказываю только то, что одобрит мой диетолог», — поведала Анна.

Так Анна Калашникова выглядела в мае прошлого года. На фото с Милой Гриценко

В своем микроблоге Калашникова делилась своим рационом на один день. Исходя из этой информации, стало понятно, что за завтраком молодая мама наслаждалась десертом из 3 ст. л. льняной каши, полбанана, ложки меда, 100 мл ряженки, в качестве перекуса довольствовалась стаканом кефира, на обед ела 40 г моцареллы, 10 помидоров черри и одно яйцо с оливковым маслом, а на ужин — 70 г запеченных овощей со специями, 30 г сыра и 100 г овощного салата.

Недавно Анна поделилась свежими снимками, которые дали понять, что от лишних килограммов Калашниковой не осталось и следа. Теперь модель и организатор мероприятий выглядит очень стройно и подтянуто. Похоже, что теперь Анна весит даже меньше, чем до родов.

Анна Калашникова была недовольна своим весом
Прохор Шаляпин и Анна Калашникова +8 Skatīties vairāk Любовь Новоселова / Фото: Instagram
Мы есть в Telegram, Twitter и Facebook. Подписывайтесь и будьте в курсе всего самого интересного!

Актриса Анна Калашникова и певец Прохор Шаляпин стали родителями

+ A —

У пары родился сын в четыре кило

У скандального артиста Прохора Шаляпина и его возлюбленной актрисы Анны Калашниковой родился первенец. Малыш появился на свет богатырем — при росте 55 см мальчик весит почти четыре кило.

Как стало известно «МК», роды проходили в одном из элитных медцентров Подмосковья, где рожали многие знаменитости. К слову, в этой же клинике на свет появились двойняшки Аллы Пугачевой и Максима Галкина. Ребенок Шаляпина родился довольно крупным — рост 55 см, вес — около четырех кило. Сейчас мама и новорожденный чувствуют себя хорошо. С именем счастливые родители еще не определились, но сообщили, что оно будет старославянским, вероятнее всего Федор или Иван.

Фото: Лилия Шарловская

За месяц до родов Анна в интервью нашему изданию рассказывала о приготовлениях к самому главному событию в ее жизни. Девушка рассказывала, что из суеверий ничего не покупала заранее, и лишь на девятом месяце приобрела множество вещей для малыша. Калашникова с улыбкой сообщила нам, что доверит Прохору разрезать пуповину. «Так что красота пупка нашего сына — на тебе!» — шутила она.

Фото: Лилия Шарловская

Напомним, что артисты хотели сохранить интересное положение Анны в тайне, поскольку Прохор состоял в браке с бизнесвумен Ларисой Копенкиной, и беременность стала итогом адюльтера певца. Но шила в мешке не утаить, и горячая новость стала достоянием общественности. В результате Прохор и Лариса не без шума развелись. И теперь любвеобильный брюнет собирается жениться на матери своего ребенка. Влюбленные собираются отметить свадьбу за границей. «Возможно даже, на необитаемом острове, подальше от папарацци», — сообщил Шаляпин «МК».

Фото: Лилия Шарловская

Прохор Шаляпин показал поместье своей 42-летней возлюбленной в Лас-Вегасе

https://ria.ru/20210809/shalyapin-1745075050.html

Прохор Шаляпин показал поместье своей 42-летней возлюбленной в Лас-Вегасе

Прохор Шаляпин показал поместье своей 42-летней возлюбленной в Лас-Вегасе — РИА Новости, 09.08.2021

Прохор Шаляпин показал поместье своей 42-летней возлюбленной в Лас-Вегасе

Певец Прохор Шаляпин в Instagram показал фотографии роскошного поместья своей 42-летней возлюбленной Татьяны Клаудии Девис в Лас-Вегасе. На фотографиях певец… РИА Новости, 09.08.2021

2021-08-09T16:33

шоубиз

прохор шаляпин

анна калашникова

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdn21.img.ria.ru/images/07e4/0b/13/1585307988_0:29:3069:1755_1920x0_80_0_0_aec864c0cc4815ccb4a187acf7824752.jpg

МОСКВА, 9 авг — РИА Новости. Певец Прохор Шаляпин в Instagram показал фотографии роскошного поместья своей 42-летней возлюбленной Татьяны Клаудии Девис в Лас-Вегасе. На фотографиях певец загорает около большого бассейна, позирует на фоне бильярдного стола, а также гуляет босиком по открытому внутреннему двору.»Небольшая экскурсия по нашему с Таней поместью в Лас-Вегасе 7000 фитов», – подписал публикацию певец.Ранее музыкант сообщал, что его возлюбленная заразилась коронавирусом, поэтому пришлось отменить дальнейшие отпускные планы – поездку в Мексику.О романе певца с канадской миллионершей стало известно зимой 2020-го года. Девис – владелица сети юридических контор. По словам Шаляпина, они познакомились случайно, когда женщина пригласила его выступить на своем мероприятии.Прохор Шаляпин известен громкими романами: так, одна из его избранниц – Лариса Копенкина – была старше певца на 28 лет. С музыкантом также встречалась артистка Анна Калашникова, которая впоследствии назвала эти времена «дичью».

https://ria.ru/20200529/1572148366.html

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2021

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdn25.img.ria.ru/images/07e4/0b/13/1585307988_338:0:3069:2048_1920x0_80_0_0_8e33254885efc4c507bf72f2ca7feb45.jpg

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

прохор шаляпин, анна калашникова

Анна Калашникова: краткая биография и творчество

В данном материале будет рассмотрена биография Анны Калашниковой. Речь идет о российской актрисе, ведущей и модели. Родилась она в 1984 г., 13 июня, в Ставрополе. Детство, а также юношеские годы девушки прошли в Пятигорске.

Биография

Анна Калашникова с раннего возраста хотела стать актрисой. Увлекалась танцами, музыкой и рисованием. Семья была небогатой, по этой причине средств на развитие всех ее талантов не было. Девочка сама училась и много читала. В школе была отличницей. Учебу окончила с золотой медалью. Без особого труда стала студенткой Московского авиационного института, поступила на факультет экономики.
В студенческие годы Анна Калашникова начала жить в столице. Она хотела получить образование в Щепкинском училище. Однако не успела в срок подать документы. Девушка с мечтой не рассталась. Она устроилась на работу в «Мосфильм» и попала к Карену Шахназарову в канцелярию.

Фильмы

Анна Калашникова получила первые роли во время учебы в Московском авиационном институте. Речь идет о небольших работах в проектах «Московские окна» и «Простые истины». Актриса прошла обучение в Америке. После возвращения в Россию начала активно сниматься в кино. В фильмографии у нее более двадцати ролей.
Актриса снялась в «Самой лучшей бабушке», «Неверной», «Спецкоре», «Анжелике», сериале «След», «Братанах-3», «Шальном ангеле». Активно участвует в музыкальных клипах и рекламных роликах.

Исполняется в кино эпизодические роли. Актрису можно заметить в различных проектах, среди которых «Наша Russia», «Даешь молодежь», «Город соблазнов». Сыграла в картине «Лопухи», совместно с Евгением Никишиным и Сергеем Писаренко. Также актриса сыграла в фильмах «Амазонки», «Мантикора», «Чиста вода у истока».

Личная жизнь

Анна имеет яркую внешность и отличную фигуру. Рост ее составляет 173 см, при весе 52 кг. У противоположного пола она пользуется популярностью. Актриса о личной жизни старалась не распространяться. Публично этот вопрос начал обсуждаться в 2014 г., когда в прессе появились сведения о том, что Прохор Шаляпин и Анна Калашникова состоят в романтической связи.

Сообщалось, что актриса забеременела от певца. В 2015 г., в марте, она действительно родила сына. Назвали его Даниилом. Шаляпин и Калашникова завели знакомство в караоке-баре. Случилось это за полтора года до появления на свет сына актрисы. Певец в то время состоял в браке с Ларисой Копенкиной.

Последняя почти вдвое его старше. Несколько раз журналисты замечали Прохора в компании незнакомки, но не могли установить ее личность. Когда тайна была раскрыта, разразился скандал. Копенкина публично передала супругу свидетельство о разводе. Случилось это на программе Андрея Малахова. Прохор и Анна начали чаще появляться перед камерами, демонстрировать чувства и посещать различные мероприятия.

Поклонники начали активно обсуждать возможность предстоящей свадьбы. Вскоре в открытых источниках появились совместные фото Анны и Михаила Терехина — бывшего возлюбленного Ксении Бородиной.

Скандалы

Анна Калашникова неоднократно оказывалась в центре весьма неоднозначных ситуаций. В 2017 г. она назвала «мошенником» менеджера Артема Ратникова, порекомендовав не обращаться к его услугам. По словам актрисы, она обратилась к специалисту за продвижением ее аккаунта в социальной сети. По словам Ратникова, актриса заказывала в том числе накрутку ботов.

Позднее Калашникова все же подтвердила, что речь шла об увеличении показателей любым способом. В 2017 в российской прессе возникли слухи о том, что Анна во время поездки в Дубай оказывала эскорт-услуги.

Девушка принимала участие в фотосессии для известного бренда. При этом администрация отеля, где проживали модели, попросила девушек не выдавать геолокацию гостиницы и не публиковать слишком откровенные снимки.

Анна Калашникова Биография » Звёзды.ru

Анна Калашникова родилась 13 июня 1984 года в Ставрополе, но ее детство и юношеские годы прошли в Пятигорске. С раннего возраста девушка знала, что станет актрисой.

Аня увлекалась музыкой и танцами, рисованием. Семья девочки была небогатой, поэтому денег на развитие талантов ребенка не было. Девочка училась сама, много читала. В школе она была отличницей, окончила учебу с золотой медалью и без проблем поступила на факультет экономики Московского авиационного института.

В студенческие годы началась жизнь Анны в столице. Калашникова хотела поступить в Щепкинское училище, но опоздала с подачей документов – прослушивания абитуриентов к тому времени уже закончились. Девушка не рассталась с мечтой – устроилась в «Мосфильм», в канцелярию к Карену Шахназарову.

Авиационный институт Анна Калашникова тоже окончила с отличием, но инженером-программистом работать не спешила. Вместо этого студентка прослушала краткий курс актерского мастерства и поступила в Московский университет культуры. Калашникова хорошо изучила российскую школу актерского мастерства и поступила в Академию кино в Лос-Анджелесе. В США Анна Калашникова много снималась в фильмах американских режиссеров, даже работала с Бреттом Рэтнером – режиссером, снявшим «Люди Х. Последняя битва», «Час пик» и другие киноленты.

После работы и учебы в США актриса вернулась в Россию. Девушка получила большое количество предложений и начала сотрудничать с известными отечественными режиссерами. Партнерами актрисы по съемкам стали видные представители российского кино: Крюков, Галустян, Светлаков, Филипчик и Венес.

Активно снимаясь в кино, Калашникова не забывает о музыке. В 2012 году на церемонии Fashion People Awards российская исполнительница получила премию в номинации «New Fashion дуэт» за композицию «Ты всё», записанную вместе с Эдом Шульжевским. В августе того же года Анна появилась в клипе «Давай, я тебя раздену» Сергея Зверева. Слушатели также отмечают песню Анны под названием «Его звали май». Сегодня Анна Калашникова сочиняет и записывает песни.

Творческая биография актрисы началась еще в студенческие годы. Первые роли Анна Калашникова получила в годы обучения в Московском авиационном институте. Это были небольшие роли в проектах «Простые истины» и «Московские окна». После учебы в Америке Анна вернулась в Россию и активно снималась в кино. В фильмографии актрисы более 20 ролей.

Актриса снялась в «Неверной», «Самой лучшей бабушке», «Шальном ангеле», «Спецкоре», «Братанах-3», «Анжелике» и двух сериях детективного сериала «След». Анна Калашникова много снимается в рекламных роликах и музыкальных клипах, играет эпизодические роли в кино. Калашникову можно заметить в молодежных проектах «Город соблазнов», «Наша Russia», «Даешь молодежь» и других. Вместе с Сергеем Писаренко и Евгением Никишиным актриса отметилась в ленте «Лопухи». Последними работами Анны стали роли в фильмах «Чиста вода у истока», «Мантикора» и «Амазонки».

Звездой российского кино Калашникову пока не назовешь. Но популярной девушка стала, правда, благодаря личной жизни. Видео с различных телепередач, в которых участвовала Анна, чаще вызывают интерес у российских зрителей.

Анна активна и в модельном бизнесе. С 2014 года Калашникова является лицом японского бренда JAPONICA RUSSIA. Также девушка стала рекламным лицом бренда «Лошадиная сила», сети фитнес-клубов «Зебра», ювелирных украшений L’AMORE и белья SilkWay.

В 2015 модель начала воплощать в жизнь идеи в fashion-индустрии совместно со своим братом Константином Калашниковым. Знаменитость открыла бутик российских дизайнеров QWINGS в ТРЦ «Европейский». В дальнейшем Анна планирует развиваться в этом направлении.

Калашникова не раз оказывалась в центре скандалов. В 2017 году в сети Инстаграм российская модель назвала SMM-менеджера московской компании Артема Ратникова «мошенником», посоветовав фолловерам не пользоваться услугами специалиста. Кроме того, знаменитость подчеркнула, что обратилась к Ратникову не за «накруткой», а за продвижением аккаунта в сети.

По словам самого Ратникова, Анна Калашникова обратилась с просьбой продвигать аккаунт в соцсети, «увеличить не только число реальных подписчиков, но и ботов». Позже в интервью представителям СМИ Калашникова все же отметила, что заплатила SMM-специалисту за накрутку фолловеров «любым способом».

Также в 2017 в российских СМИ появились слухи о том, что Калашникова предоставляла эскорт-услуги, когда была приглашена в Дубай. Девушка участвовала в фотосессии для одного известного бренда. Администрация отеля, в котором проживали модели, просила девушек не публиковать откровенные фото, не указывать геолокацию гостиницы. Руководство отеля заявило, что учреждение позиционируется как место отдыха для семьи с детьми, а пикантные изображения россиянок вредят репутации гостиницы. Сама Калашникова отметила, что подобное мероприятие — это просто выездная фотоссесия, а компромат в виде скринов переписки с указанными ценами на услуги назвала подделкой.

В 2016-м больше всего поклонникам Анны запомнился скандал с ДНК-тестом, который не подтвердил отцовство Прохора Шаляпина. Многие до сих пор осуждают знаменитость.

В программе «Прямой эфир», ведет которую Борис Корчевников, Яна Гривковская, подруга Анны, рассказала о своем видении скандальной истории. Сама Анна имя биологического отца своего сына не раскрывает.

Личная жизнь Анны Калашниковой

Анна Калашникова обладает яркой внешностью и сексуальной фигурой (рост Анны — 173 см, вес — 52 кг). Естественно, девушка пользуется популярностью у противоположного пола. Сама актриса ничего не рассказывала о поклонниках, личную жизнь держала под замком. Публично о ней заговорили в декабре 2014 года, когда пресса узнала о романе с Прохором Шаляпиным. Сообщалось, что якобы актриса беременна от певца — в марте 2015 года женщина родила сына Даниила.

Калашникова и Шаляпин познакомились в караоке-баре, за полтора года до рождения сына. Певец тогда еще был женат на Ларисе Копенкиной, которая почти вдвое старше его. Пару раз журналисты видели Прохора в компании незнакомой девушки, но никак не могли установить личность его спутницы. Когда тайное стало явным, разразился скандал. Копенкина публично вручила Шаляпину свидетельство о разводе в эфире программы Андрея Малахова.

Анна и Прохор начали часто появляться перед камерами, посещать разные мероприятия и демонстрировать свои чувства. Фанаты заговорили о предстоящей свадьбе. Вскоре в сети появились фотографии, на которых Анна мило общается с Михаилом Терехиным, бывшим возлюбленным Ксении Бородиной. Подобная информация лишь разогревала публику, поклонники с интересом следили за событиями.

В апреле 2016 года в студии программы «Пусть говорят» выяснилось, что ДНК-тест не подтвердил отцовство Шаляпина. Даниил родился не от Прохора, а от другого мужчины.

Поклонники актрисы внимательно следят за творчеством и новостями из личной жизни актрисы. В сети Инстаграм фолловеры также ожидают новых фотографий знаменитости. Особенно поклонники любят фото Анны до пластики и после.

В мае 2017 года Калашникова подтвердила слухи о том, что беременна вторым ребенком. О личности отца будущего малыша Анна пока умалчивает. Тем не менее, представители российских СМИ приписывали ей роман с Юрием Беззубовым, сыном Ларисы Копенкиной. Калашникова опубликовала фото, на которых она якобы вместе с Юрием. Фанаты заявили, что на снимках Беззубов, поскольку узнали мужчину по фигуре и часам. Подобные сообщения вызвали слухи о романе Анны с Юрием.

Фильмография Анны Калашниковой

«Чиста вода у истока»
«Террор любовью»
«Рыжая»
«Джокер»
«Амазонки»
«Обручальное кольцо»
«Счастливы вместе»
«Простые истины»
«Одноклассники»
«Я буду жить!»
«Братаны-3»

Анна Калашникова Собственный капитал, Заработная плата, Биография, Рост, Вес, Возраст, Вики, Знак зодиака, День рождения, Факт

Анна Калашникова оценивает собственный капитал , Биография, Возраст, Рост, Знакомства, Отношения, Зарплата, Доход, Автомобили , Образ жизни и многие другие детали были обновлены ниже. Давайте проверим, Насколько богат Анна Калашникова в 2019-2020 годах? Прокрутите ниже и проверьте более подробную информацию о текущем состоянии собственного капитала, а также о месячной / годовой зарплате, расходах и отчетах о доходах!

Биография

Анна Калашникова родилась в Великобритании 20 ноября 1972 г. .

Согласно Popular Bio, она — одна из успешных волейболисток. Она вошла в список тех известных людей, которым было рожденных 20 ноября 1972 года . Она — одна из самых богатых волейболисток, которая родилась в United Kingdomraine . Также она входит в список самых популярных волейболистов. Анна Калашникова — одна из самых известных людей в нашей базе данных с возрастом 47 лет .

93100 Возраст

Краткий профиль
Имя	Анна
Фамилия	Калашникова
Профессия	Волейболист	47 лет
Знак рождения	Козерог
Дата рождения	20 ноября 1972 г.
Место рождения	Великобритания Рейн
Страна	United Kingdomraine

Анна Калашникова Чистый капитал

Оценочный капитал Анны Калашниковой , зарплата, доход, автомобили, образ жизни и многие другие данные были обновлены ниже.Давайте проверим, Насколько богат Анна Калашникова в 2019-2020 годах?

Согласно Wikipedia, Forbes, IMDb и различным интернет-ресурсам, состояние известной волейболистки Анны Калашниковой в возрасте 47 лет составляет 1-5 миллионов долларов. Заработала она профессиональным волейболистом. Она из United Kingdomraine .

Собственный капитал Анны Калашниковой:
1-5 миллионов долларов

Расчетный капитал в 2020 году	На рассмотрении
Состояние за предыдущий год (2019)	На рассмотрении
Годовая зарплата	Пересматривается.
Источник дохода	Основной источник дохода Волейболист (профессия).
Статус проверки чистой стоимости	Не проверено

Возраст, рост и размеры тела

Анна Калашникова текущий возраст 47 лет . Рост Анны Калашниковой неизвестен и вес Нет в наличии справа. Размеры всего тела, размер платья и обуви будут обновлены в ближайшее время.

С кем встречается Анна Калашникова?

Анна Калашникова хранит свою личную и любовную жизнь в тайне.Проверяйте почаще, так как мы продолжим обновлять эту страницу новыми подробностями о взаимоотношениях. Давайте посмотрим на прошлые отношения Анны Калашниковой, бывших подруг и предыдущие связи. Анна Калашникова предпочитает не раскрывать подробностей семейного положения и развода.

Свидания — это этап в жизни человека, когда он или она активно поддерживает романтические отношения с разными людьми. Если двух не состоящих в браке знаменитостей видят вместе на публике, их часто называют «свиданием», что означает, что их видели вместе на публике, и неясно, являются ли они просто друзьями, стремятся к более интимным отношениям или имеют романтические отношения.

Факты об Анне Калашниковой

Возраст Анны Калашниковой 47 лет .
День рождения 20 ноября 1972 г. .
Рождение Знака Козерога.
Она входит в список 3583 популярных волейболистов.

Анна Калашникова — биография и творчество

В этом материале будет рассмотрена биография Анны Калашниковой. Речь идет о российской актрисе, главной роли и модели. Родилась 13 июня 1984 года в Ставрополе.Детство, как и юность, девочки прошли в Пятигорске.

Биография

Анна Калашникова с малых лет хотела стать актрисой. Увлекалась танцами, музыкой и рисованием. Семья была небогатой, по этой причине не было денег на развитие всех ее талантов. Сама девушка много училась и читала. В школе она была отличницей. Она закончила учебу с золотой медалью. Без особого труда она стала студенткой Московского авиационного института, поступила на экономический факультет.
В студенческие годы Анна Калашникова начала жить в столице. Она хотела получить образование в Щепкинском училище. Однако она не успела вовремя подать документы. Девушка с мечтой не расставалась. Она устроилась на Мосфильм и попала в кабинет к Карену Шахназарову.

Фильмов

Анна Калашникова получила первые роли во время учебы в Московском авиационном институте. Речь идет о небольших работах в проектах «Московские окна» и «Простые истины». Актриса обучалась в Америке.Вернувшись в Россию, она начала активно сниматься в кино. В фильмографии у нее более двадцати ролей.
Актриса снялась в фильмах «Лучшая бабушка», «Инвалид», «Спецкор», «Анжелика», сериалах «Дальше», «Братья-3», «Безумный ангел». Активно участвует в музыкальных клипах и рекламных роликах.

Исполнила эпизодическую роль в кино. Актрису можно увидеть в различных проектах, в том числе «Наша Россия», «Подари молодость», «Город соблазнов». Играл в фильме «Лопух» вместе с Евгением Никишиным и Сергеем Писаренко.Также актриса сыграла в фильмах «Амазонка», «Мантикора», «Чистая вода у источника».

Личная жизнь

У Анны яркая внешность и отличная фигура, рост 173 см, вес 52 кг. У противоположного пола это популярно. Актриса о своей личной жизни старалась не распространяться. Публично этот вопрос начал обсуждаться в 2014 году, когда в прессе появилась информация о том, что Прохор Шаляпин и Анна Калашникова состоят в романтических отношениях.

Сообщалось, что актриса забеременела от певца.В 2015 году, в марте, она действительно родила сына. Они назвали его Даниил. Шаляпин и Калашников познакомились в караоке-баре. Произошло это за полтора года до рождения сына актрисы. Певец на тот момент был женат на Ларисе Копенкиной.

Последняя почти вдвое старше. Несколько раз журналисты видели Прохора в компании незнакомца, но не могли установить ее личность. Когда секрет раскрылся, разразился скандал. Копенкина публично отдала мужу свидетельство о разводе.Произошло это в программе Андрея Малахова. Прохор и Анна стали чаще появляться перед камерами, проявлять чувства и посещать различные мероприятия.

Поклонники начали активно обсуждать возможность предстоящей свадьбы. Вскоре в открытых источниках появились совместные фото Анны и Михаила Терехина — бывшей возлюбленной Ксении Бородиной.

Скандалы

Анна Калашникова неоднократно оказывалась в центре очень неоднозначных ситуаций. В 2017 году она позвонила менеджеру «мошенника» Артему Ратникову, посоветовав не обращаться к его услугам.По словам актрисы, она обратилась к специалисту по продвижению своего аккаунта в социальной сети. По словам Ратниковой, актриса заказывала, в том числе, упаковку ботов.

Позже Калашникова все же подтвердила, что речь шла о повышении показателей каким-либо образом. В 2017 году в российской прессе ходили слухи, что Анна во время поездки в Дубай оказывала эскорт-услуги.

Девушка приняла участие в фотосессии известного бренда. При этом администрация отеля, где жили модели, попросила девушек не выдавать геолокацию отеля и не публиковать слишком откровенные снимки.

wta Статистика игроков — Оксана Калашникова

Выберите Другое PlayerAbanda, FrancoiseAbduraimova, NiginaAdamczak, MoniqueAhn, KristieAiava, DestaneeAksu, AylaAlbie, AudreyAleshina, KseniaAlexandrova, EkaterinaAl Набхани, FatmaAl-Наими, MubarakaAmanmuradova, AkgulAnderson, RobinAndreescu, BiancaAndrianjafitrimo, TessahAnisimova, AmandaAnshba, AminaAntonitsch, MiraAoyama, ShukoArango, EmilianaArcangioli, ManonArconada, УрГЭУ MaitaneArn, GretaArruabarrena, LaraAtawo, RaquelAzarenka, VictoriaBabel, OceaneBabos, TimeaBacsinszky, TimeaBadosa, PaulaBai, AlisonBains, NaikthaBandecchi, SusanBaptiste, HaileyBara, IrinaBarthel, MonaBartone, KamillaBarty, AshleighBassols Рибера, MarinaBaszak, WeronikaBeck, ChloeBegu, Ирина-CameliaBehbehani, SarahBektas, EminaBelgraver, JulieBellis , Кэтрин Бенчейх, Лаудмилла Бенчич, Белинда Бенуа, Мари Бертенс, Кики Бхатиа, Рия Босале, Рутуджа Билардо, Федерика Биррелл, Кимберли Блинкова, Анна Богдан, АнаБогдан, Елена Буассон, Лоисва Болквадайон, Анна Бойсон, Лоисва Болквадайон мангольд, EugenieBoulter, KatieBouzas Maneiro, JessicaBouzkova, MarieBozovic, AlexandraBrady, JenniferBrancaccio, NuriaBranstine, CarsonBrantmeier, ReeseBrengle, MadisonBroady, NaomiBronzetti, LuciaBucsa, CristinaBulgaru, Мириам BiancaBurel, ClaraBurrage, JodieBuyukakcay, CaglaBuzarnescu, MihaelaCabrera, LizetteCadantu, AlexandraCako, JacquelineCaregaro, MartinaCarter, HayleyCascino, EstelleCe, GabrielaCengiz, BerfuCepede Royg, VeronicaCepelova, JanaChan, Хао-ChingChan, LatishaChang, Кай-ChenChang, SophieCharaeva, AlinaCheapchandej, PatcharinChen, JiahuiChen, Пей HsuanChiesa, DeborahChoi, Джи-HeeChristian, KaitlynChristie, FreyaCibulkova, DominikaCirstea, SoranaClijsters, KimCocciaretto, ElisabettaCollard, Мелоди Коллинз, Даниэль Контрерас Гомес, Фернанда Корнет, Ализ Крачиун, Джорджия Кристиан, Жаклин ЦВЕТКОВИЧ, ТинаДабровски, Габриэла Данилина, Анна Данилович, Ольга Дарт, Харриет, Да Силва Фик, Габриэлла Дэвис, ЛоренДеуцей, Дэвиэла Дэвис, Лоренастиченко, Мартенастиа бензо, FrancescaDinu, CristinaDi Сарра, FedericaDiyas, ZarinaDjoubri, SalmaDodin, OceaneDoi, MisakiDolehide, CarolineDrahota Сзабо, DorkaDroguet, AubaneDuan, YingyingDulgheru, AlexandraDunne, KatyDzalamidze, NatelaEala, AlexEikeri, UlrikkeElbaba, JuliaEraydin, BasakErrani, SaraFalkner, ZivaFalkowska, WeronikaFayard, JulineFernandez, LeylahFerrando, CristianaFerro, FionaFetecau, IrinaFett, JanaFichman, SharonFlink, VarvaraFlipkens, KirstenFomina, AlenaForbes, AbigailFourlis, JaimeeFrech, MagdalenaFriedsam, Анна-LenaFruhvirtova, LindaGadecki, OliviaGalfi, DalmaGamiz, AndreaGao, XinyuGarcia, CarolineGarcia Перес, GeorginaGasanova, AnastasiaGasparyan, MargaritaGatica, BarbaraGatto-Monticone, GiuliaGauff , CoriGavrilova, DariaGeorges, MyrtilleGerlach, KatharinaGeuer, NicolaGibbs, NicoleGiorgi, CamilaGlatch, AlexaGleason, QuinnGlushko, JuliaGoerges, JuliaGolubic, ViktorijaGoncalves, Olga CristinaGorcheorts, EkaterinaGrabcheorts, Olga CristinaGorgodzeorts, Valentin Сара BethGroenefeld, Анна-LenaGrymalska, AnastasiaGuarachi, AlexaGumulya, BeatriceGuo, HanyuGuth, MaraHaas, BarbaraHaddad Maia, BeatrizHalemai, MyleneHalep, SimonaHan, Na-LaeHan, XinyunHanatani, NagiHarrison, CatherineHartono, ArianneHatouka, YuliyaHavlickova, LucieHayashi, ErinaHeisen, VivianHerazo Гонсалес, MariaHercog, PolonaHerrmann , SinaHertel, AniaHesse, AmandineHibi, MayoHibino, NaoHives, ZoeHobgarski, KatharinaHogenkamp, RichelHon, PriscillaHourigan, Paige MaryHozumi, EriHradecka, LucieHsieh, Su-WeiHsiehsieh, Yu-ChiehIakh, YsuinHsieh, Yu-Chieh,,,, ValentinaJabeur, OnsJacquemot, ElsaJaksic, JovanaJakupovic, DalilaJang, Су JeongJani, река-LucaJanicijevic, SelenaJiang, XinyuJimenez Kasintseva, VictoriaJones, FrancescaJones, MakennaJorovic, IvanaJurak, DarijaJuvan, KajaKaji, HarukaKalashnikova, OksanaKalieva, ElvinaKalinina, AnhelinaKalinskaya, AnnaKanepi, KaiaKania, PaulaKasatkina, DariaKato, МиюКава, КатаржинаКемпенаерс-Поч, CharlotteKenin, SofiaKerber, AngeliqueKeys, MadisonKhromacheva, IrinaKichenok, LyudmylaKichenok, NadiiaKiick, AllieKim, DabinKim, Na-RiKing, VaniaKlepac, AndrejaKlimovicova, LindaKnoll, XeniaKobori, MomokoKolodziejova, MiriamKomardina, AnastasiyaKonjuh, AnaKonta, JohannaKontaveit, AnettKorpatsch, TamaraKostic, NatalijaKostova, ElitsaKostyuk, MartaKovinic, DankaKozlova, KaterynaKrajicek, MichaellaKrawczyk, DesiraeKrejcikova, BarboraKrueger, AshlynKrunic, AleksandraKubka, MartynaKucova, KristinaKudermetova, PolinaKudermetova, VeronikaKudryavtseva, AllaKumkhum, LuksikaKung, LeonieKuwata, HirokoKuzmova, ViktoriaKuznetsova, SvetlanaKvitova, PetraLansere, SofyaLao, DanielleLapko, VeraLarsson, JohannaLazaro Гарсиа, AndreaLechemia, ElixaneLee, Я. -HsuanLemoine, QuirineLepchenko, VarvaraLi, AnnLiang, En-ShuoLinette, MagdaLisicki, SabineLister, CorneliaLiu, ClaireLiu, FangzhouLizarazo, YulianaLoeb, JamieLohoff, JuliaLottner, AntoniaLunamia, JamieLohoff, JuliaLottner, AntoniaLudenia, Jamie-Ludangia-Pia-Pia ShuyueMakarova, EkaterinaMaleckova, JesikaManasse, MaeganMandlik, ElizabethMarchetti, GiorgiaMarcinkevica, DianaMaria, TatjanaMarino, RebeccaMarozava, LidziyaMarshall, AmberMartic, PetraMartincova, TerezaMartinez Санчес, Мария JoseMasarova, RebekaMateas, MariaMattek-Сэндс, BethanieMatviyenko, LisaMcHale, ChristinaMcNally, CatherineMcPhee, KaylahMelichar-Мартинес, NicoleMelnikova, MarinaMendez, SeoneMertens, EliseMiddendorf, JuliaMihalikova, TerezaMilic, Эла NalaMilovanovic, ElenaMin, GraceMinella, MandyMinnen, GreetMirza, SaniaMishina, DariaMitu, AndreeaMladenovic, KristinaMolinaro, EleonoraMonnet, CaroleMontgomery, RobinMoore, JessicaMoore, TaraMorderger, TayisiyaMorderger, YanaMorra, CameronMrdeza, TerezaMuchova, KarolinaMuguruza, GarbineMuhammad , AsiaMuramatsu, ChihiroMurray Sharan, SamanthaMyers, AbbieNahimana, SadaNaito, YukiNamigata, JunriNara, KurumiNavarro, EmmaNeel, IngridNg, Kwan YauNiculescu, MonicaNiemeier, JuleNinomiue, AkotoNoela AkotoNoelug, AkotoNoelug и, RalucaOlianovskaia, ValeriiaOlmos, GiulianaOrmaechea, PaulaOsaka, MariOsaka, NaomiOsborne, AlexandraOsorio Serrano, Мария CamilaOstapenko, JelenaOsuigwe, WhitneyOz, IpekOzaki, RisaOzgen, PemraPaar, Лаура-IoanaPalicova, BarboraPanova, AlexandraPaoletti, MatildePaolini, JasminePapadakis, LenaPapamichail, DespinaPaquet, ChloePark, SohyunParks, AlyciaParmentier, PaulineParra Сантоха, ArantxaParrizas-Diaz, NuriaParry, DianePattinama Kerkhove, LesleyPavlyuchenkova, AnastasiaPegula, JessicaPeng, ShuaiPepelyaeva, VeronikaPera, BernardaPereira, RebecaPerez, EllenPerrin, ConnyPeschke, KvetaPeterson, RebeccaPetkovic, AndreaPieri, JessicaPigato, LisaPigossi, LauraPironkova, TsvetanaPiter, KatarzynaPlazas, JessicaPlipuech, PeangtarnPliskova, KarolinaPliskova, KristynaPodoroska, NadiaPonchet, JessikaPopovic, IvanaPotapova, AnastasiaPoulos, AnnerlyPrice, GabriellaPuig, MonicaPutintseva, YuliaQostal, LinajevársaRadisa, RadisaRadis, Linajevár khimova, KamillaRiske, AlisonRodina, EvgeniyaRodionova, AnastasiaRodionova, ArinaRodriguez, VictoriaRogers, ShelbyRompies, JessyRosatello, CamillaRosolska, AlicjaRossi, FedericaRoutliffe, ErinRus, ArantxaRuse, Елена-GabrielaRybakina, ElenaRybarikova, MagdalenaSabalenka, ArynaSafarova, LucieSakkari, MariaSamsonova, LiudmilaSamudio, AntoniaSanchez, Ана SofiaSanchez, MariaSanders , StormSantamaria, SabrinaSasnovich, AliaksandraSatralova, DenisaSavinykh, ValeriaSchmiedlova, Анна KarolinaSchoofs, BibianeSchunk, NastasjaSchuurs, DemiScott, KatrinaScotty, ElizabethSebov, KatherineSeguel, DanielaSevastova, AnastasijaSezer, MelisShalimova, EkaterinaShapatava, SofiaSharapova, MariaSharipova, SabinaSharma, AstraSherif, MayarShibahara, EnaShimizu, AyanoShinikova, IsabellaShvedova, Ярослава Зигемунд, Лаура Сильва, Эдем Симион, Оана Георгета Синякова, Катерина Сизикова, Яна Скамлова, Шанталь Смит, Алана Смиткова, Тереза Снигур, Дарья Сольер-Эспиноза, Сильвия Соррибес Тормэпелу, Сара Иппелупелу, Абсайль Торремо, Сара ри, DalilaSramkova, RebeccaSrebotnik, KatarinaStearns, PeytonStefani, LuisaStefanini, LucreziaStefkova, BarboraStephens, SloaneStojanovic, NinaStollar, FannyStosur, SamanthaStrakhova, ValeriyaStrycova, BarboraSuarez Наварро, CarlaSugnaux, TessSun, XuliuSutjiadi, AldilaSvitolina, ElinaSwan, KatieSwiatek, IgaSzabanin, NataliaSzabo, BrianaTalaba, GabrielaTan, HarmonyTanasugarn , TamarineTang, QianhuiTatishvili, AnnaTauson, ClaraTeichmann, JilThombare, PrarthanaTig, Patricia MariaTikhonova, AnastasiaTiron, EvelyneTjandramulia, OliviaTomljanovic, AjlaTomova, ViktoriyaToth, AmarissaTownsend, TaylorTrevisan, MartinaTsurenko, LesiaTurati, BiancaUchijima, MoyukaUdvardy, LucaUdvardy, PannaVan Der Хук, RosalieVandeweghe, CocoVan Uytvanck, AlisonVekic , DonnaVentura, ElysVesnina, ElenaVickery, SachiaVidmanova, DarjaVikhlyantseva, NataliaVoegele, StefanieVolynets, KatieVondrousova, MarketaVoracova, RenataVoskoboeva, GalinaWacanno, EvaWangleWangal, Isabel ngWang, XinyuWang, XiyuWang, YafanWatson, HeatherWebley-Смит, EmilyWhoriskey, CaitlinWickmayer, YaninaWilliams, Серена Уильямс, VenusWoolcock, BelindaWozniacki, CarolineWu, Фан-HsienXu, ShilinXu, YifanXun, Fang YingYadlapalli, PranjalaYang, ZhaoxuanYashina, EkaterinaYastremska, DayanaYerolymos, MargotYou, XiaodiYuan, YueZacarias , MarcelaZaja, AnnaZakharova, AnastasiaZamarripa, MaribellaZanevska, MarynaZarazua, RenataZarycka, AnastasiaZavatska, KatarinaZhang, ShuaiZhao, CarolZheng, QinwenZheng, SaisaiZheng, Wushuberman Zheng, Wushuber, SofyaZheng, Sophya Zheng, Wushuberger, Wushuberger

Дизайнер Анна Чибисова и ее модный бренд: гардероб для красивой жизни

Современные светские львицы не довольствуются богатством и славой.Жажда самовыражения заставляет их искать разные способы реализации талантов. Дизайнер Анна Чибисова и ее модный дом Maison d’Angelann — пример успешного превращения светской девушки в бизнес-леди. Чем примечателен бренд с ангельским названием и кто его возглавляет?

Биография дизайнера

Анна Чибисова родилась в Харькове (Украина). После окончания средней школы она поступила в Национальную юридическую академию. Ярослав Мудрый. Чибисова успешно окончила курс, став дипломированным юристом.

Несколько лет будущий дизайнер работал нотариусом в родном Харькове. Позже Чибисова стала соучредителем бренда женской одежды Maison d’Angelann.

Сегодня Анна живет в Париже. Она идейный вдохновитель, дизайнер и совладелец модного дома Maison d’Angelann. Чибисова находится в дружеских отношениях со звездами отечественной светской хроники: Аленой Шишковой, Викторией Бони, Ксенией Бурдой, Анной Калашниковой.

У дизайнера личный аккаунт в Instagram.Чибисова открыта к диалогу и активно общается с посетителями своей страницы.

Анна не посвящает публику подробностям своей личной жизни. Способ превращения харьковского нотариуса в светскую львицу также дает повод для гипотез.

Факты о моде

Анна Чибисова призывает подписчиков задавать себе вопросы. В ответах она обещает быть максимально откровенной. Что узнали пользователи соцсети:

Рост Анны Чибисовой — 175 см.Вес около 50 кг.
Знак зодиака — Стрелец.
Любимое блюдо — арбуз, самое необычное блюдо — лягушачьи лапки.
Яркое воспоминание из детства — плюшевый мишка, подаренный на 5 лет.
Идеалы красоты — Моника Беллуччи и Жизель Бундхен.
Среди курортов Анна Чибисова предпочитает Дубай.

Информация о модном бренде

Бренд Maison d’Angelann основан в 2014 году. Дом моды — плод дружбы и творческого сотрудничества Анны Чибисовой и Анжелики Святаш.Она жена украинского депутата.

В своей работе девушки уделяют особое внимание материалам и мастерству кроя. Продукция изготавливается из высококачественных тканей из шерстяных и шелковых волокон, натурального меха, кашемира и кожи.

С 2015 года Анжелика Святаш и Анна Чибисова сотрудничают со звездами. Две капсульные коллекции одежды были созданы совместно с Аленой Шишковой, моделью и бывшей спутницей рэпера Тимати.

В 2018 году телеведущая Виктория Боня стала звездным дизайнером Maison d’Angelann.

Чибисова и Святаш ориентируются на международный рынок. Maison d’Angelann имеет англоязычный веб-сайт, на котором можно покупать товары в Интернете из любой точки мира. Бутики бренда работают в Москве, Баку, Одессе и Дубае. В планах Maison d’Angelann — открытие фирменного магазина в Монако.

Анна Чибисова активно продвигает свой бренд в сети и в режиме реального времени. Она участвует в рекламных фотосессиях для каталогов Maison d’Angelann. Картины Анны — источник вдохновения для потенциальных клиентов.В своем аккаунте Чибисова наглядно демонстрирует, где и как носить одежду ее дизайна.

Фирменный стиль и ассортимент

Модельеры Анна Чибисова и Анжелика Святаш отдают предпочтение женственным силуэтам. В Maison d’Angelann в приоритете романтический чувственный стиль. Кружева, перья, вышивка и воланы служат элементами декора и подчеркивают гламурный характер туалетов. Maison d’Angelann производит несколько видов продукции:

Повседневные базовые вещи и трикотаж.
Вечерние туалеты.
Пляжная и купальная одежда.
Кожаные аксессуары.

Унитазы Maison d’Angelann призваны привлекать мужской образ, они идеально подходят для ярких акцентов и роскошного отдыха на фешенебельных курортах.

Анна Чибисова и ее дом моды — образец гармоничного баланса личного стиля и креативного дизайнерского почерка. Светская львица — муза и идеальный клиент собственного бренда. Одежда от Maison d’Angelann — воплощение шикарного и образцового гардероба для красивой жизни и неспешного времяпровождения.

рост, вес и другие интересные факты о звезде

Анна Седакова — человек, которому интересны все и все. Всего пять слов — Анна Седакова, рост, вес, параметры — могут на несколько часов усадить современного меломана возле телевизора. Певец особенно интересуется мужской половиной человечества. И это совсем не удивительно. Формы, красота и удачливость женщины делают ее желанной для представителей сильного пола и вызывают зависть у менее требовательных девушек.

Кто она и где?

Анна Владимировна Седокова родилась в середине декабря 1982 года в столице Украины.Ее мать была учительницей иностранного языка. О папе известно меньше, так как он ушел из семьи, даже когда Анна была маленькой. Любовь к музыке и танцам проявилась у девочки еще в детстве. В детстве много танцевала, пела, участвовала в разных концертах. Тогда сама Анна Седакова, биография, рост, вес будущей звезды эстрады никого не интересовали.

В шестнадцать лет Аня поняла, что хочет быть телеведущей. В этом возрасте она активно организовывала и проводила клубные вечеринки, которые ей очень нравились.Поэтому девушка решила освоить мастерство на профессиональном уровне и выбрала специальность диктора телевидения и радио в Киевском университете культуры.

На выбранном поприще Седакова преуспела. Благо, звучное имя Анны Седаковой, рост, вес, параметры как нельзя лучше вписываются в строгие правила шоу- и телебизнеса. Девушка работала на каналах «1 + 1», «ОТВ», и они дали ей путь в творческую жизнь.

От «ВИА Гры» к сольной карьере

Наверное, не все знают ведущую Анну Седакову, рост, ее вес, но большинство знают, что она была участницей популярной девичьей группы «ВИА Гра».Первое время девушка не прошла кастинг, так как была еще совсем молода для участия в коллективе. Эта неудача не расстроила ее, а, наоборот, сделала сильнее и трудолюбивее. Целью Ани было попасть в число участников группы.

В начале 2000-х сбылась мечта певца. Она была отобрана и стала солисткой «ВИА Гры». Она, Вера Брежнева и Надежда Грановская сделали коллектив «золотым». Связав свою жизнь с футболистом Валентином Белькевичем, Седакова покинула группу.С 2006 года началась сольная карьера Анны. Вместе с этим она продолжает много работать и телеведущей. Слава, признание, успех и востребованность снова стали лучшими друзьями красоты.

Анна Седакова: рост, вес

2013 год стал для певицы достаточно тяжелым (именно тогда она развелась со вторым мужем), но на ее внешности это никак не отразилось. Самым преданным поклонникам певицы, которые хотят знать о своей диве буквально все, сообщаем параметры девушки: ее рост — одна мера и 70 сантиметров, а вес — 61 килограмм.Однако во время беременности вес женщины, естественно, изменился.

Для Анны очень важна ее форма: потому что она публичный человек и всегда должна выглядеть на все 100% завершенной. Актриса постоянно старается поддерживать свои параметры в норме. Будучи беременной, она не слишком налегала на калорийные блюда, чтобы потом было легче сбросить лишние килограммы.

Молодая мама кормила ребенка грудью, хотя это могло испортить ее фигуру. Четыре месяца Седакова сидела на необходимой дочери диете.Благодаря этому ей удалось не только похудеть, но и разработать особую диету, которая помогает сегодня оставаться в прекрасной форме. Итак, Анна начинает свой день с завтрака, затем она обедает в 14.20, и на этом ее еда заканчивается. Разрешены только соки и много фруктов.

Советы от Анны Седаковой

Анна Седакова, рост которой соответствует зависти многих девушек, предлагает придерживаться следующей диеты, чтобы чувствовать себя хорошо и выглядеть королевой. Вам нужно съесть полноценный завтрак и обед.Это возможно только до трех часов дня. После 15.00 разрешено употребление большого количества фруктов и соков. Чтобы грудь, особенно после родов и кормления грудью, всегда была упругой, следует как можно больше выполнять упражнения, заключающиеся в отталкивании от пола. Вынашивая ребенка, не злоупотребляйте мучными и сладкими продуктами. И последнее — чтобы кожа на животе была подтянутой, на распаренное тело следует нанести скраб, в состав которого входят овсяные хлопья, морская соль и йогурт.Из этих продуктов нужно сделать однородную смесь и втереть ее в область живота.

Сухофрукты и без кексов

Анна — страстная любительница сладкого. Но это очень негативно сказывается на ее фигуре. Анна Седакова, рост которой указан выше, должна поддерживать себя в форме, а потому вынуждена ограничить или даже исключить из своего ежедневного рациона подобные блюда. Но жизнь без сладкого — это просто существование. Поэтому певица заменяет сухофрукты разными тортами-пирожками.Сушеные абрикосы, изюм, чернослив, инжир можно есть в неограниченном количестве, наслаждаясь их вкусом и получая полезные вещества для организма.

p >>

wta Статистика игроков — Анна Калинская

Сборка нуклеосомных массивов из рекомбинантных гистонов ядра и ДНК позиционирования нуклеосом

J Vis Exp.2013; (79): 50354.

, ¹, ¹, ¹, ¹, ¹ и ¹

Райан А. Рогге

¹ Биохимия и молекулярная биология, Государственный университет Колорадо

Анна А. Калашникова

¹ Биохимия и молекулярная биология, Государственный университет Колорадо

Ума М. Мутураджан

и молекулярная биология, Государственный университет Колорадо

Мэри Э.Портер-Гофф

¹ Биохимия и молекулярная биология, Государственный университет Колорадо

Каролин Люгер

¹ Биохимия и молекулярная биология, Колорадский государственный университет

Джеффри К. Хансен

^{1 ^{Биохимия и молекулярная биохимия Колорадо Государственный университет}}

¹ Биохимия и молекулярная биология, Государственный университет Колорадо

Abstract

Октамеры ядер гистонов, которые периодически расположены вдоль молекулы ДНК, называются нуклеосомными массивами. Нуклеосомные массивы получают одним из двух способов: очисткой из источников in vivo, или воссозданием in vitro из рекомбинантных гистонов ядра и тандемно повторяющейся ДНК для позиционирования нуклеосом. Преимущество последнего метода состоит в том, что он позволяет собрать более однородный по составу и точно расположенный массив нуклеосом. Эксперименты со скоростью осаждения в аналитической ультрацентрифуге дают информацию о размере и форме макромолекул путем анализа скорости, с которой они мигрируют через раствор под действием центробежной силы.Этот метод, наряду с атомно-силовой микроскопией, можно использовать для контроля качества, гарантируя, что большая часть матриц ДНК будет насыщена нуклеосомами после восстановления. Здесь мы описываем протоколы, необходимые для воссоздания миллиграммовых количеств длины и определенных по составу нуклеосомных массивов, подходящих для биохимических и биофизических исследований структуры и функции хроматина.

Ключевые слова: Клеточная биология, Выпуск 79, Хромосомные структуры, хроматин, нуклеосомы, гистоны, микроскопия, атомная сила (АСМ), биохимия, хроматин, нуклеосома, нуклеосомный массив, гистон, аналитическое ультрацентрифугирование, скорость оседания

Геномы эукариот не существуют в виде «голой» ДНК, а скорее уплотнены и организованы связанными белками.Эти комплексы ДНК и белка известны как хроматин. Основной повторяющейся единицей хроматина является нуклеосома. Нуклеосома состоит из октамера гистонов и 146 пар оснований ДНК, обернутых вокруг октамера гистонов примерно в 1,6 раза больше

¹. Октамер гистонов состоит из двух копий коровых гистонов h3A, h3B, h4 и h5 каждый. Октамеры ядер гистонов, которые периодически расположены вдоль молекулы ДНК, называются нуклеосомными массивами. Расширенная структура нуклеосомных массивов упоминается как 10 нм волокно или структура «бусинок на нити» и присутствует in vitro в условиях низкого содержания соли ².Волокно 10 нм способно конденсироваться в структуры более высокого порядка за счет уплотнения внутри массива и / или олигомеризации между матрицами ². Эти структуры более высокого порядка могут быть индуцированы в присутствии солей или на них можно влиять посредством связывания архитектурных белков хроматина с нуклеосомным массивом ^3,4. Уровни уплотнения хроматина обратно коррелируют со скоростью транскрипции in vivo ^5,6. Недавние исследования подчеркивают важность структурной организации геномов в таких процессах, как дифференциация, развитие рака и др. ^7,8.Использование нуклеосомных массивов для изучения структуры и функции хроматина стало широко распространенным. Здесь мы описываем метод сборки нуклеосомных массивов из рекомбинантных гистонов ядра и ДНК позиционирования нуклеосом.

Использование рекомбинантной ДНК с тандемными повторами последовательностей позиционирования нуклеосом позволяет реконструировать массивы, содержащие регулярно расположенные нуклеосомы. Двумя наиболее популярными позиционными последовательностями являются последовательность гена 5S рРНК и последовательность «601» ^9,10.Последовательность 601 была получена из экспериментов SELEX и более сильно позиционирует нуклеосомы, чем последовательность 5S ¹¹. Следовательно, линкерная ДНК массивов 601 более однородна. ДНК с тандемно повторяющимся позиционированием нуклеосом получают гель-фильтрацией ^4,12. Рекомбинантные гистоны очищают из E. coli в денатурирующих условиях ¹³. Использование рекомбинантных гистонов позволяет тщательно контролировать гистоновый состав нуклеосомных массивов.Например, коровые гистоны, несущие специфические мутации ¹⁴ или посттрансляционные модификации ^15,16, могут быть заменены коровыми гистонами дикого типа.

Эксперименты со скоростью оседания позволяют контролировать скорость осаждения макромолекул в растворе под действием приложенной центробежной силы ¹⁷. Это дает информацию о размере и форме макромолекул в образце. Таким образом, эксперименты со скоростью седиментации являются подходящим инструментом для изучения изменений состояния раствора в структуре волокон хроматина из-за конденсации хроматина ¹⁸.Важно отметить, что сначала необходимо использовать эксперименты со скоростью седиментации в качестве шага контроля качества при восстановлении массива нуклеосом. Если ДНК и нуклеосомы не объединены в надлежащем молярном соотношении, массивы могут быть недостаточно или перенасыщены коровыми гистонами. Таким образом, информация, полученная в результате экспериментов со скоростью седиментации, используется для того, чтобы гарантировать, что ДНК должным образом насыщена нуклеосомами. Важно использовать альтернативные методы для оценки насыщенности ДНК нуклеосомами, особенно при работе с ранее не охарактеризованной матрицей ДНК.Таким образом, мы также описываем метод анализа массивов нуклеосом с помощью атомно-силовой микроскопии (АСМ). АСМ — это мощный метод, который позволяет визуализировать эффекты ряда параметров, таких как уровень насыщения, эффект присутствия вариантов гистона или эффекты MgCl ₂ ^19,20. АСМ также применялась для изучения динамики нуклеосом с использованием покадровой визуализации ²¹. Собранные in vitro нуклеосомные 12-мерные массивы особенно подходят для исследований АСМ, потому что они принадлежат к правильному диапазону размеров для получения изображений АСМ ²².В настоящем исследовании мы использовали АСМ нуклеосомных массивов в качестве контроля качества, а также как средство подтверждения данных из AUC («увидеть — значит поверить»). Помимо простой визуализации, AFM позволяет измерять профили образцов по высоте в качестве дополнительной метрики.

Протокол

1. Сборка рекомбинантных ядерных гистонов в октамеры

Обоснование: Первым шагом в восстановлении нуклеосомного массива является получение октамеров нативного ядра гистонов из лиофилизированных рекомбинантных гистонов ядра.Гистоновые белки объединяют в равных молярных количествах и собирают в октамеры гистонов путем диализа образцов из денатурирующего буфера в буфер рефолдинга.

Очистите и лиофилизируйте рекомбинантные гистоны ядра (h3A, h3B, h4, h5), как описано ¹³.
Растворите приблизительно 5 мг каждого лиофилизированного гистона ядра в 3 мл разворачивающего буфера (6 М гуанидиния HCl, 20 мМ Трис pH 7,5, 5 мМ DTT). Дайте каждой аликвоте раствориться не менее одного часа.Следите за тем, чтобы на стенках емкости не осталось белка.
Измерьте оптическую плотность каждого гистона при 276 нм, используя разворачивающийся буфер в качестве эталона.
Рассчитайте молярность каждого гистона, используя их коэффициенты экстинкции (см. таблицу 1 для коэффициентов экстинкции гистонов Xenopus ). Сравните концентрацию гистона, определенную оптической плотностью, с лиофилизированной сухой массой и оцените, растворилась ли большая часть белка.
Определите, у какого гистона меньше всего молей, так как это будет предельное количество молей для всех гистонов.
Объедините гистоны в равных молярных количествах и разбавьте разворачивающим буфером до конечной концентрации 1 мг / мл.
Поместите образец в диализную трубку MWCO 6–8 кДа. Закройте трубку и поместите в 2 л холодного буфера для рефолдинга (2 М NaCl, 10 мМ Трис pH 7,5, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ β-меркаптоэтанол).
Диализируйте образец в течение 18 часов при 4 ° C с перемешиванием.Убедитесь, что диализная трубка может вращаться свободно и энергично, иначе гистоны могут выпасть в осадок.
Замените буфер для диализа дважды в течение 18 часов (, т.е. , меняйте буфер рефолдинга примерно каждые 6 часов, пока это не будет сделано). Даже если образуется осадок, не выбрасывайте образец, некоторое количество октамера может быть извлечено, хотя выход будет уменьшен.

Примечание. См. Этап 2.1–2.2, чтобы подготовить уравновешивание колонки на следующий день.

2. Очистка октамеров гистонов с помощью эксклюзионной хроматографии

Обоснование: После завершения раздела 1 образцы будут содержать октамеры гистонов, а также другие гистоновые комплексы, такие как агрегаты, тетрамеры h4 / h5 и димеры h3A / h3B.Октамеры гистонов будут очищены от этих других комплексов с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC).

Подключите колонку HiLoad 16/60 Superdex200 16/60 (S200) к системе FPLC. Убедитесь, что в систему не попадают пузырьки воздуха.
Очистите колонку S200 фильтрованной водой 0,2 мкм. Используйте скорость потока 0,3 мл / мин и установите предел противодавления 0,5 МПа. Убедитесь, что у вас достаточно воды, и дайте колонке очиститься в течение ночи.
Уравновесьте колонку S200 и петлю образца FPLC, используя буфер рефолдинга.Используйте 1 л отфильтрованного буфера для рефолдинга с размером пор 0,2 мкм. Пропускайте буфер для рефолдинга через колонку со скоростью 1 мл / мин и максимальным давлением 0,5 МПа в течение примерно 2 часов.
Уравновесьте центробежный концентратор Vivaspin (50 кДа MWCO) с 1 мл буфера для рефолдинга. Удалите образец из диализной трубки и центрифугируйте образец при 4 ° C для удаления любых осадков. Пипетируйте надосадочную жидкость пробы в концентратор. Сконцентрируйте образец до объема примерно 500 мкл.
Удалите концентрированный образец октамера в новый контейнер и промойте концентратор 1 мл буфера для рефолдинга.Сконцентрируйте ополаскиватель до 500 мкл и добавьте его в образец октамера. Это помогает утилизировать любой октамер, оставшийся в концентраторе.
Вращайте образец в микроцентрифужной пробирке объемом 1,5 мл в течение 5 минут при 10000 об / мин и температуре 4 ° C. Соберите супернатант и перенесите в новую пробирку. Это помогает удалить любой осадок перед загрузкой образца в FPLC.
Загрузите образец в колонку S200. Загрузите максимум 1,5 мл общего объема или 15 мг октамера за одну очистку.
Элюируйте образец, используя свежеприготовленный буфер рефолдинга. Используйте скорость потока 1 мл / мин и предел противодавления 0,5 МПа. Используйте два объема колонки (400 мл) буфера для рефолдинга и соберите фракции по 2 мл. Во время элюирования контролируйте оптическую плотность при 280 нм. Различные виды будут элюироваться в порядке уменьшения размера. Агрегаты гистона обычно элюируются примерно при 45 мл, октамер примерно при 65 мл и димер примерно в 84 мл (, рис. 1, ).
Проанализируйте фракции элюирования по интересующим пикам, прогнав образцы на 18-20% SDS-PAGE.Фракции, содержащие очищенные октамеры, должны иметь равные молярные количества четырех ядер гистоновых белков (, рисунок 1, ).
Объедините фракции, содержащие очищенные октамеры, и сконцентрируйте до ≤15 мг / мл с помощью центробежного фильтра Vivaspin. Если оставить в разбавленном виде, октамеры могут диссоциировать на димеры h3A / h3B и тетрамеры h4 / h5.
Определите концентрацию октамера путем измерения оптической плотности при 280 нм и рассчитайте, используя коэффициент экстинкции из таблицы 1 .
Октамеры гистонов можно кратковременно хранить в буфере для рефолдинга при 4 ° C. При длительном хранении октамеры будут более стабильными при -20 ° C и в 50% растворе глицерина. Октамеры, хранящиеся в глицерине, следует подвергнуть диализу в свежем буфере рефолдинга перед измерением оптической плотности и использованием при воссоздании массива нуклеосом.

3. Восстановление нуклеосомных массивов из ДНК и очищенных октамеров

Обоснование: Восстановление нуклеосомных массивов требует, чтобы октамеры гистонов и матричная ДНК были объединены в определенных молярных соотношениях.Смеси ДНК и октамеров гистонов в 2 М NaCl подвергаются ступенчатому диализу в буферы с уменьшающейся ионной силой. Постепенный переход на более низкую соль обеспечивает правильное образование нуклеосом. Получение массивов нуклеосом с желаемым уровнем насыщения гистоновым октамером матричной ДНК требует небольших тестовых реконструкций с последующими крупномасштабными препаративными реконструкциями. Соответствующие условия, определенные для небольших восстановлений, используются для руководства препаративным восстановлением.

Очистите тандемно повторяющуюся ДНК с позиционированием нуклеосом, как описано ^4,12.Вкратце, выделите плазмидную ДНК с помощью набора Qiagen GigaPrep или аналогичного продукта. Настройте переваривание рестрикционным ферментом, чтобы высвободить ДНК-матрицу и расщепить плазмидную ДНК до меньших размеров (≤700 п.н.). Затем матричную ДНК можно очистить от небольших остатков плазмидной ДНК с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC). Колонка с гравитационной подачей высотой около 115 см, заполненная гранулами Sephacryl S-1000, достаточна для очистки 601 ^207bp x 12mer ДНК.

Примечания: Для очистки плазмидной ДНК с меньшими затратами, но с повышенными усилиями можно использовать щелочной лизис с очисткой фенол / хлороформной ДНК, чтобы выделить плазмидную ДНК из E.coli ^23,24. Стратегии отделения матричной ДНК от плазмидной ДНК могут варьироваться в зависимости от изменения размера матричной ДНК. Для SEC важно настроить переваривание рестриктазами таким образом, чтобы максимально увеличить разницу в размерах между матричной и плазмидной ДНК.

Определите, какие молярные отношения ( r ) использовать для восстановлений. r равно отношению молей октамера к молям повтора ДНК. Для начальных мелкомасштабных испытаний r значений 0.9, 1 и 1.1 подходят, если целью является получение насыщенных массивов нуклеосом.
Приготовьте мелкомасштабные образцы, рассчитав количество октамера, которое нужно добавить примерно к 18 мкг ДНК для каждого тестируемого молярного отношения. Смешайте октамеры ДНК и гистонов. Конечная концентрация NaCl в образце должна составлять ≥2 М, а конечная концентрация ДНК должна составлять около 0,3 мкг / мкл. Условия конечного буфера для образца также должны включать 10 мМ Трис pH 7,8 и 1 мМ ЭДТА.
Теперь образцы готовы для диализа. Загрузите образцы в диализные трубки MWCO 12k-14k. Проанализируйте образцы против 2 л буфера с уменьшающейся ионной силой следующим образом.

Компоненты во всех буферах: 10 мМ Трис, pH 7,8, 1 мМ ЭДТА. Буфер 1 (добавить 1 М NaCl, 1 мМ ДТТ) в течение 5-6 часов. Буфер 2 (добавить 0,75 М NaCl, 1 мМ DTT) в течение ночи. Буфер 3 (добавить 2,5 мМ NaCl, 1 мМ DTT) в течение 5-6 часов. Буфер 4 (добавить 2,5 мМ NaCl, 0,1 мМ PMSF) в течение ночи.

Удалите образцы из диализной трубки и перейдите к разделам 4-6.Если мелкомасштабные образцы дают желаемые результаты, повторите шаги в разделах 3-6 для больших образцов.

Примечание. В целях экономии ресурсов мелкомасштабные образцы должны иметь минимальный объем, необходимый для последующих скрининговых анализов. Для того, чтобы иметь достаточно пробы для скорости седиментации и перечисленных здесь экспериментов АСМ, подходят 50 мкл пробы при 0,3 мг / мл ДНК. Размер крупномасштабных препаративных образцов зависит от их предполагаемого использования.Крупномасштабный образец следует готовить таким же образом, как и мелкомасштабные образцы.

4. Анализ скорости седиментации реконструированных нуклеосомных массивов

Обоснование: Эксперименты по скорости седиментации на аналитической ультрацентрифуге Beckman XL-A / I дают информацию о размере и форме молекул в растворе. Эксперименты по скорости седиментации, проводимые в условиях с низким содержанием соли, используются для определения степени, в которой воссозданные массивы насыщены нуклеосомами.

Разбавьте образец до абсорбции около 0,5 при 260 нм, используя буфер TEN (10 мМ Tris pH 7,8, 1 мМ EDTA, 2,5 мМ NaCl). Загрузите 400 мкл образца в ячейку с двухсекторным центральным элементом, с образцом на одной стороне и эталоном (буфер TEN) на другой ²⁵. Держите эталонный мениск выше, чем мениск образца (, т.е. , добавьте 420 мкл эталонного раствора).
Загрузите ячейки в ротор и выровняйте ячейки должным образом, используя решетки на дне ячеек и ротора ²⁵.Аккуратно протрите линзы ячеек сжатым воздухом.
Включите центрифугу XL-A / XL-I, вставьте ротор, прикрепите и закрепите оптику, как описано в руководстве. Откройте программу Proteome Lab и выберите файл: новый.
Настройте одно сканирование при 3000 об / мин и температуре 25 ° C. В разделе «Параметры» выберите «Остановить после последнего сканирования» и запустите радиальную калибровку (радиальная калибровка не требуется, если ротор был последним ротором, использованным в AUC).
Для каждой ячейки назовите образцы, выберите длину волны (260 нм), выберите оптическую плотность и выберите место для сохранения файла на вашем компьютере. Начните одиночное сканирование.
Используйте одиночное сканирование, чтобы определить подходящую длину радиального сканирования (, рис. 2A, ). Уменьшение длины сканируемой ячейки сокращает время выполнения. Однако не забудьте включить мениск образца и выдвинуть конец очень близко к или на дне ячейки.

Примечание. Однократное сканирование позволяет сократить область измерения, начав измерения непосредственно перед мениском образца (, рис. 2A, ).Большинство сканирований, созданных во время прогона AUC, должны иметь граничные фракции за мениском, а также стабильные плато ( Рисунок 2B, ). Грязные линзы на клетках AUC могут создавать сканирование с большими выбросами, что может повлиять на анализ данных. Программное обеспечение UltraScan включает руководство, которое является отличным источником информации относительно анализа аналитических данных ультрацентрифугирования ²⁶.

Используя панель управления XL-A / XL-I, введите скорость 0 и нажмите старт.Это заставит камеру центрифуги создать вакуум и позволить температуре в камере уравновеситься. Подождите 1 час, чтобы дать возможность установить температурное равновесие, прежде чем начинать цикл.
Используйте программное обеспечение, чтобы настроить разбег для желаемой скорости и количества сканирований. Более высокие скорости увеличивают разрешение, но следует собрать не менее 20 сканированных изображений (желательно больше), прежде чем образец осядет на дно ячейки. Удобно наложить несколько последних сканирований (выполненных в меню параметров), чтобы отслеживать ход выполнения и проверять наличие потенциальных проблем, таких как утечка ячеек.Следите за первой парой сканирований, чтобы убедиться в правильности работы.

5. Редактирование и анализ данных о скорости седиментации

Обоснование: Исходные данные о скорости седиментации должны анализироваться программой, которая дает распределение коэффициента седиментации с поправкой на диффузию. Эта информация, в свою очередь, указывает долю восстановленного образца, которая содержит данный уровень насыщения, , например. , если использовать 12-мерную матрицу ДНК, можно будет определить долю реконструированных массивов, содержащих 10, 11 и 12 нуклеосом / ДНК.

Используйте программное обеспечение для анализа данных AUC, такое как UltraScan, для редактирования данных ²⁶. Редактирование данных сканирования необходимо производить для каждой ячейки и создает набор данных для последующего анализа. Правильное редактирование сканов включает определение мениска образца, сокращение данных до интересующей области и определение базовой линии, а также областей плато (, рис. 2, ). На этом этапе нежелательные отсканированные изображения также можно удалить из набора данных. Однако, поскольку во время анализа можно удалить ненужные отсканированные изображения, рекомендуется сохранить все отсканированные изображения на этом этапе.
Мы настоятельно рекомендуем использовать усовершенствованный метод ван Холде-Вайше для анализа данных ²⁷. Этот метод анализа корректирует эффекты диффузии в ходе эксперимента и дает интегральное распределение коэффициентов седиментации. В частности, усовершенствованный метод ван Холде-Вайшета (реализованный в UltraScan) позволит включать сканированные изображения, в которых отсутствуют стабильные плато или которые содержат граничные фракции, которые не очистили мениск в анализе ²⁸.
Определите распределение коэффициентов седиментации для собранных массивов. Репрезентативные результаты для массивов нуклеосом из 601-12 (207 п.н., 12-мер) показаны на Фиг.3 .
Если одна из мелкомасштабных проб содержит массивы с желаемым диапазоном коэффициентов седиментации, повторите процесс в увеличенном масштабе, начиная с раздела 3. Если ни одна из мелкомасштабных проб не имеет надлежащего распределения коэффициентов седиментации, повторите мелкомасштабные испытания с новым диапазоном r, начиная с раздела 3.

6. Визуализация нуклеосомных массивов с помощью атомно-силовой микроскопии (АСМ)

Обоснование: АСМ позволяет визуализировать уровень насыщения нуклеосомных массивов. Этот метод дополняет скорость оседания с помощью AUC и расщепления рестрикционными ферментами в качестве анализа контроля качества.

Используя методы, описанные выше, получить хорошо насыщенный массив нуклеосом ( Рисунок 5A, ).
Приготовьте слюдяные слайды, обработанные APTES, поместив ~ 30 мкл 1: 1000 коммерческого разведения (Sigma-Aldrich (3-аминопропил) триэтоксисилан A3648-100ML) в раствор 0.Фильтрованная наночистая вода 22 мкм в течение 30 мин.
Через 30 минут промойте APTES фильтрованной водой и осторожно высушите их в потоке азота.
Поместите соответственно разбавленный образец массива нуклеосом (~ 1,5 нг / мкл) на предметное стекло и инкубируйте под крышкой при комнатной температуре в течение 15 мин.
Промойте образец фильтрованным буфером для образцов, высушите, как и раньше, и поместите предметное стекло на предметный столик для АСМ (в данном случае на атомно-силовой микроскоп Asylum Research MFP-3D).
Начните с визуализации сканов 2 x 2 мкм с 512 строками развертки. Подсчитайте количество нуклеосом, чтобы определить уровень насыщения ( Рисунок 5B ).
В идеале вы должны изобразить области на слайде с хорошо разделенными массивами нуклеосом.
Для изображений с более высоким разрешением можно получить сканирование 500 x 500 нм (, рис. 5C, ).
Изображения можно сглаживать и анализировать с помощью программного обеспечения MFP-3D, предоставленного Asylum.
Каждое изображение может быть разделено на четыре квадранта и увеличено в цифровом виде, чтобы получить более четкое представление о хорошо разделенных массивах, и несколько свободных линий могут быть проведены через массивы, а профили высоты получены для нуклеосом ( Рисунок 5C , правый график высоты панели и 5D ).
Несколько таких изображений необходимо проанализировать для каждого типа массива, включающего несколько сотен нуклеосом. Профили высот записываются, классифицируются и наносятся на график в MS Excel.

Репрезентативные результаты

Чтобы проиллюстрировать протокол, мы воссоздали нуклеосомные массивы из рекомбинантных гистонов Xenopus и ДНК, состоящей из 12 тандемных повторов по 207 п.н. последовательности позиционирования 601 (601 ²⁰⁷ x 12). Сначала мы собрали нативные октамеры из лиофилизированных гистонов ядра, а затем очистили октамеры методом FPLC с использованием колонки S200 (, рис. 1A, ). Более крупные комплексы элюируются раньше из колонки S200. Гистоны обычно элюируются в следующем порядке: неспецифические агрегаты гистонов, октамер гистонов, тетрамер h4 / h5 и димер h3A / h3B (, рис. 1A, ).Пики из колонки S200 анализировали с помощью SDS-PAGE. Гели очищенных фракций октамера должны указывать эквимолярные количества четырех гистоновых белков (, рис. 1B, ). Обратите внимание, что Xenopus h3A и h3B имеют молекулярные массы, которые различаются всего примерно на 200 Да, и, следовательно, они выглядят как одна полоса на гелях SDS. Тетрамеры h4 / h5 и димеры h3A / h3B будут элюироваться после пика октамера гистонов, но очень близко к нему. При выборе фракций, которые следует оставить, разумно отбросить фракции, появляющиеся ближе к концу пика октамера на хроматограмме.Эти фракции могут иметь повышенное количество неоктамерных гистоновых комплексов. В этом случае фракции 64-67 были объединены и сохранены для восстановления массива нуклеосом ( Рисунок 1, ).

В UltraScan есть два разных способа просмотра распределения коэффициентов седиментации с поправкой на диффузию, которое получается в результате расширенного анализа Ван Холде-Вайшета. Красная линия представляет собой интегральное распределение коэффициентов седиментации. Для любой заданной точки на графике ось Y показывает долю образца, которая имеет коэффициент седиментации, равный или меньший, чем значение, указанное на оси абсцисс.Таким образом, вертикальная линия указывает на однородный образец, в то время как неоднородный образец будет иметь кривую с положительным наклоном. Зеленая линия — производная интегрального распределения. Площадь под пиком пропорциональна фракции образца, имеющей этот коэффициент седиментации. Полностью насыщенные 601 ²⁰⁷ x 12 нуклеосомных массивов имеют коэффициент седиментации 29S ²⁹. Для образца, показанного в рис. 3 , данные показывают, что примерно 70% массивов являются насыщенными, а 30% — перенасыщенными.

Атомно-силовая микроскопия превратилась из новой техники в популярный дополнительный подход к изучению организации хроматина in vitro . Здесь мы использовали АСМ наряду с аналитическим ультрацентрифугированием, чтобы установить степень насыщения матрицы после восстановления. В фиг. 6, большинство массивов ~ 27S ( фиг. 4A, ), используемых для визуализации, содержали 10-11 нуклеосом ( фиг. 4B, ), демонстрируя превосходное соответствие между результатами AFM и AUC.Таким образом, полученные здесь результаты АСМ подтверждают этот подход и делают его надежным методом для характеристики массивов нуклеосом.

Гистоновый белок	Σ276, развернутые белки см ^-1 M ^-1	Молекулярный вес Да
h3A	4,350	13,960
h3B	7,250	13,774
h4	4,640	15,273	h4	4,640	15,273
	44080	108,486

Таблица 1.Коэффициенты экстинкции и молекулярные массы ядерных гистонов Xenopus laevis и октамера ренатурированных гистонов.

Рис. 1. A. Профиль элюирования из колонки S200, как описано в разделе 2. Небольшой пик около 44 мл обусловлен крупными агрегатами гистонов. Выдающийся пик при 67 мл — это октамеры гистонов. Широкое плечо от 76 до 90 мл содержит тетрамеры h4 / h5 и димеры h3A / h3B. B. 20% SDS-PAGE выбранных фракций из колонки S200.Следует собирать ранние фракции из пика октамера, поскольку они с наименьшей вероятностью будут загрязнены неоктамерными гистоновыми комплексами. В этом случае фракции 64-67 были объединены и сохранены для восстановления массива нуклеосом. Щелкните здесь, чтобы увидеть увеличенное изображение.

Рис. 2. A. Снимок экрана с помощью программного обеспечения ProteomeLab одного сканирования, полученного при 3000 об / мин (с добавленными метками). Обратите внимание, что образец не осаждается на такой низкой скорости. Одиночное сканирование используется для установки диапазона измерений для сканирования клеток AUC (шаг 4.6). B. Снимок экрана серии сканирований скорости седиментации, полученных с помощью программы UltraScan (с добавленными метками) ²⁶. Эта серия сканирований редактируется для создания набора данных для анализа (см. Шаг 5.1).

Рисунок 3. Снимок экрана с UltraScanII. Красная и зеленая линии — это два разных метода просмотра распределения коэффициентов седиментации в UltraScan. Красная линия — это интегральное распределение коэффициентов седиментации, а зеленая — производная.Дополнительную информацию по интерпретации можно найти в разделе результатов.

Рисунок 4. AFM. A. Профиль скорости седиментации для массивов 601 ²⁰⁷ x 12, собранных с октамером мыши, что указывает на средний коэффициент седиментации 27S. B. Те же самые массивы в A были отображены с помощью АСМ, и количество нуклеосом, подсчитанное на нескольких изображениях, было нанесено на график в MS Excel. График показал, что большинство массивов имело 10-11 нуклеосом, подтверждающих данные AUC. C. Сканирование 500 x 500 нм массивов нуклеосом 601 ²⁰⁷ x 12 с четко видимой линкерной ДНК. Верхняя правая панель — это кривая амплитуды, а средняя правая панель — это фазовая кривая для массива, показанного в C . Нижняя правая панель представляет собой тот же график высоты, показанный слева, но с произвольной линией, проведенной через нуклеосомы для определения профиля высоты нуклеосом. D. Высотные профили нуклеосом на приведенном выше изображении демонстрируют, что все нуклеосомы находятся в пределах 1.Высота 5-2,5 нм, как сообщалось ранее ⁴⁰.

Обсуждение

Модель нуклеосомных массивов — очень полезный инструмент для in vitro исследования структуры и функции хроматина. Например, они широко использовались для изучения механизма конденсации волокон хроматина в растворе ^30-34 и позволили получить рентгеновскую структуру тетрануклеосомы ³⁵. Совсем недавно они оказались полезными для расшифровки структурных эффектов конкретных вариантов ядра гистона, мутантов и посттрансляционных модификаций ^14-16,36.Здесь мы описываем общий метод сборки модельных нуклеосомных массивов из ДНК позиционирования нуклеосом и рекомбинантных гистонов ядра.

Восстановление нуклеосомных массивов из очищенных октамеров и 601 ²⁰⁷ x 12 ДНК является простым и включает несколько этапов диализа, которые последовательно снижают концентрацию NaCl с 2 М до 2,5 мМ. Самая трудная часть протокола — использовать значение r, которое дает желаемый уровень насыщения шаблона. Соответствующее значение r сначала определяется эмпирически в малом масштабе, а затем повторяется в более крупном масштабе для создания массивов нуклеосом, используемых для экспериментов.В нашем случае мы пытались получить 601 ²⁰⁷ x 12 шаблонов ДНК, в основном насыщенных 12 нуклеосомами на ДНК. Коэффициент седиментации полностью насыщенного нуклеосомного массива 601 ²⁰⁷ x 12 составляет 29 S, в то время как та же матрица ДНК только с 11 нуклеосомами на осадок ДНК при ~ 27S ²⁹. Таким образом, скорость седиментации в аналитической ультрацентрифуге обеспечивает очень чувствительный метод определения уровня насыщения нуклеосом после восстановления. Мы проанализировали наши данные, используя усовершенствованный метод ван Холде-Вайшета, который дает распределение коэффициентов седиментации с поправкой на диффузию.Эта информация важна, потому что она говорит о том, насколько однородным или неоднородным является образец после восстановления. Другими словами, для матрицы ДНК 601 ²⁰⁷ x 12 он указывает долю образца, которая имеет 12 нуклеосом на ДНК, 11 нуклеосом на ДНК, и т. Д. На рис. 3 показаны результаты расширенного анализа ван Холде-Вайшета массивов нуклеосом 601 ²⁰⁷ x 12, восстановленных при r 1,1, в котором примерно 30% массивов перенасыщены.Полезность выборки обычно связана с процентом насыщенных массивов, но зависит от экспериментов, в которых будут использоваться массивы. Для некоторых приложений могут потребоваться очень однородные и / или насыщенные массивы. Существует ряд методов улучшения однородности и насыщения нуклеосомных массивов.

В этом случае перенасыщенные массивы можно удалить путем селективного осаждения при добавлении MgCl ₂ ³⁷. Более однородные массивы также могут быть получены путем очистки образца с использованием центрифугирования в градиенте сахарозы, препаративного гель-электрофореза и ионообменной хроматографии ^10,13.Метод восстановления модифицированного нуклеосомного массива требует добавления к образцам короткой ДНК-конкурента перед восстановлением с помощью солевого диализа ^38,39. Это позволяет собирать массивы нуклеосом с избытком октамера гистонов без перенасыщения матрицы ДНК. Нуклеосомные массивы, восстановленные с использованием конкурирующей ДНК, вероятно, потребуют стадии очистки для удаления конкурирующей ДНК и дополнительных гистонов.

Даже после небольших сборок пилотных массивов возможно, что нуклеосомные массивы, воссозданные в большом масштабе, не будут насыщены должным образом.Чтобы избежать потери ДНК-матрицы и октамера гистонов в образце, можно фиксировать избыточные или недостаточные насыщенные массивы. Если массивы перенасыщены, в образец можно добавить дополнительную ДНК. Если массивы недостаточно насыщены, можно добавить дополнительный октамер, чтобы исправить это. Однако добавление октамера к массивам, уже подвергнутым диализу до состояния с низким содержанием соли, может привести к диссоциации октамера. При добавлении дополнительного октамера или ДНК к массивам, диализируйте массивы обратно в 2 M NaCl перед добавлением дополнительного октамера или ДНК к основной пробе.Повторите шаг диализа для фиксированных образцов от высокого до низкого содержания соли в соответствии с шагом 3.4. Количество октамера, добавляемого для корректировки массивов, можно оценить по коэффициентам седиментации для недонасыщенных массивов ²⁹. После корректировки выборки нуклеосомных массивов необходимо еще раз провести измерения уровня насыщения.

Хотя АСМ — мощный метод характеристики массивов нуклеосом, это сложный и трудоемкий процесс. Это делает его плохим методом для скрининга мелкомасштабных реконструкций, но отличным методом для характеристики крупномасштабных образцов и для изучения организации хроматина.Ранее мы использовали АСМ для визуализации «макрочастиц», генерируемых делеционной конструкцией macroh3A, которая «гиперчувствительна» даже к низким концентрациям MgCl2. Аналогичным образом, Montel et al. (2009) показали, что вариант h3A Bbd заставляет массивы нуклеосом быть более «открытыми» по сравнению с массивами дикого типа. Таким образом, AFM является надежным методом для контроля качества, а также для исследования структуры волокон хроматина в целом.

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами NIH GM45916 и GM66834 J.C.H. и стипендия Международного фонда синдрома Ретта А.К. Эта работа также была поддержана грантом NIH GM088409 и вкладом Медицинского института Говарда Хьюза в K.L.

Ссылки

Люгер К., Мадер А., Ричмонд Р., Кристал Сарджент Д. Структура ядерной частицы нуклеосомы при разрешении 2,8 А. Природа. 1997; 7 [PubMed] [Google Scholar]
Hansen JC.Конформационная динамика хроматинового волокна в растворе: детерминанты, механизмы и функции. Ежегодный обзор биофизики и структуры биомолекул. 2002; 31: 361–392. [PubMed] [Google Scholar]
Макбрайант С., Адамс В., Хансен Дж. Архитектурные белки хроматина. Хромосомные исследования. 2006. 14 (1): 39–51. [PubMed] [Google Scholar]
Хансен Дж. К., Аусио Дж., Станик В. Х., ван Холде К. Э. Гомогенные реконструированные олигонуклеосомы, свидетельство соле-зависимой укладки в отсутствие гистона h2.Биохимия. 1989. 28 (23): 9129–9136. [PubMed] [Google Scholar]
Шерлонг Х. Дж., Пренни Дж. Э., Нюборг Дж. К., Хансен Дж. К.. Активатор-зависимое ацетилирование хроматина p300 in vitro: усиление транскрипции за счет нарушения репрессивных нуклеосомно-нуклеосомных взаимодействий. Журнал биологической химии. 2010. 285 (42): 31954–31964. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Чирилло Л.А., Лин Ф.Р., Куэста И., Фридман Д., Ярник М., Зарет К.С. Открытие уплотненного хроматина факторами транскрипции раннего развития HNF3 (FoxA) и GATA-4.Молекулярная клетка. 2002. 9 (2): 279–289. [PubMed] [Google Scholar]
Nguyen C, Gonzales F. Структура хроматина, связанная с индуцированным метилированием подавлением генов в раковых клетках: корреляция доступности, метилирования, связывания MeCP2 и ацетилирования. Исследования нуклеиновых кислот. 2001. 29 (22): 4598–4606. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Cuesta I, Zaret KS, Santisteban P. Фактор вилки FoxE1 связывается с промотором тиреопероксидазы во время дифференцировки клеток щитовидной железы и изменяет структуру уплотненного хроматина.Молекулярная и клеточная биология. 2007. 27 (20): 7302–7314. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Simpson RT, Stafford DW. Структурные особенности ядерной частицы с фазированной нуклеосомой. Труды Национальной академии наук США, 1983; 80 (1): 51–55. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Lowary PT, Widom J. Новые правила последовательности ДНК для связывания с высоким сродством с октамером гистонов и позиционирования нуклеосом, направленного на последовательность. Журнал молекулярной биологии. 1998. 276 (1): 19–42.[PubMed] [Google Scholar]
Lowary P, Widlund H, Cao H. Мотивы последовательностей и свободная энергия выбранных природных и неприродных последовательностей ДНК, позиционирующих нуклеосомы. Журнал молекулярной биологии. 1999; 288: 213–229. [PubMed] [Google Scholar]
Гордон Ф, Люгер К., Хансен Дж. N-концевые хвостовые домены основного гистона функционируют независимо и аддитивно во время соль-зависимой олигомеризации нуклеосомных массивов *. Журнал биологической химии. 2005. 280 (40): 33701–33706. [PubMed] [Google Scholar]
Люгер К., Рехштайнер Т.Дж., Ричмонд Т.Дж.Экспрессия и очистка рекомбинантных гистонов и восстановление нуклеосом. Методы молекулярной биологии (Клифтон, Нью-Джерси), 1999; 119 (4): 1–16. [PubMed] [Google Scholar]
McBryant SJ, Klonoski J, et al. Детерминанты функции N-концевого домена гистона h5 во время олигомеризации нуклеосомного массива: роли аминокислотной последовательности, длины домена и плотности заряда. Журнал биологической химии. 2009. 284 (25): 16716–16722. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Ma Shogren-Knaak, Fry CJ, Peterson CL.Стратегия лигирования нативного пептида для расшифровки модификаций нуклеосомных гистонов. Журнал биологической химии. 2003. 278 (18): 15744–158. [PubMed] [Google Scholar]
Лу Х, Саймон М. Влияние диметилирования h4K79 и триметилирования h5K20 на структуру нуклеосом и хроматина. Nat Struct Mol Biol. 2008. 15 (10): 1122–1124. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Аусио Дж. Аналитическое ультрацентрифугирование для анализа структуры хроматина. Биофизическая химия.2000. 86 (2-3): 141–153. [PubMed] [Google Scholar]
Хансен Дж., Крайдер Дж., Демелер Б., Флетчер Т. Аналитическое ультрацентрифугирование и электрофорез в агарозном геле как инструменты для изучения сворачивания хроматина в растворе. Методы. 1997. 12 (1): 62–72. [PubMed] [Google Scholar]
Montel F, Menoni H, et al. Динамика отдельных нуклеосом контролирует путь конденсации хроматина: прямая атомно-силовая микроскопия, визуализация вариантного хроматина. Биофизический журнал. 2009. 97 (2): 544–5453.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Muthurajan UM, McBryant SJ, Lu X, Hansen JC, Luger K. Линкерная область macroh3A способствует самоассоциации нуклеосомных массивов. Журнал биологической химии. 2011. 286 (27): 23852–23864. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Шляхтенко Л.С., Лушников А.Ю., Любченко Ю.Л. Динамика нуклеосом, выявленная методом покадровой атомно-силовой микроскопии. Биохимия. 2009. 48 (33): 7842–7848. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Lohr D, Bash R, Wang H, Yodh J, Lindsay S.Использование атомно-силовой микроскопии для изучения структуры хроматина и ремоделирования нуклеосом. Методы (Сан-Диего, Калифорния) 2007; 41 (3): 333–341. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Dyer PN, Edayathumangalam RS, et al. Восстановление ядер нуклеосомных частиц из рекомбинантных гистонов и ДНК. Методы в энзимологии. 2004; 375: 23–44. [PubMed] [Google Scholar]
Сэмбрук Дж., Рассел Д. Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор; 2001. [Google Scholar]
Balbo A, Zhao H, Brown PH, Schuck P.Сборка, загрузка и юстировка аналитической ячейки для образцов ультрацентрифуги. J. Vis. Exp. 2009. с. e1530. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
Демелер Б. UltraScan: комплексный пакет программного обеспечения для анализа данных для аналитических экспериментов по ультрацентрифугированию. Современное аналитическое ультрацентрифугирование: методы. 2005. С. 210–230.
Holde KV, Weischet W. Граничный анализ экспериментов по скорости седиментации с монодисперсными и малодисперсными растворенными веществами. Биополимеры. 1978. 17 (6): 1387–1403.[Google Scholar]
Демелер Б., ван Холде К.Э. Анализ скорости седиментации сильно неоднородных систем. Аналитическая биохимия. 2004. 335: 279–288. [PubMed] [Google Scholar]
Хансен Дж., Лор Д. Сборка и структурные свойства массивов субнасыщенного хроматина. Журнал биологической химии. 1993; 8: 5840–5848. [PubMed] [Google Scholar]
Routh A, Sandin S, Rhodes D. Длина нуклеосомного повтора и стехиометрия линкерного гистона определяют структуру волокна хроматина.Труды Национальной академии наук США, 2008; 105 (26): 8872–8877. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Zhou J, Fan JY, Rangasamy D, Tremethick DJ. Поверхность нуклеосом регулирует уплотнение хроматина и связывает его с репрессией транскрипции. Структурная и молекулярная биология природы. 2007. 14 (11): 1070–1076. [PubMed] [Google Scholar]
Дориго Б., Шальч Т., Кулангара А., Дуда С., Шредер Р. Р., Ричмонд Т. Дж.. Массивы нуклеосом выявляют двухстартовую организацию волокна хроматина.Science (Нью-Йорк, Нью-Йорк), 2004; 306 (5701): 1571–1573. [PubMed] [Google Scholar]
Коррелл С.Дж., Шуберт М.Х., Григорьев С. Короткие нуклеосомные повторы воздействуют на модуляцию вращения на укладку волокон хроматина. Журнал EMBO. 2012. 31 (10): 2416–2426. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Mcbryant SJ, Krause C, Woodcock CL, Hansen JC. Белок-регулятор молчаливой информации 3, SIR3p, связывается с хроматиновыми волокнами и собирает архитектуру гиперконденсированного хроматина в присутствии соли.Молекулярная и клеточная биология. 2008. 28 (11): 3563–3572. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Schalch T, Duda S, Sargent DF, Richmond TJ. Рентгеновская структура тетрануклеосомы и ее значение для волокна хроматина. Природа. 2005. 436 (7047): 138–1341. [PubMed] [Google Scholar]
Fan JY, Gordon F, Luger K, Hansen JC, Tremethick DJ. Существенный вариант гистона h3A.Z регулирует равновесие между различными конформационными состояниями хроматина. Структурная биология природы.2002. 9 (3): 172–176. [PubMed] [Google Scholar]
Carruthers LM, Bednar J, Woodcock CL, Hansen JC. Линкерные гистоны стабилизируют внутреннюю зависящую от соли укладку нуклеосомных массивов: механистические ответвления для сворачивания хроматина более высокого порядка. Биохимия. 1998. 37 (42): 14776–14787. [PubMed] [Google Scholar]
Huynh VAT, Robinson PJJ, Rhodes D. Способ восстановления in vitro определенного «30 нм» хроматинового волокна, содержащего стехиометрические количества линкерного гистона.Журнал молекулярной биологии. 2005. 345 (5): 957–968. [PubMed] [Google Scholar]
Dorigo B, Schalch T. Складывание хроматиновых волокон: потребность в N-конце гистона h5. J. Mol. Биол. 2003. 2836 (03): 85–96. [PubMed] [Google Scholar]
Цянь Р.

рост и вес, параметры фигуры, секреты красоты, пластика, как худеет, диета, фото.

Анна Калашникова: рост, вес и параметры фигуры

Сидит ли на диетах Анна Калашникова

Пластические операции

Как худеет Анна Калашникова: меню и рецепты

Диета Анны Калашниковой для похудения: меню

Рецепты меню

Диета Анны Калашниковой: мнение диетологов

Отзывы наших читательниц

Фото

биография, муж, фото, операции, рост, ребенок, вес 2020, личная жизнь.

Детство и юношеские годы

Как лицо Анны Калашниковой изменилось с возрастом

Однако наша героиня так не считала и сделала:

Карьера

Личная жизнь

Анна Калашникова и Прохор Шаляпин

Романы с мужчинами и воспитание сына

Анна Калашникова сейчас

Интересные факты

Как стала популярной

Анна Калашникова невероятно похудела. ФОТО

Рекомендуем

Актриса Анна Калашникова и певец Прохор Шаляпин стали родителями

Прохор Шаляпин показал поместье своей 42-летней возлюбленной в Лас-Вегасе

Анна Калашникова: краткая биография и творчество

Биография

Фильмы

Личная жизнь

Скандалы

Анна Калашникова Биография » Звёзды.ru

Анна Калашникова Собственный капитал, Заработная плата, Биография, Рост, Вес, Возраст, Вики, Знак зодиака, День рождения, Факт

Биография

Анна Калашникова Чистый капитал

Возраст, рост и размеры тела

С кем встречается Анна Калашникова?

Факты об Анне Калашниковой

Анна Калашникова — биография и творчество

Биография

Фильмов

Личная жизнь

Скандалы

wta Статистика игроков — Оксана Калашникова

Дизайнер Анна Чибисова и ее модный бренд: гардероб для красивой жизни

Биография дизайнера

Факты о моде

Информация о модном бренде

Фирменный стиль и ассортимент

рост, вес и другие интересные факты о звезде

Кто она и где?

От «ВИА Гры» к сольной карьере

Анна Седакова: рост, вес

Советы от Анны Седаковой

Сухофрукты и без кексов

wta Статистика игроков — Анна Калинская

Сборка нуклеосомных массивов из рекомбинантных гистонов ядра и ДНК позиционирования нуклеосом

Райан А. Рогге

Анна А. Калашникова

Ума М. Мутураджан

Мэри Э.Портер-Гофф

Каролин Люгер

Джеффри К. Хансен

Abstract

Протокол

1. Сборка рекомбинантных ядерных гистонов в октамеры

2. Очистка октамеров гистонов с помощью эксклюзионной хроматографии

3. Восстановление нуклеосомных массивов из ДНК и очищенных октамеров

4. Анализ скорости седиментации реконструированных нуклеосомных массивов

5. Редактирование и анализ данных о скорости седиментации

6. Визуализация нуклеосомных массивов с помощью атомно-силовой микроскопии (АСМ)

Репрезентативные результаты

Обсуждение

Раскрытие информации

Благодарности

Ссылки

Добавить комментарий Отменить ответ